槐屬苷的制備方法、藥物制劑及醫藥新用途技術

本發明專利技術公開了一種從中藥槐角中產業化提取制備高純度槐屬苷的新方法和藥物制劑，同時也公開了槐屬苷可用于預防和治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、腦血栓等疾病的新用途。制備槐屬苷新工藝的特點是僅用水和乙醇，不使用易燃、易爆的乙醚脫脂，也不使用乙酸乙酯，正丁醇萃取和大孔吸附樹脂柱層析等分離手段，該方法成本低、不污染環境、安全系數高，適合產業化大量制備。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及一種天然植物提取物的制備方法、藥物制劑及醫藥新用途，特別是涉及槐屬苷的提取制備新方法、藥物制劑及其新用途的專利技術。槐屬苷是一種異黃酮類化合物，在槐角中含量約為0.8-1.4％，在藥材中槐屬苷大部分是與植物中的淀粉結合存在，也有的是雙糖苷，因此用一般的方法提取的槐屬苷收率較低。槐屬苷(Sophoricoside)的結構染料木素-4′-葡萄糖苷(genistein-4′-glucoside) 本專利技術的目的之三是提供了以槐屬苷在預防和治療冠心病、心絞痛等疾病的藥物中的應用。槐屬苷的制備方法可以選自如下方法中的一種1、以槐角為原料，先用每公斤藥材8-15g糖化酶或淀粉酶30-38℃水保溫酶解24小時，用85-95％乙醇，乙醇液用氫氧化鈉調PH值9-10，回流提取2-4小時，過濾，再用70-80％乙醇回流提取1-3小時，將兩次提取液合并，用鹽酸調PH到5-6，加藥用活性炭脫色，減壓回收溶劑，濃縮液放置、過濾或離心、干燥得槐屬苷粗品，用95％乙醇重結晶，得淡黃色結晶。2、以槐角為原料，先用每公斤藥材8-15g糖化酶或淀粉酶30-38℃水保溫浸泡酶解24小時，再用每公斤槐角用20-40克氫氧化鈣石灰乳浸泡藥材12小時，用95％乙醇回流提取2-4次，用活性炭脫色、過濾、減壓回收乙醇、放置、過濾或離心得槐屬苷粗品，再用95％乙醇重結晶，得近無色的槐屬苷結晶。特別是以槐角為原料僅用水、乙醇和適量的堿就可以產業化大量制備單體槐屬苷結晶的方法屬于首創。本專利技術制備方法采用了30-38℃保溫浸泡，利用植物中存在的活性酶和外源性活性酶(糖化酶或淀粉酶)自然酶解，活性酶自然酶解，同時在提取時加入適量的堿降解。實踐證明利用這種水浸保溫酶解和堿降解的方法，大大地提高了槐屬苷的收率，此方法槐屬苷收率高達3.0％，比原植物中游離狀態(可直接提取狀態)產量提高二倍以上。本專利技術的生產工藝、生產周期短，安全、不污染環境，成本低，收率高，純度高達95％以上，特別適合產業化大量生產。鑒于黃酮類化合物的多種生物活性(擴冠、溶栓等)，本專利技術的新工藝能從槐角中產業化大量制備槐屬苷將有廣泛的藥用前景。本專利技術的上述方法可以用于產業化大量制備單體槐屬苷。通過高效液相色譜和液-質聯用進行分析，驗證本專利技術方法制備的結晶物就是槐屬苷。1、高效液相(HPLC)分析儀器，美國Agillent1100型高效液相色譜儀(配四元泵、二級管陣列檢測器、自動進樣器、柱溫箱、軟件為Agillent1100型多種數自動處理系統)。條件色譜柱為Zorbax C18反相硅膠柱(4.6cm×150cm)，進樣量為5ul，流動相為甲醇∶水∶冰乙酸＝55∶40∶5，流速為1.0ml/min，檢測波長為359nm。保留時間為2.181min，為對稱峰。2、液-質聯用(LC/MSD)分析儀器，美國Agillent液-質聯用儀(配四元泵、補償單元泵、二級管陣列檢測器、自動進樣器、柱溫箱、軟件為Agillent1100型多種數據處理系統)。條件色譜柱為ZOBAX EXTEND C18柱，流動相為乙腈∶水(PH為3.5)＝80∶20。流速為0.9ml/min，柱后補償促離子化試劑氨水溶液(0.1ml/min)，質譜條件為負離子模式(NEG)電噴霧(API-ESI)掃描。經液-質聯用和高效液相分析，并結合文獻資料證明本專利技術提取的化合物是槐屬苷。按藥劑學方法，可以將本專利技術的槐屬苷制備成多種臨床藥物劑型作為治療冠心病和心絞痛藥物，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說的非腸道給劑型選自于注射劑、氣霧劑或皮下給藥劑型當中的一種。本專利技術的藥物優選含有1％-99％的槐屬苷和99％-1％的賦形劑(包括其它配伍的藥物)，優選含有30％-80％的槐屬苷和70％-20％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有60％-70％的槐屬苷和40％-30％的賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。本專利技術的藥物中的輔料是指常規的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本專利技術藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的槐屬苷為一定的藥物原料，再配伍其它可允許合用的中藥或化學藥品。本專利技術的槐屬苷藥物制劑具有治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、腦血栓等作用，是通過以下的藥效實驗得到證實。實驗動物健康成年雜種犬12.5-17.5kg，雌雄兼用，購自白求恩醫科大學實驗動物部；昆明種小鼠，體重18-22g，購自吉林省中醫中藥研究院動物飼養室；大鼠，體重130-170g，雌雄兼用，購自吉林省藥品檢驗所。試驗藥品槐屬苷由吉林天藥科技股份有限公司提供。批號20020309。心腦舒通膠囊，市售，由吉林敖東洮南藥業股份有限公司生產，批號980205。實驗例1槐屬苷對麻醇犬血流動力學及心肌耗氧量的影響試驗方法將家犬用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉后固定于實驗臺上，剪頸部毛后，切開頸部皮膚、分離氣管、插管連接電動人工呼吸機(WH-2型，天津市醫療器械廠生產)。分離股動脈，插管測定動脈血壓，分離頸外動脈和頸內動脈，結扎頸外動脈，在頸內動脈套適宜的電磁流量計(MFV-1100型，日本光電產品)探頭以測定腦血流量。施左側第四肋間開胸術、暴露心臟，剪開心包，做心包床，分離冠脈動脈左旋支及主動脈根部放置電磁流量計探頭以測定冠脈血流量。左心室心尖部插管測量左室內壓(LVSP)、左室舒末壓(LVEDP)、和左室內壓最大上升和下降速率(±dp/dt max)、以肢體導聯觀測標II導心電圖，并計算心率。以上指標同步記錄于多導生理記錄儀(RM-6000型、日本光電產品)。頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇，頸動脈插管，用血氧測定儀(康尼-158，美國產)分別測定冠狀靜脈竇血氧含量和動脈血氧含量，以計算心肌耗氧量等。實驗結束后，取心臟、大腦及稱重，公式計算以下各項指標心博出量，總外周阻力、冠脈阻力及腦血管阻力等一系列二級指標。試驗分組試驗分四組，每組家犬各5只，第一組為生理鹽水對照組，第二組為陽性藥心腦舒通膠囊(20mg/kg)，第三、四組分別為受試藥小、大劑量組(10mg/kg、20mg/kg)。開胸手術及插管完成后穩定10min，記錄各項指標做為藥前值。沿上腹正中線切開腹壁、提出十二指腸、經十二指腸給予試驗藥物及生理鹽水，于給藥后，15、30、45、60、90、120、150、180、210、240min進行記錄，將各項記錄指標及推導參數進行統計學處理，以不同觀察時間的實測值進行組間比較，以t檢驗判斷其顯著性。試驗結果1、對麻醉犬動脈血壓、心率及心電圖的影響生理鹽水對照組對血壓、心率及心電圖無明顯變化，陽性藥對照組和給藥二個劑量組在給藥后血壓自身與生理鹽水組比較有下降的趨勢，但無統計學意義。各組對心率、心電圖均無明顯影響(見表一，二)2、對麻醉犬冠脈血流量及冠脈阻力的影響生理鹽水對照組給藥前后冠脈血流量及冠脈阻力均無明顯變化，陽性藥對照組在給藥后60-120分鐘，冠脈血流量由藥前103.26±11.312升至138.13±16.41，145.31±24.528和139.10±19.623(P＜0.01)。給藥小劑量組在給藥后90分鐘由藥前99.97本文檔來自技高網...

【技術保護點】
槐屬苷提取制備的方法，其特征在于該方法選自下述兩種方法當中的一種： Ａ、以槐角為原料，３０－３８℃水保溫酶解２４小時，用８５－９５％乙醇，乙醇液用氫氧化鈉調ＰＨ值９－１０，回流提取２－４小時，過濾，再用７０－８０％乙醇回流提取１－３小時，將兩次提取液合并，用鹽酸調ＰＨ到５－６，加藥用活性炭脫色，減壓回收溶劑，濃縮液放置、過濾或離心、干燥得槐屬苷粗品，用９５％乙醇重結晶，得淡黃色結晶。 Ｂ、以槐角為原料，３０－３８℃水保溫酶解１２小時，再用石灰乳，每公斤槐角用２０－４０克氫氧化鈣，浸泡藥材１２小時，再用９５％乙醇回流提取兩次，用活性炭脫色、過濾、減壓回收乙醇、放置、過濾或離心，得槐屬苷粗品，再用９５％乙醇重結晶，得近無色的槐屬苷結晶。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙全成，韓大慶，賈剛，赫玉芳，
申請(專利權)人：吉林天藥科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：82[中國|長春]