抗CD269(BCMA)人源化抗體制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及結(jié)合CD269(BCMA)的人源化抗體或抗體片段，從而破壞CD269和其天然配體(BAFF和APRIL)之間的相互作用，以及它們?cè)谥委煗{細(xì)胞介導(dǎo)的疾病如多發(fā)性骨髓瘤和自身免疫疾病中的用途。

Anti CD269 (BCMA) humanized antibody

The present invention relates to a combination of CD269 (BCMA) humanized antibodies or antibody fragments, thus destroying CD269 and its natural ligand (BAFF and APRIL) interactions, and their use in the treatment of plasma cell mediated diseases such as multiple myeloma and autoimmune disease.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及結(jié)合CD269(BCMA)的人源化抗體或抗體片段，從而破壞CD269和其天然配體(BAFF和APRIL)之間的相互作用，以及它們?cè)谥委煗{細(xì)胞介導(dǎo)的疾病如多發(fā)性骨髓瘤和自身免疫疾病中的用途。
技術(shù)介紹
B細(xì)胞成熟抗原(BCMA)是腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)的第17個(gè)成員。它的天然配體是涉及(通過(guò)與進(jìn)一步的配體相互作用)調(diào)節(jié)體液免疫、B細(xì)胞發(fā)育和內(nèi)穩(wěn)態(tài)的不同方面的B細(xì)胞激活因子(BAFF；也稱為BLyS或TALL-1，TNFSF13B)以及增殖誘導(dǎo)配體。BCMA在惡性漿細(xì)胞上高度表達(dá)，所述惡性漿細(xì)胞例如是骨髓B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤的多發(fā)性骨髓瘤(MM)，以及比MM更具侵略性并構(gòu)成漿細(xì)胞紊亂的所有病例的約4％的漿細(xì)胞白血病(PCL)中的惡性漿細(xì)胞。除MM和PLC之外，還在患有霍奇金淋巴瘤的患者的霍奇金和里德-斯特恩伯格細(xì)胞(HodgkinandReed-Sternbergcells)上檢測(cè)到BCMA(Chiu等人(2007)Blood109：729-739)。類似于它在漿細(xì)胞上的功能，結(jié)合于BCMA的配體顯示了調(diào)節(jié)表達(dá)BCMA的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活(Novak等人(2004)Blood103：689-694)。BAFF和APRIL通過(guò)BCMA的信號(hào)傳導(dǎo)被認(rèn)為是惡性漿細(xì)胞的促存活因子；因此，BCMA陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的清除和/或配體-受體相互作用的破壞應(yīng)改善多發(fā)性骨髓瘤和自身抗體依賴的自身免疫疾病的治療結(jié)果。目前存在多種可用于治療多發(fā)性骨髓瘤的方法(Raab等人(2009)Lancet374：324-339)。化學(xué)療法導(dǎo)致多數(shù)受試者僅能部分控制多發(fā)性骨髓瘤；僅極少數(shù)進(jìn)行化學(xué)療法導(dǎo)致完全消退。因此經(jīng)常應(yīng)用結(jié)合方法，通常涉及另外施以皮質(zhì)類固醇，例如地塞米松或強(qiáng)的松。然而，皮質(zhì)類固醇被副作用，例如減少骨密度所困擾。使用某人自己的干細(xì)胞(自體的)或使用來(lái)自近親屬或相配型的無(wú)血緣供體(異體的)的細(xì)胞，干細(xì)胞移植也被提出。在多發(fā)性骨髓瘤中，進(jìn)行的多數(shù)移植是自體類型。雖然不是可治愈的，但是這樣的移植在選擇的患者中顯示出延長(zhǎng)生命(Suzuki(2013)JpnJClinOncol43：116-124)。可供選擇地，最近沙利度胺和其衍生物已被應(yīng)用于治療但也與次佳的成功率和高成本相關(guān)。最近蛋白酶抑制劑硼替佐米(PS-341)被批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性和難治性MM，并且被單獨(dú)或與已確定的藥物聯(lián)合用于許多臨床試驗(yàn)，導(dǎo)致令人鼓舞的臨床結(jié)果(Richardson等人(2003)NewEnglJMed348：2609-2617；Kapoor等人(2012)SeminHematol49：228-242)。聯(lián)合治療的成本是相對(duì)高的，并且成功率仍具有顯著的改進(jìn)的余地。由于同時(shí)使用多種藥物時(shí)副作用的積累，治療選擇的聯(lián)合也不是理想的。用于治療漿細(xì)胞疾病，具體是多發(fā)性骨髓瘤的新方法是需要的。特異地靶向漿細(xì)胞的能力也對(duì)治療自身免疫疾病具有巨大益處。通常首先使用非類固醇抗炎藥(NSAID)或疾病緩解性抗風(fēng)濕藥(DMARD)來(lái)治療輕度形式的自身免疫疾病。通常使用類固醇與強(qiáng)免疫抑制劑如靶向周期中細(xì)胞的環(huán)磷酰胺(一種細(xì)胞毒性劑)治療涉及由于活動(dòng)性疾病導(dǎo)致的器官功能障礙的更嚴(yán)重形式的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。僅最近，在患有自身免疫疾病的患者的血清中高水平存在的靶向細(xì)胞因子BAFF的抗體貝利單抗被食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)其用于SLE。然而，在人體內(nèi)僅新形成的B細(xì)胞依賴于BAFF以存活，而記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞對(duì)選擇性的BAFF抑制不太敏感(Jacobi等人(2010)ArthritisRheum62：201-210)。對(duì)于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，TNF抑制劑是最先被許可的生物制劑，然后是阿巴西普、利妥昔單抗和托珠單抗以及其他：它們抑制涉及關(guān)節(jié)炎癥和破壞的關(guān)鍵炎癥路徑，然而由于相對(duì)的免疫抑制，以提高感染風(fēng)險(xiǎn)作為代價(jià)(Chan等人(2010)NatRevImmunol10：301-316，Keyser(2011)CurrRheumatolRev7：77-87)。盡管批準(zhǔn)了這些生物制劑，患SR和SLE的患者常常顯示自身免疫標(biāo)志物的持續(xù)性，其最可能與骨髓中存在壽命長(zhǎng)的、固著的漿細(xì)胞相關(guān)，所述漿細(xì)胞耐受例如通過(guò)利妥昔單抗和高劑量糖皮質(zhì)激素和環(huán)磷酰胺療法的CD20介導(dǎo)的切除.已經(jīng)在本領(lǐng)域描述了結(jié)合CD269(BCMA)的抗體和其在治療不同B細(xì)胞相關(guān)的醫(yī)學(xué)紊亂中的用途。Ryan等人(MolecularCancerTherapeutics，20076(11)，3009)描述了通過(guò)使用BCMA蛋白的第5至54位氨基酸的肽免疫大鼠獲得的抗BCMA抗體。WO2012/163805描述了BCMA結(jié)合蛋白，如嵌合抗體和人源化抗體，它們用于阻礙BAFF和/或APRIL與BCMA相互作用的用途以及它們?cè)谥委煗{細(xì)胞惡性腫瘤例如多發(fā)性骨髓瘤的潛在用途。在其中公開(kāi)的抗體通過(guò)使用BCMA蛋白的第4至53位氨基酸的重組肽免疫小鼠獲得。WO2010/104949也公開(kāi)了優(yōu)選結(jié)合BCMA的胞外域的不同抗體以及它們?cè)谥委烞細(xì)胞介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病癥和紊亂中的用途.WO2002/066516和WO2012/066058公開(kāi)了結(jié)合BCMA和另外的靶標(biāo)兩者的二價(jià)抗體以及它們?cè)谥委烞細(xì)胞相關(guān)醫(yī)學(xué)紊亂中的潛在用途.在兩個(gè)公開(kāi)中的任一個(gè)公開(kāi)中均沒(méi)有提供關(guān)于二價(jià)抗體的結(jié)合特性和特異性表位的細(xì)節(jié)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
鑒于現(xiàn)有技術(shù)，作為本專利技術(shù)的基礎(chǔ)的技術(shù)問(wèn)題是提供適用于治療與病原性漿細(xì)胞相關(guān)的人類疾病如多發(fā)性骨髓瘤和自身免疫疾病的制劑。該問(wèn)題通過(guò)獨(dú)立權(quán)利要求的特征解決。本專利技術(shù)的優(yōu)選實(shí)施方式通過(guò)從屬權(quán)利要求提供。因此，本專利技術(shù)的目的是提供結(jié)合CD269(BCMA)，具體是結(jié)合CD269(BCMA)的胞外域的表位的人源化抗體或抗體片段。本文公開(kāi)的抗體包括人源化序列、特別是優(yōu)選的VL和VH結(jié)合區(qū)的人源化序列，該人源化序列保持如關(guān)于嵌合抗體J22.9-xi描述的適當(dāng)?shù)呐潴w親和性。在本專利技術(shù)的不同實(shí)施方式中，用于獲得所述人源化序列的氨基酸序列修飾可以在原始嵌合抗體J22.9-xi的CDR區(qū)或在骨架區(qū)發(fā)生，其中所述骨架區(qū)應(yīng)理解為在屬于免疫球蛋白超家族并且比CDR更低“可變”的蛋白質(zhì)的可變域的區(qū)域。完全驚訝的是本文提供的具體的人源化序列，優(yōu)選涉及結(jié)合的VL和VH區(qū)的CDR區(qū)，顯示了如在實(shí)驗(yàn)例中證實(shí)的特異性的和強(qiáng)的結(jié)合，并保持了原始嵌合抗體J22.9-xi的結(jié)合特征，保持的程度為保持它們的希望的治療效果的程度。因此，本專利技術(shù)涉及包括VH域的抗體或抗體片段，所述VH域包括以下CDR序列：-RYWX1S(H-CDR1；SEQIDNO.15)，其中X1：I、F、L、V、Y.C、G、A、S、T)；-EINPX2X3STINYAPSLKDK(H-CDR2；SEQIDNo.16)，其中X2X3：SS、NS、TS、GS、KS、RS、SD、SN、DE；-SLYX4DYGDAX5DYW(H-CDR3；SEQIDNO.17)，其中X4：Y、L、A、V、F、I、W和/或X5：Y、L、F、I、V、A、C，其中所述抗體或其片段特異地結(jié)合CD269(BCMA)的胞外域的表位。尤其驚訝的是本文描述的人源化抗體展示出與原始嵌合抗體相比的序列改變，本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
抗體或抗體片段，包括VH域，所述VH域包括以下CDR序列：?RYWX1S(H?CDR1；SEQ?ID?NO.15)，其中X1：I、F、L、V、Y.C、G、A、S、T)；?EINPX2X3STINYAPSLKDK(H?CDR2；SEQ?ID?No.16)，其中X2X3：SS、NS、TS、GS、KS、RS、SD、SN、DE；以及?SLYX4DYGDAX5DYW(H?CDR3；SEQ?ID?NO.17)，其中X4：Y、L、A、V、F、I、W和/或X5：Y、L、F、I、V、A、C，其中，所述抗體或其片段特異性結(jié)合CD269(BCMA)的胞外域的表位。

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】2014.04.30 EP 14166729.51.抗體或抗體片段，包括VH域，所述VH域包括以下CDR序列：-RYWX1S(H-CDR1；SEQIDNO.15)，其中X1：I、F、L、V、Y.C、G、A、S、T)；-EINPX2X3STINYAPSLKDK(H-CDR2；SEQIDNo.16)，其中X2X3：SS、NS、TS、GS、KS、RS、SD、SN、DE；以及-SLYX4DYGDAX5DYW(H-CDR3；SEQIDNO.17)，其中X4：Y、L、A、V、F、I、W和/或X5：Y、L、F、I、V、A、C，其中，所述抗體或其片段特異性結(jié)合CD269(BCMA)的胞外域的表位。2.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，其中，所述VH域包括CDR序列RYWIS(SEQIDNO.18)或RYWFS(SEQIDNO.19)。3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，其中，所述VH域包括CDR序列EINPNSSTINYAPSLKDK(SEQIDNo.20)或EINPSSSTINYAPSLKDK(SEQIDNo.21)。4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，其中，所述VH域包括CDR序列SLYYDYGDAYDYW(SEQIDNO.22)。5.抗體或抗體片段，包括VL域，所述VH域包括以下CDR序列：-KASQSVX1X2NVA(L-CDR1；SEQIDNO.23)，其中X1X2：ES、SS、TS、QS、HS、DH；-SASLRFS(L-CDR2；SEQIDNO.24)；以及-QQYNNYPLTFG(L-CDR3；SEQIDNO.25)，其中，所述抗體或其片段特異性結(jié)合CD269(BCMA)的胞外域的表位。6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，其中，所述VL域包括CDR序列KASQSVDSNVA(SEQIDNO.26)。7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括VH域，所述VH域包括序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWX1SWVRQAPGKGLVWVGEINPX2X3STINYAPSLKDKFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASLYX4DYGDAX5DYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO.4)，其中X1：I、F、L、V、Y、C、G、A、S、T；X2X3：SS、NS、TS、GS、KS、RS、SD、SN、DE，優(yōu)選SS；X4：Y、L、A、V、F、I、W；和X5：Y、L、F、I、V、A、C。8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括VH域，所述VH域包括根據(jù)SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8或SEQIDNO.9的序列。9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括VL域，所述VL域包括序列EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQSVX1X2NVAWYQQKPGQAPRALIYSASLRFSGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNYPLTFGAGTKLELKR(SEQIDNO.12)，其中X1X2：ES、SS、TS、QS、HS、DH。10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括VL域，所述VL域包括根據(jù)SEQIDNO.14的序列。11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括含有根據(jù)SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8或SEQIDNO.9的序列的VH域，以及含有根據(jù)SEQIDNO.14的序列的VL域。12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗體片段，包括VH域，其中，所述VH域包括根據(jù)以下的序列X1VQLX2X3SGGGLVQPGGSLX4LSCAASGX5X6FX7X8YWZ1SWVRX9APGKGLEWX10GEINPZ2SSTINYAPSLKX11X12FX13ISRDNAKNTLYLQMX14X15X16RX17EDTAX18YYCASLYYDYGDAZ3DYWGQGTX19VTVSS(SEQIDNo.41)，其中X1：Q、E；X2...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：費(fèi)利克斯·奧登，斯蒂芬·馬里諾，奧利弗·道姆克，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：馬克思德布魯克分子醫(yī)學(xué)中心亥姆霍茲聯(lián)合會(huì)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：德國(guó);DE