一種多囊卵巢動物模型的建立方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種多囊卵巢動物模型的建立方法及其應用，包括將試驗用動物至于實驗空間；對動物進行持續光照，并觀察動物卵巢是否出現多囊卵巢綜合征的病理特征。本發明專利技術的技術方案通過持續光照成功誘導實驗用動物出現PCOS主要的病理特征，建立多囊卵巢動物模型，能夠適用于多囊卵巢綜合征機制研究及相關病理機制研究和藥物療效研究。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥
，涉及一種動物模型，尤其涉及一種多囊卵巢動物模型的建立方法及其應用。
技術介紹
多囊卵巢綜合征(PolycysticOvarianSyndrome，PCOS)是女性代謝異常與生殖內分泌功能障礙相關聯的一種特殊疾病。臨床表現圍繞月經紊亂同時可伴有肥胖、痤瘡等癥狀。病理生理出現了高雄激素血癥(睪酮T，雄烯二酮A2.、脫氫表雄酮DHEA)、高黃體生成素(LH)血癥、高胰島素(INS)血癥等；PCOS肥胖、胰島素抵抗，及高胰島素血癥成為2型糖尿病和心腦血管疾病的高危因素。由于PCOS病因的復雜性及異質性，其發病機制的研究仍處于探索之中。遺傳和環境因素的相互作用在其發病過程中起重要作用。良好的動物模型對于研究PCOS的發病機制至關重要。國內外已建立了多個PCO動物模型，有雄激素(脫氫表雄酮、睪酮或雙氫睪酮)誘導、雌激素誘導、胰島素聯合促性腺激素誘導、芳香化酶抑制劑誘導等。但是迄今尚沒有一種動物模型可以呈現出PCOS全部的病理生理狀態。因此，現有技術中由于PCOS發病機制不明確，現有模型大多數僅模擬病理狀態，需要經過激素類藥物誘導動物出現高雄激素等多囊卵巢病理表現，用于研究藥物對病理表現的干預及機制研究，缺少對該疾病如何出現高雄激素等病理特征的機制研究。專利CN1558383公開了一種早老性癡呆大鼠動物模型的構建方法，通過將大鼠置于持續光強度為10～1000Lux的光照環境中，光照環境中的時間為1～10周。該類模型可用于研究在AD發病早期或過程中可能的機制以及其之間的內在聯系，具體內容包括β-淀粉樣蛋白增多及聚集、骨架蛋白TauAD樣異常過度磷酸化、神經原纖維纏結樣病理變化、蛋白激酶與磷酸酯酶的相對活性失衡及行為異常等，并可以用于篩選治療早老性癡呆藥物、評價治療早老性癡呆方法以及研究早老性癡呆發病機制的非損傷性大鼠動物模型的構建方法。但該專利不能應用于多囊卵巢綜合征中。專利CN101025869公開了一種慢性復合應激動物模型的制備方法，具體操作是，取成年WISTAR大鼠，采用垂直旋轉、睡眠剝奪、捆綁和夜間光照4種應激原無規律交替應激動物6周，每天6H，即制成本專利技術慢性復合應激動物模型，本動物模型模擬人類所處生存狀態產生的應激效應，可用來研究慢性復合應激引起的大鼠學習和記憶能力增強的神經生物學機制。但該專利任不能應用于多囊卵巢綜合征中。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了一種多囊卵巢動物模型的建立方法。為達到上述目的，具體技術方案如下：一方面，提供了一種多囊卵巢動物模型的建立方法，包括以下步驟：步驟1，將試驗用動物至于實驗空間；步驟2，對動物進行持續光照，并觀察動物卵巢是否出現多囊卵巢綜合征的病理特征。優選的，所述動物為大鼠。優選的，所述實驗空間包括通風換氣、自由進食及飲水的環境。優選的，步驟2中包括將實驗用光源至于暗室中，通過實驗用光源對動物進行持續光照。優選的，所述暗室包括支架和設于所述支架上的遮光布簾。優選的，所述實驗用光源上還設有調控開關。優選的，所述步驟2中上持續光照時間為90～120天。優選的，所述步驟2中通過每天對動物陰道涂片觀察大鼠卵巢周期的變化。優選的，所述步驟2中多囊卵巢綜合征的病理特征包括陰道上皮持續角化、雄激素性脫發/脫毛、卵巢病理出現多囊樣改變、血清檢測雄激素水平升高。另一方面，提供了多囊卵巢動物模型的建立方法的應用，應用于多囊卵巢綜合征形成機理研究、光照致各組織器官損傷機制研究、各種治療藥物對多囊卵巢綜合征的治療療效及機制研究。相對于現有技術，本專利技術的技術方案通過持續光照成功誘導實驗用動物出現PCOS主要的病理特征，建立多囊卵巢動物模型，能夠適用于多囊卵巢綜合征機制研究及相關病理機制研究和藥物療效研究。附圖說明構成本專利技術的一部分的附圖用來提供對本專利技術的進一步理解，本專利技術的示意性實施例及其說明用于解釋本專利技術，并不構成對本專利技術的不當限定。在附圖中：圖1是本專利技術實施例的實驗空間的示意圖；圖2是本專利技術實施例的建立流程示意圖。具體實施方式下面將結合本專利技術實施例中的附圖，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。需要說明的是，在不沖突的情況下，本專利技術中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。以下將結合附圖對本專利技術的實施例做具體闡釋。本專利技術的實施例的一種多囊卵巢動物模型的建立方法，包括：首先，如圖1中所示，將試驗用動物至于實驗空間。試驗用動物優選為大鼠。其中，實驗空間，即清潔級大鼠飼養室，采用大于動物飼養箱的金屬空間支架6構造基本結構制作，高效遮光布簾3遮蓋支架6，該布簾3即可以起到遮光作用，又不影響動物暗室的透氣性。兩側安裝靜音排風進風扇(圖1中所示進風扇1、排風扇2)。空間支架6頂部安裝實驗用照射光源4，暗室中微電子調控開關5，可以調節光照時間和節律。綜上，本專利技術實施例的實驗專用可調節光照空間，即動物實驗用暗室具有良好的通風換氣設備。另如圖1中所示，光照室制作完成后，利用實驗用光源4調節進行每天24小時的持續照射。然后，如圖2中所示，將造模用大鼠放置于專用實驗空間，每日自由進食及飲水，開始造模過程。優選持續光照時間90天。并進行對照組實驗對比，對照組采用常規實驗室12小時光照、12小時黑暗飼養。如圖2中所示，在造模期間，每天對大鼠進行陰道涂片，觀察大鼠卵巢周期的變化。在本專利技術的實施例中，造模30天，大鼠開始出現陰道涂片不規則的發情周期。造模90天，90％大鼠出現陰道上皮持續角化(類似PCOS無排卵狀態)。此操作在需要用于觀察藥物對造模周期干預的實驗中必須使用，以方便觀察藥物對卵巢功能的保護作用，以造模結束狀態為觀察點的實驗可以省略此操作。此外，造模結束時，大鼠表現出明顯的體毛無光澤，及大塊區域脫落等現象，類似PCOS高雄激素性脫發癥狀。同時，90天造模結束時，通過大鼠腹主動脈采血，Elisa檢測血清睪酮水平明顯較對照組升高。大鼠卵巢病理出現表面白膜增厚，其下有許多不同階段的卵泡(包括閉鎖卵泡)，以及顆粒細胞層減少，類似PCOS卵巢病理表現。本專利技術實施例的動物模型旨在模擬現代生活自然環境，制作出新型的非藥本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1，將試驗用動物至于實驗空間；步驟2，對動物進行持續光照，并觀察動物卵巢是否出現多囊卵巢綜合征的病理特征。

【技術特征摘要】
1.一種多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1，將試驗用動物至于實驗空間；
步驟2，對動物進行持續光照，并觀察動物卵巢是否出現多囊卵巢綜合征
的病理特征。
2.如權利要求1所述的多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，所述
動物為大鼠。
3.如權利要求2所述的多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，所述
實驗空間包括通風換氣、自由進食及飲水的環境。
4.如權利要求3所述的多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，步驟
2中包括將實驗用光源至于暗室中，通過實驗用光源對動物進行持續光照。
5.如權利要求4所述的多囊卵巢動物模型的建立方法，其特征在于，所述
暗室包括支架和設于所述支架上的遮光布簾。
6.如權利要求5所述的多囊卵巢動物模型的建立方法...

【專利技術屬性】
技術研發人員：賈麗娜，康學智，
申請(專利權)人：華東醫院，
類型：發明
國別省市：上海;31