一種用乙酸銨提純糜蛋白酶的方法技術

本發明專利技術公開了采用一種用乙酸銨提純糜蛋白酶的方法，其特征是糜蛋白酶粗品（有效成分低于10%）在5?15℃條件下，用乙酸銨溶液提取，再用有機溶劑乙醇沉淀，最后用丙酮脫水得糜蛋白酶中間品。此技術去除了糜蛋白酶粗品中雜質成分的80%以上；得到的糜蛋白酶中間品在后續工序中通過樹脂柱吸附純化，節約了樹脂使用量，降低了生產成本；避免了糜蛋白酶因雜質過多，導致樹脂柱體堵塞、甚至發生柱體脹裂危險的隱患。

A method for purification of chymotrypsin with ammonium acetate

The invention discloses a method for purification of chymotrypsin with ammonium acetate, which is characterized in that the chymotrypsin crude (active ingredient is less than 10%) in the 5 under 15 DEG C, extracted with ammonium acetate solution and organic solvent, ethanol precipitation, and finally acetone dehydration chymotrypsin intermediates. This technology eliminates the above impurities in the crude chymotrypsin 80%; chymotrypsin intermediates obtained in subsequent processing by adsorption resin column purification, save the resin dosage, reduce the production cost; to avoid the chymotrypsin due to impurities, resulting in resin column plug, or column expansion risk the hidden danger.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物
，利用糜蛋白酶蛋白質溶于一定濃度鹽溶液中的特性，在5-8℃條件下用30%的乙酸銨溶液提純糜蛋白酶，有機溶劑乙醇沉淀，最后用丙酮脫水得糜蛋白酶中間品。
技術介紹
糜蛋白酶又稱胰凝乳蛋白酶，它對肽鏈的分解作用具有選擇性：即在酪氨酸、苯丙氨酸等的羧基端的肽鏈處。本品為白色棒狀晶體，能溶解于生理鹽水或純化水，固體狀態下比較穩定，可保存較長時間而不失活。但在水溶液中極不穩定，溶液pH在5～8時，其活力最強，也最易失活力。其分子量約42000。在等電點時的pH約為4.5。本品為胰腺分泌的一種蛋白分解酶，能迅速分解變形蛋白質，作用、用途與糜蛋白酶相似，比糜蛋白酶分解能力強，毒性低、不良反應小。能消化膿汁及壞死組織，凈化創面，從而使正常組織中分泌血清，去除異物，助長新生肉芽的生長，促進治療。本品與糜蛋白酶或化學藥劑共同治療各種炎癥具有協同作用，故常用于外科創傷治劑。也可用于眼科消腫治療。
技術實現思路
本專利技術提出的乙酸銨提純糜蛋白酶的具體方法，包括以下步驟：1）30%乙酸銨溶液的配制：將300g乙酸銨溶解于1000ml70%的乙醇溶液中，即得30%的乙酸銨溶液。2）將糜蛋白酶粗品投入1-3:15-35（g/ml）比例的30%的乙酸銨溶液中，在5-15℃條件下攪拌1-2.5小時，離心，留取上清液。3）離心渣按干粉1-3：15-30(g/ml)比例加入10%的乙酸銨溶液，在5-10℃條件下攪拌1-2.5小時，離心,留取上清液。4）合并兩次上清液，按1-2:1.5-4.5(ml/ml)比例加入95%乙醇，攪拌30-60分鐘，置低溫5-10℃下靜置10-24小時。5）離心，收集沉淀物，用適量丙酮脫水，離心，將沉淀物放入以五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中干燥，得糜蛋白酶中間品。本專利技術公開了乙酸銨提純糜蛋白酶的技術方法，其優點和積極效果在于糜蛋白酶粗品經過10%乙酸銨溶液溶解、有機溶劑乙醇沉淀，丙酮脫水后，可以有效去除糜蛋白酶粗品中的雜質成分，使其在樹脂處理過程中節約樹脂用量，降低生產成本，另外還可以避免因糜蛋白酶粗品雜質過多導致堵塞柱體、甚至發生柱體脹裂危險的隱患。具體實施例1）30%乙酸銨溶液的配制：將300g乙酸銨溶解于1000ml70%的乙醇溶液中，即得30%的乙酸銨溶液。2）將400g糜蛋白酶粗品15L的30%的乙酸銨溶液中，在5-10℃條件下攪拌3小時。離心，留取上清液。3）離心渣加入8L的30%的乙酸銨溶液，在5-10℃條件下攪拌2小時。離心,留取上清液。4）合并兩次上清液，加入40L的95%乙醇，攪拌50分鐘，置低溫5-10℃下靜置過夜。5）離心，收集沉淀物，用適量丙酮脫水，離心，將沉淀物置有五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中干燥，得糜蛋白酶中間品120g。本專利技術的優點和積極效果400g糜蛋白酶粗品經本專利技術乙酸銨提純后得到120g糜蛋白酶中間品，經后續協和樹脂吸附工序，與400g糜蛋白酶粗品直接通過協和樹脂吸附，進行了操作時間、成本、成品效價的對比試驗，結果如下：400g糜蛋白酶粗品120g糜蛋白酶中間品流速10L/h流速20L/h協和樹脂吸附所需時間15h協和樹脂吸附所需時間3.5h樹脂需用量3000g樹脂需用量800g糜蛋白酶重量31.6g糜蛋白酶重量35.4通過比較，充分證明了本專利技術相對于傳統技術的優勢，不僅在效價方面略勝一籌，還去除了雜質，節省了后續協和工序中的樹脂用量，節省整個工序的時間，從而降低生產成本。以上所述，僅是本專利技術的較佳實施例而已，并非是對本專利技術作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的
技術實現思路
加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本專利技術技術方案內容、依據本專利技術的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本專利技術技術方案的保護范圍。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用乙酸銨提純糜蛋白酶的方法，其特征在于糜蛋白酶粗品采用低溫條件下乙酸銨溶液提取，有機溶劑乙醇沉淀，最后用丙酮脫水得糜蛋白酶中間品，其主要步驟如下：（1）?將糜蛋白酶粗品投入20%的乙酸銨溶液中，在低溫條件下攪拌2?2.5小時，?離心，留取上清液；（2?）離心渣再加入30%的乙酸銨溶液，在低溫條件下攪拌，離心,?留取上清液；（3）合并兩次上清液，加入95%乙醇，攪拌，置低溫環境下，靜置；（4）離心，收集沉淀物，用丙酮脫水，離心，將沉淀物真空干燥，得糜蛋白酶中間品。

【技術特征摘要】
1.一種用乙酸銨提純糜蛋白酶的方法，其特征在于糜蛋白酶粗品采用低溫條件下乙酸銨溶液提取，有機溶劑乙醇沉淀，最后用丙酮脫水得糜蛋白酶中間品，其主要步驟如下：（1）將糜蛋白酶粗品投入20%的乙酸銨溶液中，在低溫條件下攪拌2-2.5小時，離心，留取上清液；（2）離心渣再加入30%的乙酸銨溶液，在低溫條件下攪拌，離心,留取上清液；（3）合并兩次上清液，加入95%乙醇，攪拌，置低溫環境下，靜置；（4）離心，收集沉淀物，用丙酮脫水，離心，將沉淀物真空干燥，得糜蛋白酶中間品。2.根據權利要求書1步驟（1）（2）所述，其特征在于，乙酸銨溶液配制方法為：將300g乙酸銨溶解于1000ml70%的乙醇...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉乃山，劉君，夏襯來，
申請(專利權)人：青島冠龍生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37