降低蛋白質和肽的免疫原性的方法技術

本發明專利技術涉及通過位點特異性地將載體結合至蛋白質或肽來增加蛋白質或肽的血清半衰期和降低其免疫原性的方法，并且涉及其用途。本發明專利技術的生理活性蛋白質或肽的綴合物可以顯著地降低人體內的免疫原性并且因而降低針對蛋白質或肽的抗體生產率。因而，本綴合物具有如下優勢：其在于生理活性蛋白質或肽的降低的臨床效果的現象是低的，并且其可以有效地用于開發針對免疫應答的具有高安全性的長效制劑。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】降低蛋白質和肽的免疫原性的方法
本專利技術涉及通過位點特異性地將載體結合至蛋白質或肽來增加蛋白質或肽的血清半衰期并降低其免疫原性的方法，并且涉及其用途。
技術介紹
對生物治療劑的免疫應答可以廣泛地被誘導用于非人源蛋白和人源蛋白二者。這些應答可以減弱臨床療效，限制效力，并且有時導致病理性疾病或者甚至引起患者的死亡。具體而言，靶向重組自身蛋白(self-protein)的中和抗體的產生可以誘導與患者體內固有的蛋白質的交叉反應，并且因而導致嚴重的后果(參見，LimLC.Hematology200510(3)：255-9)。生物藥物比如單克隆抗體的問題隨著分子生物學的發展大大降低。但是，許多重組蛋白藥物與在體內表達的蛋白序列相同，并且因而仍存在引起中和免疫應答的可能性(參見，NamakaM等，CurrMedResOpin200622(2)：223-39)。雖然可能誘導免疫原性的機制沒有完全清楚，但是已知的是對自身蛋白的抗性可以被施用至患者的產品和患者的各種因素破壞(在Chester，K，Baker，MP和MayerA.ExpertRevClinImmunol20051(4)：549-559，BakerMP和JonesTD.Curr.Opin.DrugDiscDev200710(2)：219-227中綜述)。免疫原性的因素包括施用的劑量、頻率和途徑，蛋白藥物、其制品等的免疫調節能力。誘導免疫應答的最重要的因素是是否存在可以有效地刺激CD4+T細胞應答的抗原識別位點(表位)(在BakerMP和JonesTD.Curr.Opin.DrugDiscDev200710(2)：219-227中綜述)。在另一方面，毒蜥外泌肽-4是在毒蜥蜥蜴的唾液腺中發現的天然肽并且與人GLP-1(胰高血糖素樣肽-1)具有52％序列相似性。毒蜥外泌肽-4和GLP-1具有相似的胰島素分泌功能。但是，GLP-1迅速地被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)去活化，因而具有非常短的半衰期，而通過在第二氨基酸序列中存在甘氨酸而不是丙氨酸，毒蜥外泌肽-4保持對DPP-IV的抗性，并且因而可以更有效地作為II型糖尿病的治療劑。此外，胰島素或其類似物和GLP-1/胰高血糖素的雙重激動劑也被用作糖尿病和肥胖的治療劑。但是，這些非人氨基酸序列的存在可以用作T細胞的抗原識別位點。作為合成的毒蜥外泌肽-4的已經被批準作為II型糖尿病的治療劑的艾塞那肽(Exenatide)(百泌達(Byetta))已經對在臨床試驗中接受艾塞那肽施用持續一年的超過30％的患者產生了抗體。最近被批準的利西拉來(Lixisenatide)已經對大約60-71％的患者產生了抗體(參見，Zinman，B.等，AnnalsofInternalMedicines.2007146(7)：477-486；SchnabelCA等，Peptides200627：1902-1910；DeFronzo，R.A.等，DiabetesCare200528：1092-1100；Buse，J.B.等，DiabetesCare200427：2628-2635)。即，艾塞那肽被公認為待處理的體內外來物質并且產生了抗體。出于該原因，難以可靠地預期治療效果的問題越來越普遍。因此，在出于治療或預防持續長時間段的目的在體內已經施用生理活性蛋白質或肽的情況下，控制免疫原性是重要的。具體而言，與成人疾病有關的生理活性蛋白質或肽比如胰島素或促胰島素釋放肽和抗肥胖蛋白常常被開發為在施用之后能夠在體內持續的長效制劑。此外，即使它們不是長效制劑，存在它們必須被施用多次以持續長時間段的許多情況。因此，不誘導免疫應答是重要的問題。在這些情況下，本專利技術人已經進行了許多研究和實驗來開發不誘導免疫應答的蛋白質或肽的藥物制劑。結果，本專利技術人已經發現，與不結合至載體的蛋白質或肽的免疫原性相比，當載體位點特異性地結合至蛋白質或肽時，免疫原性可以降低，因而完成本專利技術。
技術實現思路
技術問題本專利技術的一個目標是提供降低生理活性蛋白質或肽的免疫原性的方法。本專利技術的另一個目標是提供包含生理活性蛋白質或肽的綴合物的組合物，其中載體經由非肽基連接體結合至生理活性蛋白質或肽的非末端內部殘基。本專利技術的另一個目標是提供制備生理活性蛋白質或肽的綴合物的方法，其中載體結合至生理活性蛋白質或肽的非末端內部殘基。解決問題的方案在一方面，本專利技術提供了與不結合至載體的生理活性蛋白質或肽的免疫原性相比，降低生理活性蛋白質或肽的免疫原性的方法，其包括將載體結合至生理活性蛋白質或肽的非末端內部殘基。在本專利技術的一個具體實施方式中，上述載體的特征在于其選自聚乙二醇、脂肪酸、膽固醇、白蛋白或其片段、白蛋白結合物質、具有特定氨基酸序列的重復單元的聚合物、抗體、抗體片段、FcRn結合物質、體內結締組織或其衍生物、核苷酸、纖連蛋白、運鐵蛋白、彈性蛋白樣多肽(ELP)、XTEN多肽、羧基末端肽(CTP)、結構誘導探針(SIP)、糖類和高分子量聚合物。在本專利技術的另一個具體實施方式中，FcRn結合物質的特征在于其包括免疫球蛋白Fc區。在本專利技術的另一個具體實施方式中，生理活性蛋白質或肽和載體的特征在于它們經由在其間插入的連接體結合。在本專利技術的另一個具體實施方式中，連接體的特征在于其是非肽基連接體。在本專利技術的另一個具體實施方式中，非肽基連接體的特征在于其選自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物可降解聚合物、脂質聚合物、幾丁質、透明質酸和其組合。在本專利技術的另一個具體實施方式中，其特征在于生理活性蛋白質或肽經由選自如下的非肽基聚合物結合至免疫球蛋白Fc區：聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物可降解聚合物、脂質聚合物、幾丁質、透明質酸和其組合。在本專利技術的另一個具體實施方式中，生理活性蛋白質或肽的特征在于其選自抗肥胖肽、促胰島素釋放肽或其類似物、瘦蛋白、胰島素、胰島素類似物、胰高血糖素、人生長激素、生長激素釋放激素、生長激素釋放肽、干擾素、干擾素受體、菌落刺激因子、胰高血糖素樣肽比如GLP-1、GLP-1/胰高血糖素雙重激動劑、腸抑胃肽(GIP)、G蛋白偶聯受體、白介素、白介素受體、酶、白介素結合蛋白、細胞因子結合蛋白、巨噬細胞激活因子、巨噬細胞肽、B細胞因子、T細胞因子、蛋白A、過敏抑制因子、細胞壞死糖蛋白、免疫毒素、淋巴毒素、腫瘤壞死因子、腫瘤抑制因子、轉移生長因子、α-1抗胰蛋白酶、白蛋白、α-乳白蛋白、脫脂載脂蛋白-E、紅細胞生成因子、高度糖基化的紅細胞生成因子、血管生成素、血紅蛋白、凝血酶、凝血酶受體激活肽、血栓調節蛋白、血液因子VII、VIIa、VIII、IX和XIII、纖溶酶激活因子、纖連蛋白結合肽、尿素酶、鏈激酶、蛭素(hirudine)、蛋白C、C反應蛋白、腎素抑制劑、膠原酶抑制劑、超氧化物歧化酶、血小板衍生生長因子、上皮細胞生長因子、表皮生長因子、制管張素、血管緊張肽、骨生長因子、骨刺激蛋白、降鈣素、心鈉素、軟骨誘導因子、依降鈣素、結締組織活化因子、組織因子途徑抑制劑、促卵泡激素、黃體生成素、黃體生成素釋放激素、神經生長因子、甲狀旁腺素、松弛肽、胰泌素、生長調節素、胰島素本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種與不結合至載體的生理活性蛋白質或肽的免疫原性相比降低生理活性蛋白質或肽的免疫原性的方法，其包括將載體結合至所述生理活性蛋白質或肽的非末端內部殘基。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.06.05 KR 10-2014-00686601.一種與不結合至載體的生理活性蛋白質或肽的免疫原性相比降低生理活性蛋白質或肽的免疫原性的方法，其包括將載體結合至所述生理活性蛋白質或肽的非末端內部殘基。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述載體選自聚乙二醇、脂肪酸、膽固醇、白蛋白或其片段、白蛋白結合物質、具有特定氨基酸序列的重復單元的聚合物、抗體、抗體片段、FcRn結合物質、體內結締組織或其衍生物、核苷酸、纖連蛋白、運鐵蛋白、彈性蛋白樣多肽(ELP)、XTEN多肽、羧基末端肽(CTP)、結構誘導探針(SIP)、糖類和高分子量聚合物。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述FcRn結合物質包括免疫球蛋白Fc區。4.根據權利要求1所述的方法，其中所述生理活性蛋白質或肽與所述載體經由在其間插入的連接體結合。5.根據權利要求3所述的方法，其中所述連接體是非肽基連接體。6.根據權利要求4所述的方法，其中所述非肽基連接體選自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物可降解聚合物、脂質聚合物、幾丁質、透明質酸和其組合。7.根據權利要求4所述的方法，其中所述生理活性蛋白質或肽經由選自如下的非肽基聚合物結合至免疫球蛋白Fc區：聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物可降解聚合物、脂質聚合物、幾丁質、透明質酸和其組合。8.根據權利要求1所述的方法，其中所述生理活性蛋白質或肽選自抗肥胖肽、促胰島素釋放肽或其類似物、瘦蛋白、胰島素、胰島素類似物、胰高血糖素、人生長激素、生長激素釋放激素、生長激素釋放肽、干擾素、干擾素受體、菌落刺激因子、胰高血糖素樣肽比如GLP-1、GLP-1/胰高血糖素雙重激動劑、腸抑胃肽(GIP)、G蛋白偶聯受體、白介素、白介素受體、酶、白介素結合蛋白、細胞因子結合蛋白、巨噬細胞激活因子、巨噬細胞肽、B細胞因子、T細胞因子、蛋白A、過敏抑制因子、細胞壞死糖蛋白、免疫毒素、淋巴毒素、腫瘤壞死因子、腫瘤抑制因子、轉移生長因子、α-1抗胰蛋白酶、白蛋白、α-乳白蛋白、脫脂載脂蛋白-E、紅細胞生成因子、高度糖基化的紅細胞生成因子、血管生成素、血紅蛋白、凝血酶、凝血酶受體激活肽、血栓調節蛋白、血液因子VII、VIIa、VIII、...

【專利技術屬性】
技術研發人員：樸晟喜，金承洙，林亨奎，崔宰赫，崔仁榮，權世昌，
申請(專利權)人：韓美藥品株式會社，
類型：發明
國別省市：韓國,KR