一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種用于檢測Asia?I型口蹄疫的膠體金試紙及其制備方法，涉及血清學檢測技術領域，包括底板，底板的頂部設置有檢測層，檢測層包括檢測線和對照線，檢測層的頂部靠近對照線的一側設置有吸收層，靠近檢測線的一側設置有免疫金標墊，免疫金標墊的頂部設置有樣品墊；免疫金標墊上涂覆有膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG，檢測線上涂覆/浸潤有Asia?I型口蹄疫病毒樣顆粒相對應的純化后蛋白，對照線上涂覆/浸潤有兔IgG。所述免疫金標墊膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2。本發明專利技術，能夠實時快速診斷Asia?I型口蹄疫，且準確度較高。

Colloidal gold test paper for detecting AsiaI type foot and mouth disease and preparation method thereof

The invention discloses a method for colloidal gold test paper and its preparation method for detection of Asia type I foot-and-mouth disease, which belongs to the technical field of serological detection, which comprises a bottom plate, the bottom plate is arranged on the top of the detection layer, detection layer includes the test line and control line, the top detection layer close to the side of the control line is arranged on the side of absorption layer. Close to the detection line is arranged at the top of immunogold pad, immunogold pad is provided with a sample pad; immunogold pad is coated with colloidal gold particles, the colloidal gold particles are combined with proteinG, the detection line coated / invasion purified protein Asia mouth type I foot and mouth disease virus like particles corresponding to the the control line, coating / invasion of rabbit IgG. The proportion of the colloidal gold and proteinG of the immune gold labeled pad is 2 * 104:1 ~. The present invention, real-time and rapid diagnosis of Asia type I foot-and-mouth disease, and the accuracy is higher.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及血清學檢測
，具體涉及一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙及其制備方法。
技術介紹
口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是由FMD病毒(FMDV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性的傳染病。該病毒主要分為A型、O型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型和AsiaI型7種血清型，各血清型之間不能產生交叉免疫保護。此外，FMDV還包括許多亞型和突變株，目前已發現80多種亞型，同一血清型內的不同亞型或分離株的抗原性也有不同程度的差異，血清學交叉反應的程度也各不相同，這種特性給FMD的診斷和防制造成一定的困難。
技術實現思路
針對現有技術中存在的缺陷，本專利技術的目的在于提供一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙及其制備方法，能夠實時快速診斷AsiaI型口蹄疫，且準確度較高。為達到以上目的，本專利技術采取的技術方案是：一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙，包括底板，底板的頂部設置有檢測層，檢測層上設置有檢測線和對照線，檢測層的頂部靠近對照線的一側設置有吸收層，靠近檢測線的一側設置有免疫金標墊，免疫金標墊的頂部設置有樣品墊；免疫金標墊上涂覆有膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG，檢測線上涂覆/浸潤有AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒相對應的純化蛋白，對照線上涂覆/浸潤有兔IgG；所述免疫金標墊上膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2。在上述技術方案的基礎上，所述免疫金標墊上膠體金與proteinG的比例為2×104:1.3。在上述技術方案的基礎上，所述免疫金標墊的吸附比例為10～50μL/cm。在上述技術方案的基礎上，所述檢測線上涂覆/浸潤有濃度為0.5～1mg/mL的AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒。在上述技術方案的基礎上，所述對照線上涂覆/浸潤有濃度為0.8～1.5mg/mL的免疫兔血清IgG。一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙的制備方法，包括以下步驟：A、制備LgG，制備并純化膠體金，將膠體金與proteinG按質量比為2×104:1～1.5反應，得到免疫膠體金，將濃度為1～1.2g/ml的免疫膠體金按吸附比為10～50μL/cm吸附在玻璃膜上，得到免疫金標墊；B、使用硝酸纖維膜作為檢測層基材，在檢測線上噴涂濃度為0.5～1mg/mL的AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒，在對照線上噴涂濃度為0.8～1.5mg/mL的免疫兔血清IgG；在檢測層的中部距檢測線0.3～1cm處，噴涂對照線，噴膜量為5～15μl/1cm進行噴膜，噴膜后干燥得到檢測層；C、在底板1的頂部設置檢測層，并將檢測層；壓平，將吸收層一部分固定在底板上，一部分固定在檢測層；上靠近對照線的部分，將免疫金標墊的一側固定在底板上，另一側固定在檢測層；靠近檢測線的一側，樣品墊的一側固定在底板上，樣品墊的一側固定在底板上，另一側固定在免疫金標墊上。在上述技術方案的基礎上，免疫金標墊的制備方法為：使用濃度為0.1M的K2CO3調整膠體金的pH值為5.9，按質量比為2×104::1～1.5將相應的proteinG溶液加入膠體金中放置30min后，在轉速為10000r/min、溫度為4℃的條件下離心30min，將沉淀溶于重懸液中混合均勻，用玻璃膜吸附后晾干。在上述技術方案的基礎上，所述檢測線上AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒的濃度為0.8mg/mL，所述對這線上免疫兔血清IgG的濃度為1mg/mL。與現有技術相比，本專利技術的優點在于：(1)本專利技術的一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙，檢測層上設置有檢測線和對照線，檢測層靠近檢測線的一側設置有免疫金標墊，免疫金標墊的頂部設置有樣品墊。免疫金標墊包括膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG標記物，檢測線涂覆/浸潤有AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒，對照線上涂覆/浸潤有兔IgG，免疫金標墊上膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2，檢測線上涂覆/浸潤有濃度為0.5～1mg/mL的AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒。在使用時，直接將血液樣品稀釋后在現場進行檢測，如果血液樣品中含有AsiaI型口蹄疫抗體，血液樣品中的抗體與免疫金標墊中proteinG修飾的膠體金結合形成復合物，與檢測線上AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒結合形成紫紅色線條，繼續前行，未與抗原結合的抗體攜帶重組蛋白proteinG與對照線中的IgG抗體形成紫紅色線條。將檢測結果與常規的CFT、VNT凝集試驗、免疫擴散和ELISA進行比較，結果基本一致，且本專利技術的血液未經過純化，說明本專利技術的準確度較高，且檢測條件不高，穩定性較好，具有操作簡單、檢測快速、結果清楚，易于判斷和保存，且無需大型儀器設備，成本較低，能夠用于臨床快速實時檢測，快速檢測流行病，便于快速采取相應措施，避免疾病大規模爆發。附圖說明圖1為本專利技術實施例中用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙的結構示意圖。圖中：1-底板，2-樣品墊，3-免疫金標墊，4-檢測層，5-吸收層，6-檢測線，7-對照線。具體實施方式以下結合附圖及實施例對本專利技術作進一步詳細說明。參見圖1所示，本專利技術實施例提供一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙，包括采用PVC制成的底板1，底板1的頂部設置有檢測層4，檢測線6上設置有檢測線6和對照線7，檢測層4的頂部靠近對照線7的一側設置有吸收層5，靠近檢測線6的一側設置有免疫金標墊3，免疫金標墊3的頂部設置有樣品墊2。免疫金標墊3包括膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG標記物，檢測線6涂覆/浸潤有AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒，對照線7上涂覆/浸潤有兔IgG，本實施例中，免疫金標墊3上膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2，免疫金標墊3上膠體金與proteinG的最佳比例為2×104:1.3，免疫金標墊3的吸附比例為10～50μL/cm。檢測線6上涂覆/浸潤有濃度為0.5～1mg/mL的AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒，對照線7上涂覆/浸潤有濃度為0.8～1.5mg/mL的免疫兔血清IgG。本專利技術還提供一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙的制備方法，包括以下步驟：S1、制備IgG：用proteinG采用多點注射法免疫陰性家兔2只，每隔2周加強免疫1次，共進行3次，最后一次免疫10天后采血備用，放入4℃冰箱過夜沉淀，將沉淀的全血在轉速為4000r/min的條件下離心10min，取上清即為血清。將20ml血清中加入20ml生理鹽水中，再加入10ml飽和(NH4)2SO4溶液，混合均勻后靜置30min，然后在轉速為3000r/min的條件下離心20min，棄去沉淀除去纖維蛋白，取上清液。b、在上清液中加入30ml(NH4)2SO4飽和溶液，混合均勻后靜置30min，在轉速為3000r/min的條件下離心20min，棄上清液，取沉淀物，向沉淀物中加20ml生理鹽水，10ml(NH4)2SO4飽和溶液，混合均勻后靜置30min，3000r/min離心20min，棄上清。重復b步驟2～3次后，向純化后的沉淀中加入10ml生理鹽水并透析，先放入純水中透析過夜除鹽，然后放入生理鹽水中在4℃下透析24h，透析期間每2～3h換液一次。檢測本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于檢測Asia?I型口蹄疫的膠體金試紙，其特征在于：包括底板(1)，底板(1)的頂部設置有檢測層(4)，檢測層(4)上設置有檢測線(6)和對照線(7)，檢測層(4)的頂部靠近對照線(7)的一側設置有吸收層(5)，靠近檢測線(6)的一側設置有免疫金標墊(3)，免疫金標墊(3)的頂部設置有樣品墊(2)；免疫金標墊(3)上涂覆有膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG，檢測線(6)上涂覆/浸潤有Asia?I型口蹄疫病毒樣顆粒相對應的純化蛋白，對照線(7)上涂覆/浸潤有兔IgG；所述免疫金標墊(3)上膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2。

【技術特征摘要】
1.一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的膠體金試紙，其特征在于：包括底板(1)，底板(1)的頂部設置有檢測層(4)，檢測層(4)上設置有檢測線(6)和對照線(7)，檢測層(4)的頂部靠近對照線(7)的一側設置有吸收層(5)，靠近檢測線(6)的一側設置有免疫金標墊(3)，免疫金標墊(3)的頂部設置有樣品墊(2)；免疫金標墊(3)上涂覆有膠體金顆粒，該膠體金顆粒上結合有proteinG，檢測線(6)上涂覆/浸潤有AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒相對應的純化蛋白，對照線(7)上涂覆/浸潤有兔IgG；所述免疫金標墊(3)上膠體金與proteinG的比例為2×104:1～2。2.如權利要求1所述的一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙，其特征在于：所述免疫金標墊(3)上膠體金與proteinG的比例為2×104:1.3。3.如權利要求1所述的一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙，其特征在于：所述免疫金標墊(3)的吸附比例為10～50μL/cm。4.如權利要求1所述的一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙，其特征在于：所述檢測線(6)上涂覆/浸潤有濃度為0.5～1mg/mL的AsiaI型口蹄疫病毒樣顆粒。5.如權利要求1所述的一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙，其特征在于：所述對照線(7)上涂覆/浸潤有濃度為0.8～1.5mg/mL的免疫兔血清IgG。6.一種用于檢測AsiaI型口蹄疫的試紙的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A、制備LgG，制備并純化膠體金，將膠體金與proteinG按質量比為2×104:1～1.5反應，得到免疫膠體金，將濃度為1～1.2g...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孫世琪，郭慧琛，張韻，常艷燕，魏衍全，茹嘉喜，智曉瑩，杜平，劉湘濤，殷宏，羅建勛，
申請(專利權)人：中國農業科學院蘭州獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：甘肅;62