一種熱激活離子通道鈣成像實驗方法技術

本發明專利技術公開了一種熱激活離子通道鈣成像實驗方法。它是將待鈣成像的細胞懸液置于觀察皿中，然后置于鈣成像室，將觀察皿置于載物臺中，吸取某溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，平衡后吸出液體，再加入相同溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，并且利用紅外溫測系統監測觀察皿中液體的溫度，然后進行細胞的熱刺激鈣成像實驗。利用本發明專利技術的方法可以使整個鈣成像實驗記錄過程中，紅外溫測系統可持續準確地監測觀察皿中細胞浴槽液的溫度，保證了刺激溫度的準確性和多次實驗的均一性，極大方便了實驗操作，提高了實驗數據質量。

Heat activated ion channel calcium imaging experiment method

The invention discloses a heat activated ion channel calcium imaging experimental method. It is to be calcium imaging cell suspension in observation dish, and then placed in the calcium imaging room, will observe the carrier dish placed in Taichung, draw a temperature cell bath solution to observe the dish, balance after sucking liquid at the same temperature, adding cell bath solution to observe the dish, and the use of infrared the temperature measuring system of monitoring the temperature of the liquid in the dish, and then thermally stimulated calcium imaging of cells. By using the method of the invention can make the whole experiment record calcium imaging process, infrared temperature measurement system to accurately monitor the sustainable observation of cell bath bath solution temperature, to ensure the accuracy of the experiments and stimulating temperature uniformity, greatly facilitate the experimental operation, improve the quality of experimental data.

【技術實現步驟摘要】

：本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及一種熱激活離子通道鈣成像實驗方法。
技術介紹
：業已發現TRPV離子通道家族共含有TRPV1-TRPV6六個亞族，其中TRPV1–TRPV4為熱敏感型離子通道，即其受一定溫度熱刺激時可激活，導致Ca2+和Na+等離子內流，而以Ca2+內流為主。為了解熱敏感型TRPV通道熱激活機制，及其在人體生理、病理中所起的作用，常需進行鈣成像檢測。因鈣成像系統需要同時進行顯微鏡觀察和拍照記錄，故其對光路通透性要求高，以致現有的浴槽加熱系統無法應用，而給藥管加熱系統則需連接到實驗浴槽上，不便于鈣成像實驗操作，且其無法連續監測浴液溫度。因而，目前多個實驗組均采用簡易加熱浴液后，再將其加到細胞浴槽里的方法，但此法不易監測浴槽溫度(尤其是較長時間連續進行鈣成像記錄時)。
技術實現思路
：本專利技術的目的是提供一種能夠方便實時、連續而準確的監測實驗浴槽液的溫度，可提高熱敏型離子通道鈣成像實驗的效率和數據質量的熱激活離子通道鈣成像實驗方法。本專利技術的熱激活離子通道鈣成像實驗方法，其特征在于，將待鈣成像的細胞懸液置于觀察皿中，然后移至鈣成像室，將觀察皿置于載物臺中，吸取某溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，平衡后吸出液體，再加入相同溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，并且利用紅外溫測系統監測觀察皿中液體的溫度，然后進行細胞的熱刺激鈣成像實驗。所述的紅外溫測系統優選為在線式紅外溫測系統。優選，所述的在線式紅外溫測系統，其紅外傳感器探頭用支架固定在鈣成像實驗儀器上，使紅外傳感器探頭與觀察皿水平面形成右上斜45度角，探頭末端距離觀察皿液面6～8cm。利用本專利技術的方法可以使整個鈣成像實驗記錄過程中，紅外溫測系統可持續準確地監測觀察皿中細胞浴槽液的溫度，保證了刺激溫度的準確性和多次實驗的均一性，極大方便了實驗操作，提高了實驗數據質量。具體實施方式：以下實施例是對本專利技術的進一步說明，而不是對本專利技術的限制。實施例1：對具有熱敏型TRPV離子通道功能表達的培養細胞，待其生長融合至75-80％時，用0.25％的胰酶將其消化分散后，加培養基終止消化，制成1×106個/ml的細胞懸液，取50μl細胞懸液置于小號confocal觀察皿(此觀察皿以透光性良好的玻璃材質為底面，便于鈣成像的觀察和拍攝)中，再加944μl細胞外液(構成：135mMNaCl,5mMKCl,2mMCaCl2,1mMMgCl2,10mM葡萄糖及10mMHEPES,以NaOH調節pH至7.4)，再加5μl的Fura-2的母液及1μlF-127(此可促進Fura-2進入細胞),于37℃孵箱中孵育30min(使Fura-2充分進入細胞內),之后移至鈣成像室，將觀察皿置于載物臺上，按要求進行鈣成像實驗操作，選擇30-45個目標細胞，進行觀察記錄和拍攝。先在室溫時記錄340nm,380nm的熒光值及其比例F340/380(以便實驗后的計算、作圖，檢測鈣內流的數值。)，隨之可開啟在線式紅外溫測系統，進行細胞的熱刺激鈣成像實驗，該在線式紅外溫測系統按以下方法進行安裝和運行：(1)用于鈣成像實驗的系統在線式紅外溫測系統包括紅外傳感器探頭、溫度數顯儀和電源轉換盒。用不銹鋼支架固定紅外傳感器探頭，使紅外傳感器探頭與觀察皿水平面形成右上斜45度角，探頭末端離細胞浴槽液液面6-8cm；將溫度數顯儀置于固定支架的右側；為安全起見和減少電流變化對記錄的影響，將配套的電源轉換盒置于實驗臺外，其電源電纜連接到墻面三相插座。開啟電源，則可監測觀察皿中細胞浴槽液的溫度，從數顯儀表可讀溫度數值。在線式紅外溫測系統安裝、開啟后，將其側的另外購置的小型精密恒溫水浴鍋(含1L去離子水)的溫度設定至實驗溫度(如37℃，43℃或52℃)，同時將裝有細胞浴槽液的15ml離心管置于水浴鍋內的管架中，平衡7min，使管中液體溫度同水浴溫度相同。先記錄加熱前的鈣影像，然后用移液槍迅速吸取1ml細胞浴槽液加至觀察皿中平衡5S，吸走液體，再加1ml細胞浴槽液，立即進行鈣影像記錄。在整個鈣成像實驗記錄過程中，在線式紅外溫測系統可持續準確地監測細胞浴槽液的溫度，保證了刺激溫度的準確性和多次實驗的均一性，極大方便了實驗操作，提高了實驗數據質量。該在線式紅外溫測系統的參數如下：紅外傳感器探頭尺寸：18mm(外徑)x106mm(長)材質：外殼為不銹鋼重量：145g溫度數顯儀保護箱尺寸：23cm*20cm*10cm(長*寬*高)材質：鋁殼噴漆重量：1600g,不含電源線重量不銹鋼支架：包括可調支架、固定支架電源轉換器：標準3C認證,24V開關電源電源線纜：標準3C認證,阻燃絕緣插座：三相插座測溫范圍：-20至100℃測量精度：±0.5％重復精度：±0.5％溫度分辨率：0.1℃響應時間：100ms光學視場：25:1(距離/光斑直徑)射束直徑：按25:1光學圖工作電源：24VDC功率：35W發射率：1.0光譜響應：8～14μm模擬信號輸出：4～20mA工作溫度：0℃～60℃工作相對濕度：<90％(2)用于膜片鉗實驗的系統用不銹鋼支架固定紅外傳感器探頭，使紅外傳感器探頭與觀察皿水平面形成右上斜45度角，探頭末端離實驗槽液面8-10cm；將溫度數顯儀置于不銹鋼支架的右側；為安全起見和減少電流變化對記錄的影響，將配套的電源轉換盒置于實驗臺外，其電源電纜連接到墻面三相插座。開啟電源，則可監測浴槽液的溫度，從數顯儀表可讀溫度數值。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種熱激活離子通道鈣成像實驗方法，其特征在于，將待鈣成像的細胞懸液置于觀察皿中，然后移至鈣成像室，將觀察皿置于載物臺中，吸取某溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，平衡后吸出液體，再加入相同溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，并且利用紅外溫測系統監測觀察皿中液體的溫度，然后進行細胞的熱刺激鈣成像實驗。

【技術特征摘要】
1.一種熱激活離子通道鈣成像實驗方法，其特征在于，將待鈣成像的細胞懸液置于觀察皿中，然后移至鈣成像室，將觀察皿置于載物臺中，吸取某溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，平衡后吸出液體，再加入相同溫度的細胞浴槽液至觀察皿中，并且利用紅外溫測系統監測觀察皿中液體的溫度，然后進行細胞的熱刺激鈣成像實驗。2.根據權利要求1所...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李志遠，黃榮奇，馬文波，程娜，
申請(專利權)人：中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院，
類型：發明
國別省市：廣東;44