The invention relates to the technical field of gene engineering, in particular to a preparation method of a glial cell primary culture model which can be used for the study of nerve development. The concrete steps include: first, take the living creatures, were sacrificed after sterilization, removal of the brain to remove blood; the second step, the first step in processing the whole brain into the dish, remove the surface of the brain meninges and blood vessels, after flushing the left hemisphere; the third step, the second step treatment of brain tissue was cut and grinding, adding 5ml 0.05% trypsin, into the centrifuge tube, the 37 C cell incubator incubation digestion for 30 minutes; the fourth step, to digest without brain tissue mass, obvious termination of digestion, made into single cell suspension. The fifth step centrifugation, and the supernatant discarded. In the sixth step, the cell suspension was cultured in the culture plate and cultured at 37 degrees. The method of the invention is simple and easy to operate.
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及基因工程
，具體是可用于神經(jīng)發(fā)育研究的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型的制備方法。
技術(shù)介紹
原代培養(yǎng)(primaryculture)：也叫初代培養(yǎng)，指直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)(subculture)的細(xì)胞，便不再稱為原代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。最常用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。分散細(xì)胞培養(yǎng)則是將組織塊用機(jī)械法或化學(xué)法使細(xì)胞分散。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種可用于神經(jīng)發(fā)育研究的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型的制備方法，簡(jiǎn)單易于操作，膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。可用于神經(jīng)發(fā)育研究的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型的制備方法：第一步，取活生物，脫臼處死，用醫(yī)用酒精浸泡滅菌后斷頭,迅速剪開(kāi)顱骨，取出腦組織放到盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中反復(fù)沖洗以去除血污；第二步，將所述第一步處理的全腦移入另一盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中,用小鑷子輕輕剔除腦表面的腦膜和血管,用PBS液沖洗后剪去腦干僅留大腦半球；第三步，將第二步處理的腦組織剪碎并研磨，加入5ml0.05％胰酶，再移入50mL離心管，至于37度細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育消化30分鐘；第四步，每隔5min取出用吸管反復(fù)吹打消化至肉眼觀察無(wú)明顯的腦組織團(tuán)塊，加入10ml含有5％青鏈霉素的AdvancedDMEM/F12終止消化，再次反復(fù)吹打制成單細(xì)胞懸液。第五步，離心，在1000r/min的離心機(jī)上離心5min后，棄上層清液。第六步，加完全培養(yǎng)液再次制成細(xì)胞懸液，1×106/孔接種...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
可用于神經(jīng)發(fā)育研究的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型的制備方法：第一步，取活生物，脫臼處死，用醫(yī)用酒精浸泡滅菌后斷頭,迅速剪開(kāi)顱骨，取出腦組織放到盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中反復(fù)沖洗以去除血污；第二步，將所述第一步處理的全腦移入另一盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中,用小鑷子輕輕剔除腦表面的腦膜和血管,用PBS液沖洗后剪去腦干僅留大腦半球；第三步，將第二步處理的腦組織剪碎并研磨，加入5ml?0.05％胰酶，再移入50mL離心管，至于37度細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育消化30分鐘；第四步，每隔5min取出用吸管反復(fù)吹打消化至肉眼觀察無(wú)明顯的腦組織團(tuán)塊，加入10ml含有5％青鏈霉素的Advanced?DMEM/F12終止消化，再次反復(fù)吹打制成單細(xì)胞懸液。第五步，離心，在1000r/min的離心機(jī)上離心5min后，棄上層清液。第六步，加完全培養(yǎng)液再次制成細(xì)胞懸液，1×106/孔接種于matrgal包被的6孔培養(yǎng)板中,置于5％CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃培養(yǎng)。
【技術(shù)特征摘要】
1.可用于神經(jīng)發(fā)育研究的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型的制備方法：第一步，取活生物，脫臼處死，用醫(yī)用酒精浸泡滅菌后斷頭,迅速剪開(kāi)顱骨，取出腦組織放到盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中反復(fù)沖洗以去除血污；第二步，將所述第一步處理的全腦移入另一盛有含有15％青鏈霉素的冷PBS液的培養(yǎng)皿中,用小鑷子輕輕剔除腦表面的腦膜和血管,用PBS液沖洗后剪去腦干僅留大腦半球；第三步，將第二步處理的腦組織剪碎并研磨，加入5ml0.05％胰酶，再移入5...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：袁國(guó)紅，趙曙紅，劉彬，劉慶柱，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：袁國(guó)紅，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京;11
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