一種提取鵝去氧膽酸的方法技術

一種提取鵝去氧膽酸的方法，涉及生物工程領域。現有技術的鵝去氧膽酸提取方法一般具有過程較復雜、所用化學物質毒性較大、產生環境污染和效率較低等缺陷。該方法從新鮮或冷凍家禽膽汁中，利用皂化反應，得到粗膽汁酸或粗膽汁酸鈣鹽，再將粗膽汁酸酯溶液與有機含氮化合物A水溶液共熱，利用有機含氮化合物A來除去粗膽汁酸中的大部份親水性雜質，得到的粗膽汁酸酯溶液與有機含氮化合物B反應，析出沉淀，過濾，并進行脫色、精制等步驟后，可得純度95％左右的鵝去氧膽酸。本方法用于從新鮮或冷凍家禽膽汁中提取鵝去氧膽酸。本發明專利技術具有操作簡便，生產設備通用性高，所用化學物質低毒的特點；適用于鵝去氧膽酸的工業化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物工程
，更具體地說，本專利技術涉及一種從家禽膽汁中提取鵝去氧膽酸的方法。
技術介紹
鵝去氧膽酸具有降低膽汁內膽固醇飽和度的作用，從而對膽囊結石病有較好的治療效果。鵝去氧膽酸也是化學法合成熊去氧膽酸(3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸，簡稱：UDCA)的重要原料；熊去氧膽酸是熊膽膽汁中的主要有效成分，對肝、膽等多種疾病有明確療效。從家禽膽汁中提取鵝去氧膽酸，是目前工業生產鵝去氧膽酸的主要途徑。已報道的提取方法一般具有過程較復雜，所用化學物質毒性較大，產生環境污染等特點，使得鵝去氧膽酸在規模工業化生產條件下，效率較為低下。
技術實現思路
一種提取鵝去氧膽酸的方法，利用價格低廉、安全性較高的含氮化合物A、B，來分別去除粗膽汁酸中所含的親水性與親脂性雜質；與已報道的提取方法相比，具有設備通用、操作簡便、成本較低等特點。本專利技術的技術方案如下：(1)粗膽汁酸或粗膽汁酸鈣鹽的制備取新鮮或冷凍雞膽汁或其它家禽膽汁，按膽汁體積的1～2/10量(W/V)加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸11～25小時，皂化，冷卻；分別按下列方法處理，可得粗膽汁酸或粗膽汁酸鹽：①粗膽汁酸的制備：將皂化液用1∶1(V/V)鹽酸調pH2～3，得粗膽汁酸；于陰涼處風干；②粗膽汁酸鈣鹽的制備：將皂化液按膽汁體積的15～25％量(W/V)加入工業氯化鈣，反應3～4小時，過濾，得粗膽汁酸鈣鹽沉淀，干燥；(2)初步脫色與除膽酸等雜質①取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯體積0.5～1倍量的飽和氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量0.5～2％的活性炭；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，濾去炭渣，分去水層。于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液。40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸(3α，7α，12α-三羥基-5β-膽烷酸，簡稱：CA)含量，其去除率約在75～85％間；②取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯體積0.5～1倍量的飽和氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量2～3％的硅藻土；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，將上層清液分出后，靜置，分去水層。酯層加入相當于粗膽汁酸重量0.2～1％的活性炭；30～60℃，攪拌0.5～1小時，放置，濾去炭渣，分去水層。于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液。40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸(3α，7α，12α-三羥基-5β-膽烷酸，簡稱：CA)含量，其去除率約在75～85％間；③取粗膽汁酸鈣鹽到5至10倍量的水中；用1∶1(V/V)鹽酸調pH2～3，加入等體積的醋酸乙酯，分去水層；酯層用飽和氯化鈉溶液洗至近中性后，加入相當于粗膽汁酸鈣鹽重量0.5～2％的活性炭；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，濾去炭渣；于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液。40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸(3α，7α，12α-三羥基-5β-膽烷酸，簡稱；CA)含量，其去除率約在75～85％間；(3)脫除脂溶性雜質往前述所得的酯層中，加入摩爾數適當過量的含氮有機化合物B；24～61℃，攪拌3～7小時，冷卻，放置，過濾；濾餅用少量醋酸乙酯洗滌，干燥，得粉狀固體。分析脂溶性雜質去除率約在85～95％間；(4)鵝去氧膽酸游離與精制①將前述所得的固體加入到1～5∶1(V/V)醋酸乙酯-水的混合體系中；32～72℃，攪拌，待固體溶解后加入適量含氮有機化合物A和含氮有機化合物B，繼續于32～72℃，攪拌1～4小時；冷卻，分去水層；酯層加0.1～2％的活性炭脫色；減壓回收醋酸乙酯，析出鵝去氧膽酸(CDCA)結晶；將此結晶轉入適量的120號汽油中浸泡6～10小時；過濾，45～55℃真空干燥；得純度95％左右，熔點135～145℃(毛細管法)的CDCA結晶；②將前述所得的固體加入到1～5∶1(V/V)醋酸乙酯-水的混合體系中；32～72℃，攪拌，待固體溶解后加入適量含氮有機化合物A和含氮有機化合物B，繼續于32～72℃，攪拌1～4小時；冷卻，分去水層；酯層加0.1～2％的活性炭脫色；減壓回收醋酸乙酯至加入量的60％左右，緩慢加入適量的120號汽油，析出鵝去氧膽酸(CDCA)結晶；養晶6～10小時；過濾，45～55℃真空干燥；得純度95％左右，熔點135～145℃(毛細管法)的CDCA結晶。本專利技術的有益效果是：在不影響鵝去氧膽酸的品質的同時，具有操作簡便，生產設備通用性高，所用化學物質低毒，便于大規模推廣使用。具體實施方式下面通過具體實施例對本方法作進一步說明。實施例一：取新鮮或冷凍雞膽汁或其它家禽膽汁，按其體積的1/10量(W/V)加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸16小時，皂化完全后，冷卻至室溫，加入1∶1(V/V)鹽酸調pH2，析出粗膽汁酸；清水洗滌，陰干。將粗膽汁酸加入到10倍量的醋酸乙酯中，加入與醋酸乙酯等體積的飽和氯化鈉溶液；溶解，按粗膽汁酸重量1％的活性炭；35℃，攪拌2小時，放置，濾去炭渣，分去水層。干酯層中加入相當酯層體積量10％、濃度20％的含氮有機化合物A的水溶液。60℃，攪拌8小時；冷卻，放置，分去水層；酯層薄層層析分析，親水性雜質膽酸(CA)等可去除大部分。取摩爾數適當過量的含氮有機化合物B加入到前述酯層中；40℃，攪拌4小時，冷卻，分離；濾餅用適量醋酸乙酯洗滌，干燥，得淺色粉狀固體。將前述固體加入到2∶1(V/V)醋酸乙酯-水的混合體系中；40℃，攪拌，待固體溶解后加入適量含氮有機化合物A和含氮有機化合物B(A與B的比例為1∶3)，攪拌2小時；冷卻，分去水層；酯層加1％的活性炭脫色；減壓回收醋酸乙酯，析出鵝去氧膽酸(CDCA)結晶；將此結晶轉入10倍量(W/V)的120號汽油中浸泡過夜，養晶，過濾，50℃真空干燥；得鵝去氧膽酸成品，純度95％，熔點145℃。實施例二：取新鮮或冷凍雞膽汁或其它家禽膽汁，按其體積的1/10量(W/V)加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸約16小時，皂化完全后，冷卻至室溫；將皂化液按膽汁體積的20％量(W/V)加入工業氯化鈣，反應3小時，過濾，收集沉淀，干燥。取粗膽汁酸鈣鹽到8倍量的水中；用1∶1(V/V)鹽酸調pH2，加入等體積的醋酸乙酯，分去水層；酯層用飽和氯化鈉溶液洗本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種提取鵝去氧膽酸的方法，其特征在于，其具體方法包括：(1)粗膽汁酸或粗膽汁酸鈣鹽的制備，取新鮮或冷凍雞膽汁或其它家禽膽汁，按膽汁體積的1～2/10量(W/V)加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸11～25小時，皂化，冷卻，分別按下列方法處理，可得粗膽汁酸或粗膽汁酸鹽：①粗膽汁酸的制備：將皂化液用1∶1(V/V)鹽酸調pH2～3，得粗膽汁酸；②粗膽汁酸鈣鹽的制備：將皂化液按膽汁體積的15～25％量(W/V)加入工業氯化鈣，反應3～4小時，過濾，得粗膽汁酸鈣鹽沉淀，干燥；(2)初步脫色與除膽酸等雜質：①取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯0.5～1倍量的飽和氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量0.5～2％的活性炭；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，濾去炭渣，分去水層，于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液，40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸含量；②取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯體積0.5～1倍量的飽和氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量2～3％的硅藻土；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，將上層清液分出后，靜置，分去水層，酯層加入相當于粗膽汁酸重量0.2～1％的活性炭；30～60℃，攪拌0.5～1小時，放置，濾去炭渣，分去水層，于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液，40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸含量；③取粗膽汁酸鈣鹽到5至10倍量的水中；用1∶1(V/V)鹽酸調pH2～3，加入等體積的醋酸乙酯，分去水層；酯層用飽和氯化鈉溶液洗至近中性后，加入相當于粗膽汁酸鈣鹽重量0.5～2％的活性炭；30～60℃，攪拌1～3小時，放置，濾去炭渣；于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液，40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸含量；(3)脫除脂溶性雜質往前述所得的酯層中，加入摩爾數適當過量的含氮有機化合物B；24～61℃，攪拌3～7小時，冷卻，放置，過濾；濾餅用少量醋酸乙酯洗滌，干燥，得粉狀固體，分析脂溶性雜質；(4)鵝去氧膽酸游離與精制：①將前述所得的固體加入到1～5∶1(V/V)醋酸乙酯?水的混合體系中；32～72℃，攪拌，待固體溶解后加入適量含氮有機化合物A和含氮有機化合物B，繼續于32～72℃，攪拌1～4小時；冷卻，分去水層；酯層加0.1～2％的活性炭脫色；減壓回收醋酸乙酯，析出鵝去氧膽酸結晶；將此結晶轉入適量的120號汽油中浸泡6～10小時；過濾，45～55℃真空干燥；得純度95％、熔點135～145℃的鵝去氧膽酸結晶；②將前述所得的固體加入到1～5∶1(V/V)醋酸乙酯?水的混合體系中；32～72℃，攪拌，待固體溶解后加入適量含氮有機化合物A和含氮有機化合物B，繼續于32～72℃，攪拌1～4小時；冷卻，分去水層；酯層加0.1～2％的活性炭脫色；減壓回收醋酸乙酯至加入量的60％，緩慢加入適量的120號汽油，析出鵝去氧膽酸結晶；養晶6～10小時；過濾，45～55℃真空干燥；得純度95％、熔點135～145℃的鵝去氧膽酸結晶。...

【技術特征摘要】
1.一種提取鵝去氧膽酸的方法，其特征在于，其具體方法包括：
(1)粗膽汁酸或粗膽汁酸鈣鹽的制備，取新鮮或冷凍雞膽汁或其它家禽膽汁，按膽汁體積
的1～2/10量(W/V)加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸11～25小時，皂化，冷卻，分別按下列方
法處理，可得粗膽汁酸或粗膽汁酸鹽：
①粗膽汁酸的制備：將皂化液用1∶1(V/V)鹽酸調pH2～3，得粗膽汁酸；
②粗膽汁酸鈣鹽的制備：將皂化液按膽汁體積的15～25％量(W/V)加入工業氯化鈣，反
應3～4小時，過濾，得粗膽汁酸鈣鹽沉淀，干燥；
(2)初步脫色與除膽酸等雜質：
①取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯0.5～1倍量的飽和
氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量0.5～2％的活性炭；30～60℃，攪拌1～3小
時，放置，濾去炭渣，分去水層，于酯層中加入相當酯層體積量5～20％、濃度10～50％的
含氮有機化合物A的水溶液，40～90℃，攪拌5～10小時；冷卻，放置，分去水層；對酯層
分析膽酸含量；
②取粗膽汁酸加入到6至16倍量的醋酸乙酯中，再加入與醋酸乙酯體積0.5～1倍量的
飽和氯化鈉溶液；溶解；加入相當于粗膽汁酸重量2～3％的硅藻土；30～60℃，攪拌1～3
小時，放置，將上層清液分出后，靜置，分去水層，酯層加入相當于粗膽汁酸重量0.2～1％
的活性炭；30～60℃，攪拌0.5～1小時，放置，濾去炭渣，分去水層，于酯層中加入相當酯
層體積量5～20％、濃度10～50％的含氮有機化合物A的水溶液，40～90℃，攪拌5～10小
時；冷卻，放置，分去水層；對酯層分析膽酸含量；
③取粗膽汁酸鈣鹽到5至10倍量的水中；用1∶1...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧家國，
申請(專利權)人：常德云港生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：湖南;43