一種細胞制劑及其制備方法和應用技術

本發明專利技術涉及細胞制劑技術領域，特別涉及一種細胞制劑及其制備方法和應用。該細胞制劑為包含間充質干細胞的富血小板血漿。本發明專利技術研究發現，將間充質干細胞和PRP聯合使用后，可顯著提高LVEF水平，并可顯著降低BNP水平，效果好于單獨使用間充質干細胞或PRP，有效率可達80％～90％。可見，本發明專利技術細胞制劑可有效治療心衰。

Cell preparation, preparation method and application thereof

The invention relates to the technical field of cell preparation, in particular to a cell preparation, a preparation method and an application thereof. The cell preparation is a platelet rich plasma containing mesenchymal stem cells. The present study found that the mesenchymal stem cells combined with PRP after use, can significantly improve the level of LVEF, and can decrease the levels of BNP, has better effect than single use of mesenchymal stem cells or PRP, efficiency up to 80% ~ 90%. It can be seen that the cell preparation of the invention can effectively treat heart failure.

【技術實現步驟摘要】
一種細胞制劑及其制備方法和應用
本專利技術涉及細胞制劑
，特別涉及一種細胞制劑及其制備方法和應用。
技術介紹
心力衰竭(heartfailure)簡稱心衰，是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發生障礙，不能將靜脈回心血量充分排出心臟，導致靜脈系統血液淤積，動脈系統血液灌注不足，從而引起心臟循環障礙癥候群，此種障礙癥候群集中表現為肺淤血、腔靜脈淤血。根據心力衰竭發生的緩急，臨床可分為急性心力衰竭和慢性心力衰竭。急性心衰會引發急性肺水腫，起病急，病情可迅速發展至危重狀態。突發的嚴重呼吸困難、端坐呼吸、喘息不止、煩躁不安并有恐懼感，呼吸頻率可達30～50次/分；頻繁咳嗽并咯出大量粉紅色泡沫樣痰；心率快，心尖部常可聞及奔馬律；兩肺滿布濕啰音和哮鳴音。還會引發心源性休克，表現為低血壓、組織低灌注狀態、血流動力學障礙、代謝性酸中毒和低氧血癥。急性心衰常危及生命，必須緊急搶救。目前的臨床治療主要采用藥物治療、介入治療和外科治療等手段：(1)初始治療為經面罩或鼻導管吸氧；嗎啡、袢利尿劑、強心劑等經靜脈給予。使患者取坐位或半臥位，兩腿下垂，減少下肢靜脈回流。(2)病情仍不緩解者應根據收縮壓和肺淤血狀況選擇應用血管活性藥物，如正性肌力藥、血管擴張藥和血管收縮藥等。(3)病情嚴重、血壓持續降低(<90mmHg)甚至心源性休克者，應監測血流動力學，并采用主動脈內球囊反搏、機械通氣支持、血液凈化、心室機械輔助裝置以及外科手術等各種非藥物治療方法。(4)動態測定BNP/NT-proBNP有助于指導急性心衰的治療，治療后其水平仍高居不下者，提示預后差，應加強治療；治療后其水平降低且降幅>30％，提示治療有效，預后好。但這些治療方法只能在一定程度上緩解心力衰竭的發生。干細胞是一類具有自我復制能力和分化能力的多潛能細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫學界將其稱之為“萬用細胞”。經過前人的研究發現，骨髓間充質干細胞在適宜的細胞因子作用下可以作為一種藥物直接或者間接對受損的心肌細胞進行修復或者補充，目前已經成為心衰治療的研究熱點之一。因此，研發一種可有效治療心衰的干細胞制劑成為必然趨勢。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了一種細胞制劑及其制備方法和應用。該細胞制劑可有效治療心衰。為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：本專利技術提供了一種細胞制劑，其包含間充質干細胞的富血小板血漿。富血小板血漿(Platelet-richplasma，PRP)指的是自體全血經離心后得到的血小板濃縮物，含有大量生長因子及蛋白質。血小板中含有大量的生長因子，如表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、轉化生長因子-β(TGF-β)、類胰島素生長因子(IGF)、血管內皮生長因子(VEGF)等。由于其在組織再生方面發揮著十分重要的作用，近年來，它在臨床尤其是口腔的創傷及缺損修復中被人們所重視，并取得了令人較為滿意的效果。本專利技術將PRP與間充質干細胞聯合使用后，能夠更好地發揮間充質干細胞的修復作用，從而可顯著提高左心室射血分數(LVEF)水平，并可顯著降低利鈉肽(BNP)水平，效果好于單獨使用間充質干細胞或PRP，有效率可達80％～90％。可見，本專利技術細胞制劑可有效治療心衰。作為優選，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞(1～10)×106個。在本專利技術提供的實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞1×106個。在本專利技術提供的另一實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞5×106個。在本專利技術提供的另一實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞1×107個。在本專利技術提供的實施例中，間充質干細胞為骨髓間充質干細胞。作為優選，骨髓間充質干細胞為P3代骨髓間充質干細胞。本專利技術還提供了該細胞制劑的制備方法，包括如下步驟：采用富血小板血漿重懸間充質干細胞，得到細胞制劑。在本專利技術中，間充質干細胞的制備方法為：取包含間充質干細胞的培養基，去除培養基，采用消化液進行消化，得到單細胞懸液；將單細胞懸液進行離心，洗滌，得到間充質干細胞。在本專利技術中，將外周血離心，獲得富血小板血漿。在本專利技術提供的實施例中，富血小板血漿的制備方法具體為：將外周血采用300g轉速離心5min，然后采用300g轉速離心5min，最后采用800g轉速離心5min。本專利技術還提供了該細胞制劑在制備提高LVEF水平或降低BNP水平藥物中的應用。本專利技術還提供了該細胞制劑在制備治療心衰藥物中的應用。本專利技術還提供了一種藥物，包括本專利技術提供的細胞制劑。該細胞制劑為包含間充質干細胞的富血小板血漿。在本專利技術提供的實施例中，藥物還包括藥學上可接受的輔料。本專利技術提供了一種細胞制劑及其制備方法和應用。該細胞制劑為包括間充質干細胞的富血小板血漿。本專利技術具有如下有益效果：本專利技術研究發現，將間充質干細胞和PRP聯合使用后，可顯著提高LVEF水平，并可顯著降低BNP水平，效果好于單獨使用間充質干細胞或PRP，有效率可達80％～90％。可見，本專利技術細胞制劑可有效治療心衰。具體實施方式本專利技術公開了一種細胞制劑及其制備方法和應用，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本專利技術。本專利技術的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
技術實現思路
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本專利技術技術。本專利技術提供的細胞制劑及其制備方法和應用中所用生物材料均可由市場購得。下面結合實施例，進一步闡述本專利技術：實施例1：人骨髓間充質干細胞的制備從正規購買渠道獲得骨髓10mL，肝素抗凝后Percoll(1.073×10-3g/L)密度梯度離心，取中間單核細胞層以低糖DMEM洗滌2次，接種入75cm2培養瓶，以含10％FBS的低糖DMEM培養。24h后換液，棄未貼壁的細胞，剩余的貼壁細胞是MSCs。每2～3天換液，待細胞生長至90％匯合后0.25％胰蛋白酶消化傳代。實施例2：PRP的制備取患者外周血10mL，300g離心5min，然后再一次300g離心5min，最后800g離心5min，獲得PRP。實施例3：細胞制劑的制備取實施例1制備的P3代骨髓間充質干細胞，吸去培養基，加入消化液進行消化，之后用適量血清終止消化，輕輕吹打成單細胞懸液。1500rpm，離心5min，棄上清，用4℃PBS洗滌細胞3次后重懸混勻，調整細胞濃度約為107個/mL。采用實施例2獲得的PRP重懸P3代骨髓間充質干細胞，獲得細胞制劑，其組成如下表所示。表1實施例3細胞制劑組成組分含量P3代骨髓間充質干細胞1×106個/mLPRP3.5mL實施例4：細胞制劑的制備取實施例1制備的P3代骨髓間充質干細胞，吸去培養基，加入消化液進行消化，之后用適量血清終止消化，輕輕吹打成單細胞懸液。1500rpm，離心5min，棄上清，用4℃PBS洗滌細胞3次后重懸混勻，調整細胞濃度約為107個/mL。采用實施例2獲得的PRP重懸P3代骨髓間充質干細胞，獲得細胞制劑，其組成如下表所示。表2實施例4細胞制劑組成組分含量P3代骨髓間充質干細胞5×106個/mLPRP3.5mL實施例5：細胞制劑的制備取實施例1制備的P3本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種細胞制劑，其特征在于，所述細胞制劑為包含間充質干細胞的富血小板血漿。

【技術特征摘要】
1.一種細胞制劑，其特征在于，所述細胞制劑為包含間充質干細胞的富血小板血漿。2.根據權利要求1所述的細胞制劑，其特征在于，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞(1～10)×106個。3.根據權利要求1或2所述的細胞制劑，其特征在于，所述間充質干細胞為骨髓間充質干細胞。4.根據權利要求1至3中任一項所述的細胞制劑，其特征在于，所述骨髓間充質干細胞為P3代骨髓間充質干細胞。5.如權利要求1至4中任一項所述細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：采用富血小板血漿重懸間充質干細胞，得到所述細胞制...

【專利技術屬性】
技術研發人員：葛嘯虎，陳海佳，王一飛，趙萌萌，王小燕，
申請(專利權)人：廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44