本發明專利技術公開了用于檢測BMPR1B基因突變的引物組，包括BMPR1B基因第1至第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子對應的PCR擴增引物組和PCR測序引物。本發明專利技術還公開了所述引物組的用途、以及包含所述引物組的試劑盒。所述的引物組可以專一性鑒別BMPR1B基因是否突變，確保了測定結果的準確性和唯一性。
Primer set for detecting BMPR1B gene mutation, use of the same, and kit containing the primer set
The invention discloses a primer set for detecting the mutation of BMPR1B gene, which comprises a PCR amplification primer set and a PCR sequencing primer corresponding to the first to the exon region of the BMPR1B gene, the 'UTR', '5' UTR and the promoter. The invention also discloses the application of the primer group and the kit containing the primer group. The primer set can specifically identify the mutation of the BMPR1B gene and ensure the accuracy and uniqueness of the determination result.
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及引物，具體涉及用于檢測BMPR1B基因突變的引物組，本專利技術還涉及該引物組的用途，以及包含該引物組的試劑盒。
技術介紹
BMPR1B（bonemorphogeneticproteinreceptor,typeIB）屬于轉化生長因子β（TGF-β）受體超家族中的一員，為跨膜的絲氨酸/蘇氨酸激酶受體。TGF-β超家族的信號傳導系統具有多種生物學的功能，包括細胞功能能調節和組織細胞分化等。肺動脈高壓是各種原因引起的靜息狀態下右心導管測得的肺動脈平均壓（meanpulmonaryarterialpressure，mPAP）≥25mmHg的一組臨床病理生理綜合征。肺動脈高壓可以作為一種疾病而獨立存在，更常見的是很多疾病進展到一定階段的病理生理表現。由于肺血管重塑引起肺循環血流動力學改變，最終可導致右心衰竭，甚至死亡。這是一種極度惡性的疾病，七成多患者是年輕人，幾乎每個人都知道癌癥愈后差，但沒有人知道肺動脈高壓是一種極度惡性疾病，它的病因復雜、發病率高、誤診率高、危害性強，其愈后是災難性的，可以說，這種病就是心血管疾病中的癌癥。這種疾病平均發病年齡是36歲，75%患者集中于20-40歲年齡段，還有15%患者年齡在20歲以下，幾歲的孩子也會發病。世界上該病的發病率在1×10-5～1×10-6之間，其中約32%為遺傳性的。BMPR1B作為細胞表面的受體之一如果發生異常突變，可以導致其參與的下游的信號通路阻斷，導致肺血管壁的相關細胞增殖失控，進而引起肺動脈高壓。因此，采用基因擴增、測序，檢測BMPR1B基因是否突變以及尋找突變位點，有助于識別家系中高風險的成員，以及評估未出生孩子的患病風險，這對提高人口素質，優生優育有重要的意義。并且對醫生指導用藥，基因評估具有重要的意義。目前，傳統上采用熒光定量PCR的方式檢測突變，這個方法局限性很大，它只能檢測已經知道的突變位點，并且一次熒光定量PCR只能檢測一個點的突變，且準確率不高。BMPR1B基因突變對不同的人突變的位置和方式是不一樣的，用熒光定量PCR方法不能達到檢測的目的。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是提供一種用于檢測BMPR1B基因突變的引物組。BMPR1B基因第1到第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子中的任意一個區域在結構上發生堿基對組成或排列順序的改變，都視為BMPR1B基因發生了突變。因而，根據BMPR1B基因第1至第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別設計出能專一性鑒別BMPR1B基因是否突變的特異性引物組，可通過PCR擴增和測序測定BMPR1B基因上述區域是否發生改變，以鑒定BMPR1B基因是否發生突變，因此，本專利技術的用于檢測BMPR1B基因突變的引物組可以是BMPR1B基因第1至第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的引物組中的一組或兩組以上的組合。本專利技術第一個目的提供的用于檢測BMPR1B基因突變的引物組，包括BMPR1B基因第1到第10外顯子區，3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的PCR擴增引物組，即選自BMPR1B基因第1到第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的PCR擴增引物組，具體地，所述引物組選自BMPR1B基因的第1外顯子區(Exon1)的PCR擴增引物組、第2外顯子區(Exon2)的PCR擴增引物組、第3外顯子區(Exon3)的PCR擴增引物組、第4外顯子區(Exon4)的PCR擴增引物組、第5外顯子區(Exon5)的PCR擴增引物組、第6外顯子區(Exon6)的PCR擴增引物組、第7外顯子區(Exon7)的PCR擴增引物組、第8外顯子區(Exon8)的PCR擴增引物組、第9外顯子區(Exon9)的PCR擴增引物組、第10外顯子區(Exon10)的PCR擴增引物組、3’UTR的PCR擴增引物組、5’UTR的PCR擴增引物組和啟動子的PCR擴增引物組中的一組或兩組以上的組合，所述的上述各PCR擴增引物組為表1所示。本專利技術所述的引物組還包括BMPR1B基因第1到第10顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的PCR測序引物組中的一組或兩組以上的組合。本專利技術所述的PCR測序引物組如表2所示。本專利技術的目的之二是提供使用上述PCR擴增引物組和PCR測序引物在制備通過PCR擴增自生物樣品獲得核酸樣品檢測BMPR1B基因是否突變的試劑中的用途。本專利技術的目的之三是提供一種用于檢測BMPR1B基因突變的試劑盒，以方便采用DNA測序技術檢測導致肺動脈高壓發病的BMPR1B基因是否突變。具體地，該用于檢測BMPR1B基因突變的試劑盒，包括BMPR1B基因的第1至第10顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的PCR擴增引物組中的一組或兩組以上的組合，PCR擴增引物組為表1所示。本專利技術所述的試劑盒還包括如表2所示的BMPR1B基因的第1至第10顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子分別對應的PCR測序引物組中的一組或兩組以上的PCR測序引物組。本專利技術還包括常規PCR擴增試劑、PCR產物純化試劑和DNA測序試劑。所述的PCR擴增試劑包括dNTP、TaqDNA聚合酶等。所述的PCR產物純化試劑包括SAP酶、ExoI酶等。所述的DNA測序試劑包括BigDyemix、EDTA溶液、HIDI溶液等。本專利技術的有益效果：(1)本專利技術根據BMPR1B基因第1至第10顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子，共13區域序列設計特異性引物組，可以專一性鑒別BMPR1B基因是否突變，確保了測定結果的準確性和唯一性。與傳統的熒光定量PCR檢測單點突變的方法相比，其可以檢測13個區域范圍的所有的BMPR1B基因是否發生突變，適用的范圍廣泛，并且它使用的是測序比對的方法進行突變檢測，出錯率會低于熒光定量PCR的檢測方法，且造價也低于熒光定量PCR檢測法。(2)本專利技術提供的引物組及試劑盒用于檢測肺動脈高壓的致病基因BMPR1B基因的突變體，可以快速的檢測患者的基因是否突變，以便肺動脈高壓的疾病病因診斷。同時還可以用于BMPR1BSNP位點與基因功能之間關系的科學研究上。(3)本專利技術每個引物擴增的條件類似，可以13個區域分別進行擴增測序，也可以同時進行擴增測序。這樣的測序的方法檢測突變比通常熒光定量PCR的方法要更準確，同時檢測范圍更廣泛，測序范圍內的任何一個位置突變或插入堿基都能從測序圖譜中發現，而熒光定量PCR只能檢測目的位點的突變，局限性很大，且準確性不高。(4)本專利技術的引物組可以檢測BMPR1B基因是否突變以及尋找突變位點，有助于識別家系中高風險的成員，以及評估未出生孩子的患病風險，這對提高人口素質，優生優育有重要的意義，并且對醫生指導用藥，基因評估具有重要的意義。附圖說明圖1是血液基因組DNA的1%的Agarose電泳圖；M：DNADL15000maker，1、2：外周血基因組DNA。圖2是本專利技術實施例五中的血液樣本中的BMPR1B基因的測序峰圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步的說明。實施例一依據NCBIGeneBank（NG_009245）公開的BMPR1B基因的第1到第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子序列，設計出用于檢測BMPR1B基因是否發生突變的引物組，該引物本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于檢測BMPR1B基因突變的引物組，其特征在于，包括BMPR1B基因第1至第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子對應的PCR擴增引物組，所述的PCR擴增引物組包括：(1)?所述啟動子的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列的引物?PF1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列所示的引物PR1的引物組、SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列所示的引物PF2的引物組和SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物組、SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列的引物PF3的引物組和SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物組；(2)?所述5’UTR的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.7所示的核苷酸序列的引物?PF4和SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物組、SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列的引物?PF5和SEQ?ID?NO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物組、SEQ?ID?NO.11所示的核苷酸序列的引物?PF6和SEQ?ID?NO.12所示的核苷酸序列的引物PR6的引物組；(3)?所述Exon1的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和SEQ?ID?NO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物組；(4)?所述Exon2的PCR擴增引物組：SEQ?ID?NO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和SEQ?ID?NO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物組；(5)?所述?Exon3的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和SEQ?ID?NO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物組；(6)?所述Exon4的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和SEQ?ID?NO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物組；(7)?所述Exon?5的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和SEQ?ID?NO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物組；(8)?所述Exon6的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和SEQ?ID?NO.24所示的核苷酸序列的引物PR12的引物組；(9)?所述Exon7的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.25所示的核苷酸序列的引物PF13和SEQ?ID?NO.26所示的核苷酸序列的引物PR13的引物組；(10)?所述Exon8的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.27所示的核苷酸序列的引物PF14和SEQ?ID?NO.28所示的核苷酸序列的引物PR14的引物組；(11)?所述Exon9的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.29所示的核苷酸序列的引物PF15和SEQ?ID?NO.30所示的核苷酸序列的引物PR15的引物組；(12)?所述Exon10的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.31所示的核苷酸序列的引物PF16和SEQ?ID?NO.32所示的核苷酸序列的引物PR16的引物組；(13)?所述3’UTR的PCR擴增引物組：包括SEQ?ID?NO.33所示的核苷酸序列的引物PF17和SEQ?ID?NO.34所示的核苷酸序列的引物PR17的引物組、SEQ?ID?NO.35所示的核苷酸序列的引物PF18和SEQ?ID?NO.36所示的核苷酸序列的引物PR18的引物組、SEQ?ID?NO.37所示的核苷酸序列的引物PF19和SEQ?ID?NO.38所示的核苷酸序列的引物PR19的引物組、SEQ?ID?NO.39所示的核苷酸序列的引物PF20和SEQ?ID?NO.40所示的核苷酸序列的引物PR20的引物組、SEQ?ID?NO.41所示的核苷酸序列的引物PF21和SEQ?ID?NO.42所示的核苷酸序列的引物PR21的引物組、SEQ?ID?NO.43所示的核苷酸序列的引物PF22和SEQ?ID?NO.44所示的核苷酸序列的引物PR22的引物組、SEQ?ID?NO.45所示的核苷酸序列的引物PF23和SEQ?ID?NO.46所示的核苷酸序列的引物PR23的引物組、SEQ?ID?NO.47所示的核苷酸序列的引物PF24和SEQ?ID?NO.48所示的核苷酸序列的引物PR24的引物組。...
【技術特征摘要】
2015.07.21 CN 20151042923801.用于檢測BMPR1B基因突變的引物組，其特征在于，包括BMPR1B基因第1至第10外顯子區、3’UTR、5’UTR和啟動子對應的PCR擴增引物組，所述的PCR擴增引物組包括：(1)所述啟動子的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的引物PF1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列所示的引物PR1的引物組、SEQIDNO.3所示的核苷酸序列所示的引物PF2的引物組和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物組、SEQIDNO.5所示的核苷酸序列的引物PF3的引物組和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物組；(2)所述5’UTR的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.7所示的核苷酸序列的引物PF4和SEQIDNO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物組、SEQIDNO.9所示的核苷酸序列的引物PF5和SEQIDNO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物組、SEQIDNO.11所示的核苷酸序列的引物PF6和SEQIDNO.12所示的核苷酸序列的引物PR6的引物組；(3)所述Exon1的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和SEQIDNO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物組；(4)所述Exon2的PCR擴增引物組：SEQIDNO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和SEQIDNO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物組；(5)所述Exon3的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和SEQIDNO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物組；(6)所述Exon4的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和SEQIDNO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物組；(7)所述Exon5的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和SEQIDNO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物組；(8)所述Exon6的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和SEQIDNO.24所示的核苷酸序列的引物PR12的引物組；(9)所述Exon7的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.25所示的核苷酸序列的引物PF13和SEQIDNO.26所示的核苷酸序列的引物PR13的引物組；(10)所述Exon8的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.27所示的核苷酸序列的引物PF14和SEQIDNO.28所示的核苷酸序列的引物PR14的引物組；(11)所述Exon9的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.29所示的核苷酸序列的引物PF15和SEQIDNO.30所示的核苷酸序列的引物PR15的引物組；(12)所述Exon10的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.31所示的核苷酸序列的引物PF16和SEQIDNO.32所示的核苷酸序列的引物PR16的引物組；(13)所述3’UTR的PCR擴增引物組：包括SEQIDNO.33所示的核苷酸序列的引物PF17和SEQIDNO.34所示的核苷酸序列的引物PR17的引物組、SEQIDNO.35所示的核苷酸序列的引物PF18和SEQIDNO.36所示的核苷酸序列的引物PR18的引物組、SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的引物PF19和SEQIDNO.38所示的核苷酸序列的引物PR19的引物組、SEQIDNO.39所示的核苷酸序列的引物PF20和SEQIDNO.40所示的核苷酸序列的引物PR20的引物組、SEQIDNO.41所示的核...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧文菊，張晨婷，王健，
申請(專利權)人：廣州醫科大學附屬第一醫院，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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