本發明專利技術涉及電化學免疫傳感技術領域，特別是涉及一種基于MoS2/Au?Pd復合物的免標記型電化學免疫傳感器的制備方法及應用。以H2O2?為電化學探針，MoS2/Au?Pd復合物為基底材料，基于其良好的成膜能力、大的比表面積，及對H2O2優異的催化性能等優點，顯著提高了免疫傳感器的穩定性和靈敏度。檢測原理是利用抗原?抗體免疫反應前后電流的變化。當抗原與修飾在電極上的抗體反應后，形成的免疫復合物是一種非電活性物質，嚴重阻礙了電子傳遞，電流信號降低。該傳感器用于原降鈣素的檢測，檢測線性范圍0.0001?ng/mL~10?ng/mL，檢出限0.05?pg/mL。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及電化學免疫傳感
，特別是涉及一種基于MoS2/Au-Pd物的原降鈣素（PCT）電化學免疫傳感器的制備及應用。具體涉及一種以H2O2為電化學探針，MoS2/Au-Pd復合物為基底材料的電化學免疫傳感器的構建及應用。
技術介紹
PCT屬于一種降鈣素前肽物質，無激素活性，在血清中的水平升高是由于嚴重的細菌、真菌、寄生蟲的感染破壞以及膿毒癥和多臟器功能衰竭而致；在自身免疫、過敏和病毒感染時，含量不會升高。因此PCT可以對細菌、真菌引起的系統性感染作出診斷，被視為全身性細菌感染和膿毒癥輔助以及鑒別診斷的常規指標。目前對PCT抗原的檢測手段主要有放射免疫學分析法、雙抗夾心免疫化學發光法、膠體金比色法、透射免疫濁度法。這些方法具有較高的靈敏度和選擇性，但檢測過程需要昂貴的專用儀器，需要復雜的前處理且操作繁瑣、樣品消耗量較大，不適宜快速檢測。電化學免疫分析具有特異性好、選擇性高、便于攜帶、廉價、操作簡單等優點，可以實現對樣品的快速檢測。本專利技術基于電化學免疫傳感器的優點制備了一種基于MoS2/Au-Pd的原降鈣素電化學免疫傳感器，實現原降鈣素的靈敏檢測。本專利技術利用MoS2/Au-Pd復合材料修飾玻碳電極，MoS2是良好的二維片狀納米材料，比表面積大、成膜能力強，可以作為基底材料固定大量抗體。同時，Au-Pd作為類酶材料對H2O2具有優異的催化性能，將MoS2和Au-Pd復合，可以提高生物相容性、增強導電能力和催化性能，提高電化學免疫傳感器的靈敏度和穩定性。本專利技術中構建的電化學免疫傳感器具有制備過程簡單，成本低，穩定性好，靈敏度高等優點，為PCT檢測提供了一種可行的方法。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是以MoS2/Au-Pd復合材料為基底材料，構建了一種免標記，穩定性好，靈敏度高的電化學免疫傳感器；本專利技術的目的之二是采用H2O2為電化學探針，通過抗原抗體之間的特異性結合及對電子傳遞的阻礙作用實現對PCT的靈敏檢測。本專利技術的技術方案為：1.一種基于MoS2/Au-Pd復合物的電化學免疫傳感器的制備方法及應用：(1)用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3拋光粉依次打磨直徑為4mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗3min，氮氣吹干，取10μLMoS2/Au-Pd復合材料分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干成膜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗以除去未鍵合的MoS2/Au-Pd復合材料得到Pd-Au/MoS2/GCE；(2)取10μL6~10μg/mL的原降鈣素抗體(anti-PCT)標準溶液滴涂到電極表面，4℃下孵化過夜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗得anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(3)取10μL質量分數為1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到電極表面，在37℃下孵化1h，封閉非特異性結合的位點，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面得到BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(4)滴加10μL濃度為0.0001~10ng/mL的一系列不同濃度的原降鈣素抗原標準溶液用于與抗體特異性識別，在37℃下孵育60min，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于MoS2/Au-Pd的電化學免疫傳感器(PCT/BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE)。上述MoS2/Au-Pd分散液的制備：(1)Au-Pd合金納米枝晶的制備50.6mg聚乙烯吡咯酮(PVP)和88.0mg抗壞血酸(AA)加到5.0mL去離子水中，攪拌溶解。然后，攪拌下將5mL含有6.25μmolHAuCl4和6.25μmolH2PdCl4的溶液，以恒定的滴速（0.22mL/min）滴入到小瓶中；25℃下攪拌1h，形成深褐色溶液，10000rpm離心20min，用超純水洗滌三次，重新分散到10mL超純水中待用；(2)MoS2/Au-Pd分散液的制備取1mL上述溶液加入到9mL1mg/mL的二硫化鉬溶液中，持續攪拌48h，10000rpm下離心15min，除去未結合的合金納米枝晶，重新分散到10mL超純水中，得MoS2/Au-Pd分散液。PCT的檢測：(1)PCT/BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE為工作電極，Ag/AgCl電極為參比電極，鉑電極為對電極，H2O2為電化學探針，使用電化學工作站進行測試；(2)用i-t曲線法對一系列不同濃度PCT標準溶液的電極進行檢測，掃描的電位為-0.4V，記錄i-t曲線圖，根據所得的電流值和PCT濃度的對數呈線性關系，繪制工作曲線；(3)將待測樣品溶液代替PCT標準溶液進行檢測。本專利技術的有益效果為：(1)本專利技術把MoS2/Au-Pd復合材料滴涂到電極表面，通過蛋白質阻礙電子傳遞從而改變電流強度的機理檢測PCT，無酶、無標記，極大的簡化了電極制備過程；(2)本專利技術以MoS2/Au-Pd復合材料做基底，比表面積大、成膜能力強，不僅可大量固定抗體，同時對電化學探針H2O2有很好的催化效果，有效的增強了電化學免疫傳感器的靈敏度；(3)本專利技術制備的電化學免疫傳感器用于PCT的檢測，操作簡單，線性范圍寬，檢出限低，可以實現對AFP的簡單、快速、靈敏檢測。線性范圍為0.0001~10ng/mL，檢出限為0.05pg/mL。附圖說明：圖1為不同濃度PCT的i-t曲線圖；圖2為不同濃度PCT的電流強度與lgc的線性擬合圖。其中，圖1中由1到7的i-t曲線圖分別代表AFP的濃度為0.0001，0.001，0.01，0.05，0.1，1，10ng/mL。具體實施方式：為了更好地理解本專利技術，下面用具體實例來詳細說明本專利技術的技術方案，但是本專利技術并不局限于此。實施例1.一種基于MoS2/Au-Pd復合物的電化學免疫傳感器的制備方法：(1)用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3拋光粉依次打磨直徑為4mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗3min，氮氣吹干，取6μLMoS2/Au-Pd納米復合材料分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干成膜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗以除去未鍵合的MoS2/Au-Pd得到Au-Pd/MoS2/GCE；(2)取10μL6μg/mL的原降鈣素抗體(anti-PCT)標準溶液滴涂到電極表面，4℃下孵化過夜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗得anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(3)取10μL質量分數為1%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到電極表面，在37℃下孵化1h，封閉非特異性結合的位點，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面得到BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(4)滴加10μL濃度為0.0001~10ng/mL的一系列不同濃度的原降鈣素抗原標準溶液用于與抗體特異性識別，在37℃下孵育60min，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于MoS2/Au-Pd的電化學免疫傳感器(PCT/BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE)。實施例2.一種基于MoS2/Au-Pd復合物本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種基于MoS2/Au?Pd復合物的電化學免疫傳感器的制備方法及應用，其特征在于，包括以下步驟：(1)用1.0?μm、0.3?μm、0.05?μm的Al2O3拋光粉依次打磨直徑為4?mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗3?min，氮氣吹干，取10?μL?MoS2/Au?Pd復合材料分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干成膜，用PBS?(pH?7.4)?緩沖溶液沖洗以除去未鍵合的MoS2/Au?Pd復合材料得到Pd?Au/MoS2/GCE；(2)取10?μL?6~10?μg/mL的原降鈣素抗體(anti?PCT)標準溶液滴涂到電極表面，4?℃下孵化過夜，用PBS?(pH?7.4)緩沖溶液沖洗得anti?PCT/Pd?Au/MoS2/GCE；(3)取10?μL?質量分數為1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到電極表面，在37℃下孵化1?h，封閉非特異性結合的位點，用PBS?(pH?7.4)緩沖溶液沖洗電極表面得到BSA/anti?PCT/?Pd?Au/MoS2/GCE；(4)滴加10?μL濃度為0.0001~10?ng/mL的一系列不同濃度的原降鈣素抗原標準溶液用于與抗體特異性識別，在37?℃下孵育60?min，用PBS(pH?7.4)緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于MoS2/Au?Pd的電化學免疫傳感器?(PCT/BSA/anti?PCT/Pd?Au/MoS2/GCE)。...
【技術特征摘要】
1.一種基于MoS2/Au-Pd復合物的電化學免疫傳感器的制備方法及應用，其特征在于，包括以下步驟：(1)用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3拋光粉依次打磨直徑為4mm的玻碳電極(GCE)，分別在乙醇和超純水中超聲清洗3min，氮氣吹干，取10μLMoS2/Au-Pd復合材料分散液滴涂到電極表面，室溫下晾干成膜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗以除去未鍵合的MoS2/Au-Pd復合材料得到Pd-Au/MoS2/GCE；(2)取10μL6~10μg/mL的原降鈣素抗體(anti-PCT)標準溶液滴涂到電極表面，4℃下孵化過夜，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗得anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(3)取10μL質量分數為1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到電極表面，在37℃下孵化1h，封閉非特異性結合的位點，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面得到BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE；(4)滴加10μL濃度為0.0001~10ng/mL的一系列不同濃度的原降鈣素抗原標準溶液用于與抗體特異性識別，在37℃下孵育60min，用PBS(pH7.4)緩沖溶液沖洗電極表面，制得一種基于MoS2/Au-Pd的電化學免疫傳感器(PCT/BSA/anti-PCT/Pd-Au/MoS2/GCE)。2.根據權利要求1所述的一種基于MoS2/Au-Pd復合物的電化...
【專利技術屬性】
技術研發人員：花小霞，周長利，王月姣，
申請(專利權)人：濟南大學，
類型：發明
國別省市：山東;37
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