一種六勝肽的制備方法及其產品技術

一種六勝肽的制備方法，包括Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin合成；和氨基酸鏈延長：將Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin上依次連接Fmoc?Gln(Trt)?OH、Fmoc?Met?OH、Fmoc?Glu(OtBu)?OH、Fmoc?Glu(OtBu)?OH制備得到六勝肽產品；其中Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin通過Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?OH制備得到，Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?OH是將H?Arg(pbf)?OH與Fmoc?Arg(pbf)?OSu進行反應合成得到。

The invention relates to a preparation method of the hexapeptide and its products

A preparation method of six peptides, including Fmoc Arg (PBF) Arg (PBF) NH resin synthesis; and amino acid chain extension: Fmoc Arg (PBF) Arg (PBF) NH resin connected Fmoc Gln (Trt) OH, Fmoc Met OH, Fmoc Glu (OtBu) OH, Fmoc Glu (OtBu) OH prepared collaxyl products; Fmoc Arg (PBF) Arg (PBF) NH resin by Fmoc Arg (PBF) Arg (PBF) prepared by OH, Fmoc Arg () PBF Arg (PBF) OH H is Arg (PBF) OH and Fmoc Arg (PBF) OSu was synthesized by.

【技術實現步驟摘要】
一種六勝肽的制備方法及其產品
本專利技術屬于化妝品
，具體涉及液相片段與固相合成六勝肽的方法及獲得的產品。
技術介紹
六勝肽是一種六個氨基酸組成的活性多肽，其序列為Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，是由突觸蛋白SNAP-25的氮端(AA12～17)衍生而來的六個氨基酸肽鏈，能與SNARE三元復合物相互作用，抑制嗜鉻細胞中受Ca2+調控的兒茶酚胺釋放，從而阻止神經-肌肉間的乙酰膽堿傳導，引起肌肉麻痹。六勝肽是肉毒素類的安全替代品，與之活性相似，具有膜滲透性，有效避免了潛在的毒副作用。由于能夠阻斷神經肌肉間的信息傳導，避免肌肉過度收縮，減少了動態紋的發生，同時還能有效重組膠原彈力，增加彈力蛋白活性，使臉部線條放松。因此，多用于化妝品內作為抗皺成分。目前，有關六勝肽的制備均采用經典固相法完成，然而該方法不夠靈活，Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin偶聯較為困難，導致成本很高，收率較小。因此，開發一種高效率低成本合成六勝肽的方法成為本領域急需解決的技術問題。
技術實現思路
本專利技術解決的技術問題是提供一種固相合成與液相合成相結合的六勝肽的合成方法。該方法既有液相法降低成本、易于放大的優點，又有固相法易于純化、操作簡單的特點，是一種相對理想的六勝肽合成方法。具體來說，本專利技術采用液相法分別合成片段A[Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH]，避開了直接偶聯兩個Fmoc-Arg(pbf)-OH較難的情況，再將片段A[Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH]以單個氨基酸組分的形式，按照經典固相法進行偶聯，制得六勝肽產品。更具體來說，本專利技術通過如下技術方案實現的：一種六勝肽的制備方法，所述方法包括如下步驟(1)Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin合成；以及(2)氨基酸鏈延長：將步驟(1)得到的Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin上依次連接Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH制備得到六勝肽產品；其中，步驟(1)中所述Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin是通過片段Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH制備得到，所述片段Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH是將H-Arg(pbf)-OH與Fmoc-Arg(pbf)-OSu進行反應合成得到。其中，所述Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH的制備方法是將H-Arg(pbf)-OH和Fmoc-Arg(pbf)-OSu溶于N，N-二甲基甲酰胺，加入N,N-二異丙基乙胺進行反應，之后加入水、有機酸調節pH5～6，對其用乙酸乙酯進行萃取分離得到乙酸乙酯相進行濃縮后加入乙醚再次進行濃縮，得到產物Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH；優選所述有機酸為檸檬酸。其中，所述H-Arg(pbf)-OH是通過如下方法合成得到：其中，將Fmoc-Arg(pbf)-OH、哌啶、四氫呋喃混合進行反應，反應后將溶劑蒸干，加入水，之后用鹽酸調節PH≈6，固液分離得到固體，干燥得到產物H-Arg(pbf)-OH。其中，所述鹽酸的濃度是1mol/L；優選所述在用鹽酸調節PH≈6后攪拌15分鐘，再進行過濾。其中，所述Fmoc-Arg(pbf)-OH、哌啶、四氫呋喃之間的比例是每克Fmoc-Arg(pbf)-OH加入0.60ml哌啶、20ml四氫呋喃。其中，所述Fmoc-Arg(pbf)-OSu是通過如下方法合成得到：其中，在Fmoc-Arg(pbf)-OH和HoSu中加入四氫呋喃和二環己基碳二亞胺進行反應，固液分離得到濾液，即為產物Fmoc-Arg(pbf)-OSu。其中，所述Fmoc-Arg(pbf)-OH與N-羥基琥珀酰亞胺、二環己基碳二亞胺摩爾比為1:1.5:1.3。其中，所述步驟(1)合成Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin包括如下步驟：(1)將Rink-Amide-AM-Resin活化；(2)步驟(1)活化后的樹脂中加入哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液，除掉Rink-Amide-AM-Resin上的9-芴甲氧羰基基團；(3)將步驟(2)的Rink-Amide-AM-Resin加入N，N-二甲基甲酰胺，之后與Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺進行反應，得到產物用有機溶劑洗滌，得到保護肽樹脂Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin。其中所述Rink-Amide-AM-Resin樹脂與Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:2:5:5。其中步驟(2)所述氨基酸鏈延長包括如下步驟：(1)在Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin肽樹脂中加入哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液進行反應，去除溶劑后用有機溶劑洗滌得到H2N-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin；(2)將步驟(1)得到的H2N-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin，加入Fmoc-Gln(Trt)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺進行反應，之后用有機溶劑洗滌樹脂，得到保護肽樹脂Fmoc-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin；(3)在Fmoc-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin上按照上述步驟(1)和(2)的方法將Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH依次連接得到Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin；(4)將步驟(3)得到的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin脫9-芴甲氧羰基得到H2N-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin；在H2N-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin加入二氯甲烷、乙酸酐、N,N-二異丙基乙胺進行反應，經固液分離得到產物Ac-HN-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin；然后將其加入到切割液中進行切割反應，經分離、純化得到六勝肽產品。其中，步驟(2)所述Rink-Amide-AM-Resin樹脂與Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺的摩爾比為1:2:5:5；優選步驟(1)和步驟(2)中用有機溶劑進行洗滌是用N，N-二甲基甲酰胺進行洗滌。其中，步驟(4)所述H2N-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-M本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種六勝肽的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：(1)Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin合成；以及(2)氨基酸鏈延長：將步驟(1)得到的Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin上依次連接Fmoc?Gln(Trt)?OH、Fmoc?Met?OH、Fmoc?Glu(OtBu)?OH、Fmoc?Glu(OtBu)?OH制備得到六勝肽產品；其中步驟(1)中所述Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?NH?resin是通過片段Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?OH制備得到，所述片段Fmoc?Arg(pbf)?Arg(pbf)?OH是將H?Arg(pbf)?OH與Fmoc?Arg(pbf)?OSu進行反應合成得到。

【技術特征摘要】
1.一種六勝肽的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：(1)Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin合成；以及(2)氨基酸鏈延長：將步驟(1)得到的Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin上依次連接Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH制備得到六勝肽產品；其中步驟(1)中所述Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin是通過片段Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH制備得到，所述片段Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH是將H-Arg(pbf)-OH與Fmoc-Arg(pbf)-OSu進行反應合成得到。2.如權利要求1所述六勝肽的制備方法，其中所述Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH的制備方法是將H-Arg(pbf)-OH和Fmoc-Arg(pbf)-OSu溶于N，N-二甲基甲酰胺，加入N,N-二異丙基乙胺進行反應，之后加入水、有機酸調節pH5～6，對其用乙酸乙酯進行萃取分離得到乙酸乙酯相進行濃縮后加入乙醚再次進行濃縮，得到產物Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH；優選所述有機酸為檸檬酸。3.如權利要求1或2所述六勝肽的制備方法，其中所述H-Arg(pbf)-OH是通過如下方法合成得到：將Fmoc-Arg(pbf)-OH、哌啶、四氫呋喃混合進行反應，反應后將溶劑蒸干，加入水，之后用鹽酸調節PH≈6，固液分離得到固體，干燥得到產物H-Arg(pbf)-OH。4.如權利要求3所述六勝肽的制備方法，其中所述鹽酸的濃度是1mol/L；優選所述在用鹽酸調節PH≈6后攪拌15分鐘，再進行過濾。5.如權利要求3或4所述六勝肽的制備方法，其中所述Fmoc-Arg(pbf)-OH、哌啶、四氫呋喃之間的比例是每克Fmoc-Arg(pbf)-OH加入0.60ml哌啶、20ml四氫呋喃。6.如權利要求1-5任一項所述六勝肽的制備方法，其中所述Fmoc-Arg(pbf)-OSu是通過如下方法合成得到：在Fmoc-Arg(pbf)-OH和N-羥基琥珀酰亞胺中加入四氫呋喃和二環己基碳二亞胺進行反應，固液分離得到濾液，即為產物Fmoc-Arg(pbf)-OSu。7.如權利要求6所述六勝肽的制備方法，其中所述Fmoc-Arg(pbf)-OH與N-羥基琥珀酰亞胺、二環己基碳二亞胺摩爾比為1:1.5:1.3。8.如權利要求1-7任一項所述六勝肽的制備方法，其中所述步驟(1)合成Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin包括如下步驟：(1)將Rink-Amide-AM-Resin活化；(2)步驟(1)活化后的樹脂中加入哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液，除掉Rink-Amide-AM-Resin上的9-芴甲氧羰基基團；(3)將步驟(2)的Rink-Amide-AM-Resin加入N，N-二甲基甲酰胺，之后與Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺進行反應，得到產物用有機溶劑洗滌，得到保護肽樹脂Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-NH-resin。9.如權利要求8所述六勝肽的制備方法，其中所述Rink-Amide-AM-Resin樹脂與Fmoc-Ar...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王萬科，王惠嘉，王慧，蘇晨燦，張忠旗，李乾，高長波，郭添，韓廣，趙金禮，楊小琳，
申請(專利權)人：陜西慧康生物科技有限責任公司，
類型：發明
國別省市：陜西,61