一種風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法技術

一種風寒感冒顆粒HPLC?特征圖譜的構建方法，包括下述步驟：（1）參照物溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，（2）供試品溶液的制備：取風寒感冒顆粒研細，取約2~5g，精密稱定，（3）色譜條件：采用ZORBAX?SB?C18色譜柱，流動相為以乙腈?0.1％磷酸溶液為3~70：97~30的混合溶液；體積流量0.5～1.5ml?/min；DAD檢測器，波長為190～250nm；柱溫25?～45℃，理論板數均不低于10000，（4）測定：分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到風寒感冒顆粒的HPLC?特征圖譜；本發明專利技術的優點是能有效的監控不同批次間風寒感冒顆粒的質量，方法具有精密度高、重現性好等特點，有利于全面監控產品的質量。

Construction method of HPLC characteristic Atlas of wind cold cold granule

A construction method of fenghanganmao granules HPLC fingerprint, which comprises the following steps of: (1) the reference solution preparation of Puerarin: take control amount of goods, precision said, (2) for sample preparation: fenghanganmao granules porphyrized, about 2~5g, precision said, (3): the ZORBAX SB chromatographic conditions C18 column, the mobile phase was acetonitrile 0.1% phosphoric acid mixed solution of 3~70:97~30; volume flow rate of 0.5 ~ 1.5ml /min; DAD detector, the wavelength of 190 to 250nm; 25 column temperature to 45 DEG C, the number of theoretical plates were not less than 10000 (4) determination: precision draw reference solution and the test solution 5 ~ 20 L, injected into the liquid chromatograph, as determined by high performance liquid chromatography, HPLC fingerprint of fenghanganmao granules; the invention has the advantages of effectively monitoring the different batches The quality of the cold cold granules is characterized by its high precision and good reproducibility, which is beneficial to the overall monitoring of the quality of products.

【技術實現步驟摘要】
一種風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法
本專利技術屬于醫藥領域，具體涉及中成藥風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法。
技術介紹
風寒感冒顆粒是由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風、桂枝、白芷、陳皮、苦杏仁、桔梗、甘草、干姜等十一味中草藥組成。主要功能為解表發汗，疏風散寒。用于感冒身熱，頭痛，咳嗽，鼻塞，流涕等癥。現執行質量標準收載于中成藥部頒標準，標準號為WS3-B-0045-89，標準中未收載薄層色譜鑒別及含量測定等質量控制方法。由于沒有對產品的中間體、成口進行質量監控的有效手段，產品質量不能得到科學的監控，不同廠家生產出的樣品間及批間質量差異較大，導致臨床應用療效差異也較大。為了提高風寒感冒顆粒藥品的質量，已經對全方進行了質量檢測方法研究，但因中藥復方制劑中藥味較多成分復雜不易分離鑒定等特點，僅能建立起幾種專屬性強的定性定量檢測方法對方中個別成分進行監控，雖然現有技術風寒感冒顆粒的檢測方法(專利號：CN103267824B)中對方中麻黃、桔梗進行了定性和定量檢測，但只能反映出制劑中麻黃、桔梗所含成分的質量情況，并不能體現藥品的整體質量情況。到本專利技術中我們對風寒感冒顆粒進行了HPLC特征圖譜試驗研究，建立了特征圖譜的質量檢測方法，并對所建立方法進行了精密度、重復性等方法學驗證試驗，結果表明本專利技術中檢測方法穩定可行。本專利技術克服了風寒感冒顆粒現在執行標準中缺少質量檢測方法的不足，以及現有技術中檢測方法只能反映極少藥物成分質量情況的片面性，建立的特征圖譜測定方法是風寒感冒顆粒質量控制方法的有效補充，能反映出所含化學成分的種類和數量，能有效表征其質量，有利于全面控制產品的質量。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供中成藥風寒感冒顆粒的HPLC特征圖譜的構建方法，該方法包括以下步驟：(1)參照物溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液。(2)供試品溶液的制備:取風寒感冒顆粒研細，取約2～5g，精密稱定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，稱定重量，超聲處理30～60分鐘，待溶液冷卻至室溫，用30～100％甲醇補重，搖勻，用0.22～0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。(3)色譜條件：采用ZORBAXSB-C18色譜柱(柱長為250mm，內徑為4.6mm，粒徑為5μm)；流動相為以乙腈-0.1％磷酸溶液為3～70：97～30的混合溶液；體積流量0.5～1.5ml/min；DAD檢測器，波長為190～250nm；柱溫25～45℃，理論板數均不低于10000。(4)測定：分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到風寒感冒顆粒的HPLC特征圖譜。本專利技術的HPLC特征圖譜的最佳構建方法如下：(一下技術方案中記載的各物質的用量或用量范圍，旨在表明各物質間的用量比例關系，并不限定在記載的具體數量上)優選地，步驟(1)所述參照物溶液濃度為每1ml50％甲醇含50μg葛根素對照品。優選地，步驟(2)所述供試品溶液的制備步驟如下：取風寒感冒顆粒研細，取約2g，精密稱定，精密加入50％甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。優選地，步驟(3)所述流動相為以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫。梯度洗脫的時間及流動相比例為：0～20min，A相：3％、B相：97％；20～35min，A相：3～9％、B相：97～91％；35～60min，A相：9～19％、B相：91～81％；60～85min，A相：19～50％、B相：81～50％；85～90min，A相：50～70％、B相：50～30％；90～100min，A相：70～3％、B相：30～97％；100～110min，A相：3％、B相：97％。按照前述方法構建15批中成藥風寒感冒顆粒的HPLC特征圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件生成由8個共有峰構成的對照特征圖譜，所述共有峰中峰2為鹽酸麻黃堿峰，峰3為鹽酸偽麻黃堿峰，峰4為葛根素峰，峰7為升麻素苷峰，峰8為橙皮苷峰。在對照特征圖譜中，以葛根素為參照峰S，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，所述相對保留時間在第一規定值的±5％之內，所述第一規定值為：0.37-峰1、0.53-峰2、0.58-峰3、1.00-峰S、1.03-峰5、1.05-峰6、1.11-峰7、1.39-峰8；取風寒感冒顆粒，按上述方法操作，得到風寒感冒顆粒樣品特征圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件對樣品圖譜與對照特征圖譜進行分析，相似度大于0.90為合格產品。本專利技術的有益效果如下：(1)用本專利技術所提供的方法能有效的監控不同批次間風寒感冒顆粒的質量，方法具有精密度高、重現性好等特點，有利于全面監控產品的質量。(2)本專利技術的質量檢測方法以鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、葛根素、升麻苷、橙皮苷為對照，建立的風寒感冒顆粒特征圖譜注重各個特征峰的順序和關系，能全面監控產品的整體質量面貌特征，方法科學可靠。(3)本專利技術的最佳紫外吸收波長為210nm。采用本專利技術中方法用DAD檢測器對風寒感冒顆粒進行測定，根據三維掃描圖中所有色譜峰出現最大吸收的檢測波長結果分別調取各波長下色譜圖，當檢測波長為210nm時，特征峰數目較多，各峰面積較高且各特征峰之間分離效果也最好。附圖說明圖1是風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜圖2是風寒感冒顆粒15批次HPLC特征圖譜疊加圖圖3是風寒感冒顆粒對照特征圖譜附圖解釋：圖1中峰2為鹽酸麻黃堿峰，峰3為鹽酸偽麻黃堿峰，峰4為葛根素峰，峰7為升麻素苷峰，峰8為橙皮苷峰。具體實施方式實施例1建立風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜測定方法1儀器：UltiMate3000DGLC高效液相色譜儀，紫外DAD檢測器；MettlerAE240十萬分之一分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；AB204-E電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)等。2試劑與試藥2.1試劑：甲醇等為分析純，磷酸、乙腈為色譜純，水為超純水。2.2試藥：鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、葛根素、升麻苷、橙皮苷(均來自中國食品藥品鑒定研究院)。3方法與結果3.1參照物溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液。3.2供試品溶液的制備:取風寒感冒顆粒研細，取約2g，精密稱定，精密加取50％甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。3.3色譜條件：采用ZORBAXSB-C18色譜柱(柱長為250mm，內徑為4.6mm，粒徑為5μm)；流動相為以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫；體積流量1.0mL/min；DAD檢測器，波長為210nm；柱溫35℃；進樣量10μL。理論板數均不低于10000。梯度洗脫的時間及流動相比例為：0～20min，A相：3％、B相：97％；20～35min，A相：3～9％、B相：97～91％；35～60min，A相：9～19％、B相：91～81％；60～85min，A相：19～50％、B相：81～50％；85～90min，A相本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法，其特征是：包括下述步驟：(1)參照物溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液；(2)供試品溶液的制備：取風寒感冒顆粒研細，取約2～5g，精密稱定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，稱定重量，超聲處理30～60分鐘，放冷，用30～100％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.22～0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；(3)色譜條件：采用ZORBAX?SB?C18色譜柱(柱長為250mm，內徑為4.6mm，粒徑為5μm)；流動相為以乙腈?0.1％磷酸溶液為3～70：97～30的混合溶液；體積流量0.5～1.5ml/min；DAD檢測器，波長為190～250nm；柱溫25～45℃，理論板數均不低于10000；(4)測定：分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到風寒感冒顆粒的HPLC特征圖譜。

【技術特征摘要】
1.一種風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法，其特征是：包括下述步驟：(1)參照物溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，加30～100％甲醇制成每1ml含40～60μg的溶液；(2)供試品溶液的制備：取風寒感冒顆粒研細，取約2～5g，精密稱定，精密加入30～100％甲醇50～100ml，稱定重量，超聲處理30～60分鐘，放冷，用30～100％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.22～0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；(3)色譜條件：采用ZORBAXSB-C18色譜柱(柱長為250mm，內徑為4.6mm，粒徑為5μm)；流動相為以乙腈-0.1％磷酸溶液為3～70：97～30的混合溶液；體積流量0.5～1.5ml/min；DAD檢測器，波長為190～250nm；柱溫25～45℃，理論板數均不低于10000；(4)測定：分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到風寒感冒顆粒的HPLC特征圖譜。2.根據權利要求1所述的一種風寒感冒顆粒HPLC特征圖譜的構建方法，其特征是：包括下述步驟：步驟(1)所述參照物溶液濃度為每1ml50％甲醇含50μg葛根素對照品；步驟(2)所述供試品溶液的制備步驟如下：取風寒感冒顆粒研細，取約2g，精密稱定，精密加入50％甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳萍，李雙，白冰，徐建，高嵩，
申請(專利權)人：吉林修正藥業新藥開發有限公司，
類型：發明
國別省市：吉林,22