包含顆粒狀脫細胞組織的混合凝膠制造技術

本發明專利技術提供：一種混合凝膠，其中包含顆粒狀脫細胞組織(將來自動物的生物組織進行脫細胞處理所得的脫細胞生物組織粉碎而獲得)、纖維蛋白原和凝血酶；包含該混合凝膠的細胞培養基材；該混合凝膠的制作方法；以及包含顆粒狀脫細胞組織和生物組織粘合劑的試劑盒。本發明專利技術的混合凝膠具有促進干細胞的分化和功能獲取的效果、以及對各種疾病的治療效果。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及再生醫療
，具體而言，涉及包含：將使來自動物的生物組織進行脫細胞所得的組織(脫細胞生物組織)粉碎而獲得的顆粒狀脫細胞組織、纖維蛋白原和凝血酶的混合凝膠及其利用方法。
技術介紹
將來自他人的生物組織的移植片進行移植時，接受移植者側組織對移植片的排斥反應成為問題。作為這種問題的解決方法，期待著開發人工組織。作為原材料，嘗試了各種高分子，但由于這些原材料與生物組織的相容性低，因此有時會發生移植片與生物組織的接合部位的脫落或發生感染。因此，為了提高與生物組織的相容性，開發了如下技術：使用從生物組織中除去細胞而殘留的支持組織即脫細胞生物組織作為移植片的技術；使用將這樣的脫細胞生物組織粉碎而獲得的組織(顆粒狀脫細胞組織)的技術。其中，CryoLife公司開發了可最初商業利用的進行了脫細胞的來自人的心瓣膜，AutoTissue公司為了治療人的心臟疾病開發了進行了脫細胞的來自豬的心瓣膜。關于脫細胞組織、顆粒狀脫細胞組織有以下的報道。非專利文獻1(SasakiS.等人,Mol.Vis.,2009,15,2022-2028)、非專利文獻2(HashimotoY等人,Biomaterials,2010,31,3941-3948)報道了：將通過高靜水壓處理進行了脫細胞的豬角膜移植到兔眼中時發揮功能。專利文獻1(日本特開2013-42677號公報)公開了一種適合角膜的脫細胞處理的處理液。非專利文獻3(FunamotoS.等人,Biomaterials,2010,31,3590-3595)報道了：通過高靜水壓處理將來自豬的大動脈脫細胞，對所得的脫細胞組織的力學特性或體內能力進行評價的結果，力學特性沒有受到高靜水壓處理的不良影響，炎癥反應得到抑制，該組織可以耐受動脈血壓，而且在管腔表面沒有形成血栓，還報道了：在移植該血管后4周發生細胞浸潤到血管壁的現象。非專利文獻4(NegishiJ.等人,J.Artif.Organs,2011,14,223-231)報道了：在膠原蛋白變性得到了抑制的條件下將來自大鼠的頸動脈脫細胞，再將該脫細胞的頸動脈移植到大鼠體內時，動脈閉塞得到抑制。非專利文獻5(SingelynJ.M.等人,Biomaterials,2009,30,5409-5416)報道了：利用表面活性劑將豬的心肌脫細胞，之后經過冷凍干燥、粉碎和胃蛋白酶消化，所得的心肌基質自身締合，形成多孔性纖維狀水凝膠；以及內皮細胞、平滑肌細胞滲入到該水凝膠中，使小血管的形成增加。非專利文獻6(Seif-NaraghiS.等人,J.Vis.Exp.,2010,46,e2109)是將該水凝膠應用于左室自由壁后研究宿主反應。非專利文獻7(SingelynJ.M.等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2012,59,751-763)報道了：將該水凝膠應用于心肌梗塞模型大鼠時，使內源性的心肌細胞增加，保持了心臟功能，而沒有引起心律不齊。非專利文獻8(SonyaB.等人,Sci.Transl.Med.,2013,5,173ra25)報道了：將該水凝膠應用于豬的心肌梗塞模型時，心臟功能、心室容積、心臟壁的整體運動有所改善，另外，該水凝膠與大鼠具有生物相容性。非專利文獻9(WolfM.T.等人,Biomaterials,2012,33,7028-7038)公開了：將來自豬的真皮或來自豬的膀胱經過脫細胞處理、冷凍干燥和胃蛋白酶處理而得到的細胞外基質水凝膠應用于大鼠腹壁缺損部位時，與來自真皮的凝膠相比，來自膀胱的凝膠被更快地分解，肌肉形成量更多。但是，該水凝膠在臨床上并沒有充分應用于靶部位的方法，因此設想其從應用部位剝落或者添加的基質流失而從目標部位消失。顆粒狀脫細胞組織根據其種類期待著其通過自凝膠化而留置在應用部位，但凝膠化無法瞬間完成，而且與靶部位的親和性也不充分。特別是在心臟這樣的動態組織中，該水凝膠難以留置在應用部位，其結果，暗示無法獲得充分的效果。專利文獻2(日本特表2002-518319號公報)報道了：將對人皮膚的脫細胞組織基質AlloDerm(LifeCell公司制造)進行低溫破壞而獲得的粒狀無細胞組織基質應用于大鼠或豬時，沒有發現嚴重的急性炎癥性應答的征兆。現有技術文獻專利文獻專利文獻1：日本特開2013-42677號公報；專利文獻2：日本特表2002-518319號公報；專利文獻3：日本專利第4092397號公報；專利文獻4：日本再公表2008-111530號公報；專利文獻5：日本特開2009-50297號公報；專利文獻6：日本特開2010-227246號公報；專利文獻7：日本專利第4189484號公報；非專利文獻非專利文獻1：SasakiS.等人,Mol.Vis.,2009,15,2022-2028；非專利文獻2：HashimotoY.等人,Biomaterials,2010,31,3941-3948；非專利文獻3：FunamotoS.等人,Biomaterials,2010,31,3590-3595；非專利文獻4：NegishiJ.等人,J.Artif.Organs,2011,14,223-231；非專利文獻5：SingelynJ.M.等人,Biomaterials,2009,30,5409-5416；非專利文獻6：Seif-NaraghiS.等人,J.Vis.Exp.,2010,46,e2109；非專利文獻7：SingelynJ.M.等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2012,59,751-763；非專利文獻8：SonyaB.等人,Sci.Transl.Med.,2013,5,173ra25；非專利文獻9：WolfM.T.等人,Biomaterials,2012,33,7028-7038；非專利文獻10：OttH.C.等人,NatureMedicine,2008,14,213-221；非專利文獻11：BarakatO.等人,J.Surg.Res.,2012,173,e11-e25；非專利文獻12：ParkK.M.等人,Transplant.Proc.,2012,44,1151-1154；非專利文獻13：OttH.C.等人,NatureMedicine,2010,16,927-933；非專利文獻14：YangB.等人,TissueEng.PartCMethods,2010,16,1201-1211；非專利文獻15：DeQuachJ.A.等人,TissueEng.PartA,2011,17,2583-2592。
技術實現思路
專利技術所要解決的課題如上所述，顯示出顆粒狀脫細胞組織沒有對移植片的排斥反應，且對疾病部位的再生、治愈有效，但更理想的顆粒狀脫細胞組織希望具備以下幾點。即，一種支架，在該支架處參與再生、治愈的來自患者的細胞或導入的細胞在靶部位聚集，或者靶部位的成熟細胞脫分化，這些細胞的增殖、分化、再分化的進程快速地進行；或者由顆粒狀脫細胞組織重構本文檔來自技高網...

【技術保護點】
混合凝膠，其包含：將使來自動物的生物組織進行脫細胞所得的組織即脫細胞生物組織粉碎而獲得的顆粒狀脫細胞組織、纖維蛋白原和凝血酶。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.05.07 JP 2013-0973991.混合凝膠，其包含：將使來自動物的生物組織進行脫細胞所得的組織即脫細胞生物組織粉碎而獲得的顆粒狀脫細胞組織、纖維蛋白原和凝血酶。
2.權利要求1所述的混合凝膠，其中，動物為人以外的動物。
3.權利要求1或2所述的混合凝膠，其中，待被脫細胞的生物組織為具有基質結構的生物組織。
4.權利要求1～3中任一項所述的混合凝膠，其中，待被脫細胞的生物組織為選自心臟、肝臟、腎臟、肺、腦和脊髓的一種以上的生物組織。
5.權利要求1～4中任一項所述的混合凝膠，其中，脫細胞生物組織為對生物組織進行高靜水壓處理而獲得的脫細胞生物組織。
6.權利要求1～5中任一項所述的混合凝膠，其中，凝血酶為0.8U/mL以上的濃度。
7.疾病治療藥，其包含權利要求1～6中任一項所述的混合凝膠。
8.權利要求7所述的治療藥，其中，疾病治療藥為選自心肌梗塞治療藥、神經損傷疾病治療藥和皮膚凍傷治療藥的治療藥。
9.細胞移植輔劑，其包含權利要求1～6中任一項所述的混合凝膠。
10.權利要求9所述的細胞移植輔劑，其中，細胞為來自心臟的細胞、神經前體細胞、或來自組織干細胞的細胞。
11.細胞培養基材，其包含權利要求1～6中任一項所述的混合凝膠。
12.權利要求11所述的細胞培養基材，其中，細胞為來自心臟的細胞、神經前體細胞、或來自組織干細胞的細胞。
13.混合凝膠的制作方法，該方法包括下述步驟：將來自動物的生物組織脫細胞以獲得脫細胞生物組織的步驟；粉碎所述脫細胞生物組織以獲得顆粒狀脫細胞組織的步驟；以及混合所述顆粒狀脫細胞組織、纖維蛋白原和凝血酶的步驟。
14.權利要求13所述的制作方法，其中，動物為人以外的動物。
15.權利要求13或14所述的制作方法，其中，待被脫細胞的生物組織為具有基質結構的生物組織。
16.權利要求13～15中任一項所述的制作方法，其中，待被脫細胞的生物組織為選自心臟、肝臟、腎臟、肺、腦和脊髓的一種以上的生物組織。
17.權利要求13～16中任一項所述的制作方法，其中，獲得脫細胞生物組織的步驟包括：將來自動物的生物組織脫細胞的步驟；以及微波照射并清洗的步驟。
18.權利要求13～17中任一項所述的制作方法，其中，脫細胞為對生物組織進行高靜水壓處理來進行的。
19.權利要求13～18中任一項所述的制作方法，其中，粉碎脫細胞生物組織的步驟包括：切碎脫細胞生物組織的步驟；將切碎了的脫細胞生物組織冷凍干燥或凍結的步驟；以及將冷凍干燥或凍結了的脫細胞生物組織粉碎的步驟。
20.權利要求19所述的制作方法，該方法還包括：將粉碎了的脫細胞生物組織根據顆粒大小進行篩分的步驟。
21.權利要求13～20中任一項所述的制作方法，其中，凝血酶為0.8U/mL以上的濃度。
22.組織再生療法，該療法包括：將使來自動物的生物組織進行脫細胞所得的組織即脫細胞生物組織粉碎而獲得的顆粒狀脫細胞組織和纖維蛋白膠應用于動物組織。
23.權利要求22所述的組織再生療法，其中，成為脫細胞生物組織來源的動物為人以外的動物。
24.權利要求22或23所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：松田純一，宮柱澄香，原野里美，岸田晶夫，木村剛，根岸淳，樋上哲哉，舩本誠一，日渡謙一郎，田崎晃子，
申請(專利權)人：一般財團法人化學及血清療法研究所，國立大學法人東京醫科齒科大學，北海道公立大學法人札幌醫科大學，株式會社艾迪科，
類型：發明
國別省市：日本;JP