一種分離制備乳香單體的方法技術

本發明專利技術公開了一種分離制備乳香單體的方法，步驟如下：（1）乳香粗提物的制備：取乳香藥材，粉碎，采用乙醇溶液加熱提取數次，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得到乳香粗提物；（2）將步驟（1）獲得的乳香粗提物采用水溶解，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液過濾，減壓濃縮分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取段；（3）萜類單體的分離：采用高速逆流色譜方法對步驟（2）中的乙酸乙酯萃取段進行萜類化合物的分離純化。本發明專利技術方法克服了傳統制備方法操作復雜，樣品死吸附損失，收率低等缺點。本方法效率高，操作簡單，制備量大，綜合成本低，具有很好的推廣使用價值。

Method for separating and preparing frankincense monomer

The invention discloses a method for separation, preparation of frankincense monomer comprises the following steps: (1) the frankincense extracts prepared mastic herbs, crushing, heating extraction by ethanol solution several times, with the filtrate, vacuum distillation, freeze drying, get the frankincense extracts; (2) the step (1) the frankincense extracts by water soluble, respectively with petroleum ether, ethyl acetate, n-butanol extract, filtering, vacuum concentration were obtained from petroleum ether, ethyl acetate, n-butanol and water extraction; (3) the separation of terpene monomer by high speed countercurrent chromatography method of step (2) ethyl acetate extraction in separation of terpene compounds and purification. The method of the invention overcomes the defects of the traditional preparation method, such as complex operation, dead sample adsorption loss and low yield. The method has the advantages of high efficiency, simple operation, large preparation amount, low comprehensive cost, and good popularization and application value.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于中藥有效成分的高效制備
，具體涉及一種高速逆流色譜分離純化乳香中萜類單體的方法。
技術介紹
乳香，為橄欖科乳香屬植物卡氏乳香樹(BoswelliacarteriiBirdw.)及同屬植物鮑達乳香樹(Boswelliabhaw-dajianaBirdw.)樹皮滲出的樹脂，主產于索馬里、埃塞俄比亞等地。乳香辛散溫通，具有活血、止痛、消腫、生肌之功效，主治氣血凝滯、心腹疼痛、癰疫腫毒、跌打損傷、痛經、產后瘀阻等。研究發現乳香具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、降血糖等藥理作用。就制劑而言，國內的乳香類藥物主要為復方制劑，乳香的單方制劑如片劑、外用軟膏只見于國外市場。臨床多用于痛經、閉經、胃脘、疼痛、風濕痹痛、跌打傷痛及瘡癰腫痛、腸癰等癥，是一種具有廣泛開發前景的植物藥。目前從乳香中分離到的主要化學成分為五環三萜、四環三萜和大環二萜等化合物，其中乳香酸類及大環二萜類成分為其抗炎、抗腫瘤作用的有效成分。目前文獻報道，乳香中該類活性成分的分離純化方法為柱層析，如硅膠柱層析法。該方法不足之處是：分離周期長，回收率低，分離效果不理想，在使用硅膠柱層析分離時因長時間與硅膠填料接觸而致使該類成分結構發生變化。高速逆流色譜(High-SpeedCounter-CurrentChromatography，HSCCC)是利用兩相溶劑體系在高速旋轉的螺旋管內建立起一種特殊的單向性流體動力學平衡，其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續洗脫的過程中能保留大量固定相的分離方法，是一種連續高效的液-液分配色譜分離技術。它早起源于20世紀50年代的逆流分溶法(CCD)，但由于其設備龐大復雜、易碎，容積體系容易乳化等而被一種新的液-液分配方法-“逆流色譜”代替。20世紀70～80年代，美國國立衛生院的Ito博士研制出了早期的逆流色譜儀器，包括螺旋管行星式離心分離儀(CPC)、螺旋形逆流色譜儀、流通型螺旋管行星式離心分離儀、連續洗脫型離心分離儀等。高速逆流色譜是逆流色譜技術歷了近60年發展的結果，不用固體支撐體作固定相，避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅可全部回收樣品，而且樣品的制備量大大提高，是一種適用于中藥和天然產物研究的現代化儀器，具有適用范圍廣、制備量大、操作簡單、高效快速等優點，在生化、生物工程、醫藥、天然產物化學、有機合成、環境分析、食品、地質、材料等領域得到了廣泛的應用。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種高速逆流色譜分離純化乳香中萜類單體的方法，從而克服現有技術的不足，提供一種操作簡單，產品純度高，樣品損失量小的高效快速方法。本專利技術采用的技術方案如下：一種高速逆流色譜分離純化乳香中萜類單體的方法，步驟如下：(1)乳香粗提物的制備：取乳香藥材，粉碎，采用乙醇溶液加熱提取數次，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得到乳香粗提物；(2)將步驟(1)獲得的乳香粗提物采用水溶解，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液過濾，減壓濃縮分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取段；(3)萜類單體的分離：采用高速逆流色譜方法對步驟(2)中的乙酸乙酯萃取段進行萜類化合物的分離純化；其中，溶劑系統組成為：按照體積比，石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水＝1～1.2:0.6～0.9:1～1.2:0.5～0.8，轉速為700～900rpm，流速為1～3mL/min。對乙酸乙酯萃取段進行HSCCC分離，紫外檢測器在線監測，分別收集不同餾分并減壓干燥，得BoscartolA、3,7-二羰基-甘遂-8,24-二烯-21-羧酸、3α-乙酰氧基-7-羰基-甘遂-8,24-二烯-21-羧酸、11-羰基-β-乳香酸、乙酰-11-羰基-β-乳香酸，其中3,7-二羰基-甘遂-8,24-二烯-21-羧酸和3α-乙酰氧基-7-羰基-甘遂-8,24-二烯-21-羧酸為新化合物。步驟(1)中，乳香的預處理對后續萜類化合物的提取分離比較重要，乳香采用乙醇加熱提取，相比于其他溶劑的提取，能夠使得乳香中萜類單體最大程度的提取出來。從分離效果來講，優選的，乙醇溶液的質量濃度為90～95％，采用加熱回流提取方法，固液比為1：2～4，提取次數2～3次，時間分別為1～2h，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得乳香粗提物。根據本專利技術的一個優選的實施方式，采用質量濃度為95％乙醇加熱回流提取，固液比為1:3，提取三次，時間分別為2h，1h，1h，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得乳香粗提物。步驟(2)中，選擇石油醚、乙酸乙酯、正丁醇這三種不同極性的溶劑進行萃取，可進一步將步驟(1)中的醇提物進行極性粗分，將此5種萜類成分進行富集，相比于其他溶劑的萃取，可使此5種成分最大限度集中，且避免交叉存在于不同萃取部位。該萃取溶劑比較重要，是保證HSCCC能夠有效分離5種萜類化合物的前提條件。步驟(3)中，溶劑系統的配置過程為：按各溶劑比例配制溶劑系統，置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，待平衡設定時間后將上下兩相分開，上相為固定相，下相為流動相。將步驟(2)中的乙酸乙酯萃取段溶解于上相和下相備用，進一步的，乙酸乙酯萃取段溶解于體積比為1：1的上相和下相的混合液中備用；所述乙酸乙酯萃取段與混合液的用量關系為：(0.3～0.5)g/10mL。溶劑系統的選擇對于HSCCC分離十分關鍵。到目前為止溶劑系統的選擇還沒有充分的、較完整的和具有指導意義的理論體系，而是根據實際積累的豐富經驗來選擇。本專利技術針對乳香中的萜類單體的分離，經過大量的實驗分析和驗證，對不同的溶劑系統進行選擇，得到了石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水的溶劑系統以及精確了各個溶劑的比例，得到石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水的體積比＝1～1.2:0.6～0.9:1～1.2:0.5～0.8時，各個萜類單體的分離效果較好。進一步的，所述石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水的體積比＝1:0.8:1.1:0.6時，得到的分離效果最好。若是采用其他溶劑系統，比如將石油醚替換為正己烷，或者其他配比量的溶劑系統會導致這五種萜類單體不能完全分開。優選的，紫外檢測波長為254nm。優選的，上樣量為0.3～0.5g，進一步優選的為0.3g。由于高速逆流色譜是無需任何固態載體支撐的液液色譜，其中，作為固定相的液體在色譜柱中的保留程度對于高速色譜的分離過程是十分重要的。優選的，固相保留率為60～70％，進一步優選的，固相保留率為67％。在流動相流速方面，流動相流速快不利于固定相的保留，且出峰時間太快會導致峰與峰間的分離度較差，而低流速雖然可以滿足提高固定相保留率的要求，但是分離洗脫時間太長，且峰形變寬，耗費大量的流動相，故選擇合適的流速對整個分離體系非常重要。本專利技術經過大量的實驗分析和驗證，選擇流動相流速為1～3mL/min。優選的為2mL/min。分離柱的轉速以及它產生的離心力場對兩相的混合程度具有決定性的影響，本專利技術選擇了較高的轉速，為700～900rpm，以使固定相和流動相之間能夠劇烈的混合，從而促進分配和減少質點傳遞的阻力。為了達到更好的分離效果，優選的轉速為800rpm。本專利技術確定了高速逆流色譜方法對乳香萜類單體的最佳分離條件：溶劑系統為石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水的體積比例＝1:0.8:1.1:0.6，上相為固定相，下相為流動相，高速逆流色譜儀柱體積為300m本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高速逆流色譜分離純化乳香中萜類單體的方法，其特征是，步驟如下：(1)乳香粗提物的制備：取乳香藥材，粉碎，采用乙醇溶液加熱提取數次，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得到乳香粗提物；(2)將步驟(1)獲得的乳香粗提物采用水溶解，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液過濾，減壓濃縮分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取段；(3)萜類單體的分離：采用高速逆流色譜方法對步驟(2)中的乙酸乙酯萃取段進行萜類化合物的分離純化；其中，溶劑系統組成為：按照體積比，石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水＝1～1.2:0.6～0.9:1～1.2:0.5～0.8，轉速為700～900rpm，流動相流速為1～3mL/min。

【技術特征摘要】
1.一種高速逆流色譜分離純化乳香中萜類單體的方法，其特征是，步驟如下：(1)乳香粗提物的制備：取乳香藥材，粉碎，采用乙醇溶液加熱提取數次，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得到乳香粗提物；(2)將步驟(1)獲得的乳香粗提物采用水溶解，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液過濾，減壓濃縮分別得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取段；(3)萜類單體的分離：采用高速逆流色譜方法對步驟(2)中的乙酸乙酯萃取段進行萜類化合物的分離純化；其中，溶劑系統組成為：按照體積比，石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水＝1～1.2:0.6～0.9:1～1.2:0.5～0.8，轉速為700～900rpm，流動相流速為1～3mL/min。2.如權利要求1所述的方法，其特征是：步驟(1)中，乙醇溶液的質量濃度為90～95％，采用加熱回流提取方法，固液比為1：2～4，提取次數2～3次，時間分別為1～2h，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得乳香粗提物；優選的，乙醇溶液的質量濃度為90～95％，采用加熱回流提取方法，固液比為1：2～4，提取次數2～3次，時間分別為1～2h，合并濾液，減壓旋蒸，冷凍干燥，得乳香粗提物。3.如權利要求1所述的方法，其特征是：步驟(3)中，溶劑系統的配置過程為：按照石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水＝1～1.2:0.6～0.9:1～1.2:0.5～0.8的體積比例配制溶劑系統，置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，待平衡設定時間后將上下兩相分開，上相為固定相，下相為流動相。4.如權利要求1所述的方法，其特征是：步驟(3)中，所述石油醚:乙酸乙酯:甲醇:水的體積比＝1:0.8:1.1:0.6。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：于金倩，趙宏偉，宋祥云，王岱杰，王曉，
申請(專利權)人：山東省分析測試中心，
類型：發明
國別省市：山東;37