厚垣普可尼亞菌航天誘變菌株及其應用制造技術

本發明專利技術公開了厚垣普可尼亞菌航天誘變菌株及其應用。本發明專利技術將厚垣普可尼亞菌株搭載神舟8號飛船進行航天誘變，以未搭載的原始菌株為對照，將初步篩選得到的厚垣普可尼亞菌航天誘變菌株進行了包括菌落生長速度、菌絲干重、產孢量和致病力等生物學檢測并測定了耐鹽性以及對苯菌靈的抗性，最終篩選得到一株耐鹽性好以及對根結線蟲卵的致病能力強的突變株Pc?m?130，其具有較強的抗逆性，能在鹽堿土壤中穩定地長期存活。本發明專利技術進一步提供了含有所述航天誘變菌株的生防制劑及其在防治根結線蟲中的應用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及厚垣普可尼亞菌(Pochoniachamydosporia)航天誘變突變株，尤其涉及厚垣普可尼亞菌航天誘變突變株Pc-m-130及由其制備的生防制劑，本專利技術進一步涉及該突變株在生物防治根結線蟲中的應用，屬于厚垣普可尼亞菌突變株的篩選及其應用領域。
技術介紹
厚垣普可尼亞菌(Pochoniachamydosporia＝Verticilliumchlamydosporium)屬半知菌亞門(Deuteromycotina)絲孢綱(Hyphomycetes)，是一種重要的噬植物線蟲真菌(林茂松,沈素文.厚壁輪枝菌防治南方根結線蟲研究初報[J].生物防治通報,1994,10(1):7-10)，能夠有效防治南方根結線蟲(Meloidogyneincognita)、花生根結線蟲(Meloidogynearenaria)、大豆胞囊線蟲(Heteroderaglycines)等植物寄生線蟲(汪來發,楊寶君,關文剛等.淡紫擬青霉和厚壁輪枝霉防治南方根結線蟲[J],四川農業大學學報,1998,16(2):231-233；劉暢.厚垣輪枝菌V10菌株對南方根結線蟲的寄生和防治作用.廣西農業科學,2004,35(2)：135-137.)。厚垣普可尼亞菌主要通過內寄生的方式寄生于卵及雌蟲體內，通過大量繁殖使線蟲死亡，其對植物寄生線蟲卵和雌蟲的寄生，在自然條件下對植物寄生線蟲的控制起著重要的作用，是最具潛在開發價值的生防真菌之一(裘維蕃,高仁恒,劉杏忠.根結線蟲的生物防治簡介[J].貴州農學院學報,1996,15(2):51-55.)，厚垣普可尼亞菌具有較廣的適應能力，易于培養，且可以寄生多種植物線蟲，因而有利于田間防治的應用。同時，其作為線蟲生防菌替代化學農藥在一些國家已經開始推廣應用，并取得了一些成績。但由于土壤生態系統的復雜性，特別是土壤抑菌作用，導致生防菌的應用受到限制。航天誘變育種技術作為一種有效的誘變育種新技術，已經在創造特異突變基因資源和培育作物新品種方面顯示出重要的作用。已有報道，中國神舟八號飛船搭載松褐天牛幼蟲上分離的球孢白僵菌，篩選出了殺蟲速度較快，致病力高的誘變菌株，在林間防治松褐天牛具有很大的應用潛力(王曦茁,汪來發,馬建偉,郭民偉,劉洪劍,董廣平.松褐天牛球孢白僵菌高毒力航天誘變菌株的篩選[J].昆蟲學報,2014,(11):1299-1305.)；同時，神舟八號飛船搭載植物線蟲生防菌淡紫擬青霉山東菌株后，也使誘變菌株生物學特性與原始菌株存在不同程度的分化，篩選出了在生長特性和致病力方面發生較大幅度正向變異的優良菌株(王源,汪來發,王曦茁,朱天輝,.航天搭載淡紫擬青霉的生物學效應[J].核農學報,2014,(11):1933-1940.)。由此說明，航天誘變的變異率高，變異類型豐富，有益變異增多，為選育優良菌株提供更多的機會，為選育符合生產需求且抗逆性強的優良菌株提供了新的途徑。航天誘變育種技術作為一種有效的誘變育種新技術，同其它誘變育種一樣，航天誘變處理后必需通過各種性狀的檢測，以判斷航天誘變的效應和篩選得到特定變異的目標品種(農向群,張澤華,胡攀,高松,張禮生.航天誘變對昆蟲病原真菌的生物學效應[J].菌物學報,2006,25(4):674-681.)。作為生物農藥，厚垣普可尼亞菌同其它植物線蟲生防菌一樣盡管具有化學農藥不可比擬的諸多優點，但同時也存在生長緩慢、且受環境影響較大，防治效果不穩定以及自身抗逆性較差等缺點，因此有必要對線蟲生防真菌厚垣普可尼亞菌進行航天誘變，篩選出產孢子量高、殺線蟲能力強、對農藥有很好抗性的的誘變菌株，使其更好地發揮防治植物線蟲的效果。
技術實現思路
本專利技術的主要目的是將厚垣普可尼亞菌(Pochoniachamydosporia)進行航天誘變以期篩選獲得一株耐鹽性好、對根結線蟲卵的致病能力高的性能優異的突變株；本專利技術的另一目的是將所獲得的性能優異的突變株應用于根結線蟲的生物防治。本專利技術的上述目的是通過以下技術方案來實現的：本專利技術將培養活化的厚垣普可尼亞菌進行航天搭載(神舟八號)，航天誘變完成后，以未搭載的厚垣普可尼亞菌原始菌株作為對照，比較航天誘變菌株在菌落形態、色素變化、孢子形態、生長速度、產孢量、致病力、耐鹽性和苯菌靈抗性等方面的變異性。本專利技術發現將厚垣普可尼亞菌經航天誘變后，產生了豐富的性狀變異。從總體上看，航天誘變對生長速度、產孢量、致病力、耐鹽性和苯菌靈抗性等很多性狀表現出了不同的的變異趨向和幅度。生長速度、產孢量或致病力等是篩選生物防治菌株的重要指標，航天誘變使這些特性表現出不同變異趨向和幅度，證明了航天誘變是非定點的、廣泛性的、正負雙向性的，且誘變位點多、誘變率高，所導致的生物體變異有生理性變異也可能有遺傳性變異(農向群，張澤華，胡攀，高松，張禮生.航天誘變對昆蟲病原真菌的生物學效應[J].菌物學報，2006，25(4)：674～681)。為篩選得到耐鹽性好、對根結線蟲卵的致病能力高的適合于生物防控的突變株，本專利技術對初步篩選得到的厚垣普可尼亞菌航天誘變菌株進行了形態、色素、菌絲及孢子形態、菌落生長速度、菌絲干重、產孢量和致病力等生物學檢測并測定了各航天誘變菌株的耐鹽性以及對苯菌靈的抗性：厚垣普可尼亞菌航天誘變菌株對南方根結線蟲的致病力產生了明顯的變異。突變菌株Pc-m-130對南方根結線蟲卵的寄生率為94.30％，較原始菌株對南方根結線蟲卵的寄生率有了顯著的提升，其較高的寄生率對于田間生防實踐具有重要意義。經航天誘變后的菌株對耐鹽性出現了不同類型的變異。第一種類型為隨著鹽濃度的升高生長速率加快，到達一定值后隨著鹽濃度的升高生長速率減慢，其最適生長的鹽濃度為0.10-0.15mol/L。第二種類型為隨著鹽濃度的升高生長速率減慢。方差分析顯示，Pc-m-10對高鹽環境(0.50mol/L)的耐受性與原始菌株Pc之間差異顯著(P<0.05)，該突變菌株能在高鹽環境下穩定生長，說明該突變菌株具有較強的抗逆性，能在鹽堿土壤中穩定地長期存活。將航天誘變后的突變菌株進行苯菌靈抗性篩選，篩選結果發現突變體菌株出現了對苯菌靈抗性的不同變異，其中，突變體Pc-m-6對苯菌靈有較好的抗性，其對苯菌靈(30μg/mL)的抗性與原始菌株Pc之間差異顯著(P<0.05)，并且突變體Pc-m-10能在該濃度苯菌靈條件下穩定生長。在實際應用中根結線蟲的防治歷來以化學藥劑防治為主，而施用化學藥劑嚴重影響土壤微生物生長和繁殖，甚至危及有益微生物(孔凡玉,王靜.煙其中草根結線蟲病研究進展[J].沈陽農業大學學報,2001,32(3):232-235.)。因此，在提高生防菌防效的同時提高生防菌的耐藥性，可以有效用于病害防治(祝明亮，張克勤，李飛天等.煙草根結線蟲生物防治研究進展[J].微生物學通報，2004，31(6)：95-99.)。厚垣普可尼亞菌航天突變體Pc-m-6對苯菌靈(終濃度為30μg/mL)有很好的抗性，說明該菌株與苯菌靈等常用殺菌劑具有良好的兼容性，這將非常有利于厚垣普可尼亞菌在生產上推廣應用。最終，本專利技術從眾多的航天突變體菌株中篩選得到一株性能優異的適用于生物防控的突變株Pc-m-130，該突變株能在高鹽環境下穩定、快速生長、對根結線蟲卵的致本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一株厚垣普可尼亞菌(Pochonia?chamydosporia)航天誘變突變株Pc?m?130，其特征在于，其微生物保藏號是：CGMCC?No.12514。

【技術特征摘要】
1.一株厚垣普可尼亞菌(Pochoniachamydosporia)航天誘變突變株Pc-m-130，其特征在于，其微生物保藏號是：CGMCCNo.12514。2.權利要求1所述的厚垣普可尼亞菌航天誘變突變株Pc-m-130在防治植物害蟲中的應用。3.按照權利要求2所述的應用，其特征在于：所述的植物害蟲是線蟲。4.按照權利要求3所述的應用，其特征在于：所述的線蟲是根結線蟲。5.一種防治植物害蟲的生防制劑，其特征在于，包括：權利要求1所述的厚垣普可尼亞菌航天誘變突變株Pc-m-130的孢子粉或發酵液以及載體。6.按照權利要求5所述的生防制劑，其特征在于...

【專利技術屬性】
技術研發人員：汪來發，王曦茁，孟繁麗，樸春根，田國忠，劉洪劍，
申請(專利權)人：中國林業科學研究院森林生態環境與保護研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11