構(gòu)建氨基末端免疫球蛋白融合蛋白的方法及其組合物技術(shù)

本文公開了包含第一免疫球蛋白區(qū)的免疫球蛋白融合蛋白，該第一免疫球蛋白區(qū)在免疫球蛋白區(qū)的氨基末端附接至治療肽。該免疫球蛋白融合蛋白可進(jìn)一步包含第二免疫球蛋白區(qū)。該免疫球蛋白融合蛋白可進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)連接肽、接頭、蛋白水解切割位點(diǎn)、內(nèi)部接頭或其組合。該免疫球蛋白融合蛋白可進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)附加治療肽。本文還公開了包含該免疫球蛋白融合蛋白的組合物以及使用該免疫球蛋白融合蛋白治療或預(yù)防受試者的疾病或病況的方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】構(gòu)建氨基末端免疫球蛋白融合蛋白的方法及其組合物交叉引用本申請(qǐng)要求2014年6月6日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)62/009,054、2014年6月29日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)62/030,526和2014年10月15日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)62/064,186的權(quán)益，這些美國臨時(shí)申請(qǐng)均通過引用整體并入。
技術(shù)介紹
抗體是脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)響應(yīng)于外來物質(zhì)(抗原)形成的天然蛋白質(zhì)，主要用于防御感染。超過一個(gè)世紀(jì)以來，抗體已經(jīng)在人工條件下在動(dòng)物中誘導(dǎo)，并采集用于疾病病況的治療或診斷，或用于生物學(xué)研究。每個(gè)單獨(dú)的免疫球蛋白生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)生單一類型的具有在化學(xué)上確定的組成的免疫球蛋白，但是，從響應(yīng)于抗原接種的動(dòng)物血清中直接獲得的抗體實(shí)際上包含由單獨(dú)的免疫球蛋白生產(chǎn)細(xì)胞的總體(ensemble)制得的不同分子的總體(例如，多克隆抗體)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本文公開了用于產(chǎn)生免疫球蛋白融合蛋白的方法以及免疫球蛋白融合蛋白的組合物。這些方法和組合物可用于許多應(yīng)用中，例如用于各種疾病和病況的治療。所述方法和組合物還可用于改善治療肽向靶細(xì)胞、靶組織或靶腫瘤的遞送。本文提供了一種免疫球蛋白融合蛋白，其包含：第一免疫球蛋白區(qū)；非來源于免疫球蛋白的第一治療肽；以及連接肽；其中所述連接肽將所述第一治療肽連接至所述第一免疫球蛋白區(qū)的氨基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)進(jìn)一步包含免疫球蛋白輕鏈的恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白進(jìn)一步包含第二免疫球蛋白區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)進(jìn)一步包含免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)進(jìn)一步包含免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)進(jìn)一步包含免疫球蛋白輕鏈的恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列至少約或約50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列約或至少約50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于曲妥珠單抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于曲妥珠單抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于帕利珠單抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于帕利珠單抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽包含約0個(gè)至約50個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽包含約1個(gè)至約50個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽包含約1個(gè)至約20個(gè)氨基酸，或約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽的氨基酸不形成規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽包含與SEQIDNO:115-118、237-239中的任一個(gè)的氨基酸序列約或至少約50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述連接肽包含與SEQIDNO:115-118、237-239中的任一個(gè)的氨基酸序列至少約80％相同的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的治療肽的活性相當(dāng)(comparable)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一免疫球蛋白區(qū)的活性與天然第一免疫球蛋白區(qū)的活性相當(dāng)。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的治療肽的活性相當(dāng)，并且所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一免疫球蛋白區(qū)的活性與所述天然第一免疫球蛋白區(qū)的活性相當(dāng)。本文進(jìn)一步提供了免疫球蛋白融合蛋白，其包含：第一免疫球蛋白區(qū)；非來源于免疫球蛋白的第一治療肽；以及連接肽；其中所述連接肽將所述第一治療肽連接至所述第一免疫球蛋白區(qū)的氨基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的治療肽的活性相當(dāng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一免疫球蛋白區(qū)的活性與天然第一免疫球蛋白區(qū)的活性相當(dāng)。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的治療肽的活性相當(dāng)，并且所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一免疫球蛋白區(qū)的活性與所述天然第一免疫球蛋白區(qū)的活性相當(dāng)。在一個(gè)實(shí)例中，所述免疫球蛋白融合蛋白的免疫球蛋白區(qū)的活性為沒有所述治療肽和/或連接肽的免疫球蛋白融合蛋白的免疫球蛋白區(qū)的活性的約或至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％。在一些實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白的免疫球蛋白區(qū)對(duì)其同源底物(cognatesubstrate)(例如抗原)具有至少一些活性。在一些實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白的免疫球蛋白區(qū)對(duì)其同源底物沒有或幾乎沒有活性。在一些實(shí)施方案中，相當(dāng)?shù)幕钚员硎舅雒庖咔虻鞍兹诤系鞍椎闹委熾木哂性跊]有所述免疫球蛋白區(qū)和/或連接肽時(shí)的治療肽所具有的活性。在一個(gè)實(shí)例中，所述免疫球蛋白融合蛋白的治療肽的活性為在沒有所述免疫球蛋白區(qū)和/或連接肽時(shí)的免疫球蛋白融合蛋白的治療肽的活性的約或至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％。在一些實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白的治療肽對(duì)其同源底物(例如結(jié)合配偶體)具有增強(qiáng)的活性。在一些實(shí)施方案中，所述治療肽的活性為在沒有所述免疫球蛋白區(qū)和/或連接肽時(shí)的治療肽的活性的約或至少約110％、120％、140％、160％、180％、200％、250％、300％、400％、450％、500％、550％、600％或800％。在一些實(shí)施方案中，所述連接肽的氨基酸不形成規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)，包括α螺旋和β鏈。本文進(jìn)一步提供了免疫球蛋白融合蛋白，其包含：第一免疫球蛋白區(qū)；非來源于免疫球蛋白的第一治療肽；以及任選的連接肽；其中所述任選的連接肽將所述第一治療肽連接至所述第一免疫球蛋白區(qū)的氨基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白中的治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的治療肽的活性相當(dāng)。在一個(gè)實(shí)施方案本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種免疫球蛋白融合蛋白，其包含：a.第一免疫球蛋白區(qū)；b.非來源于免疫球蛋白的第一治療肽；以及c.連接肽；其中所述連接肽將所述第一治療肽連接至所述第一免疫球蛋白區(qū)的氨基末端。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2014.06.06 US 62/009,054;2014.07.29 US 62/030,526;1.一種免疫球蛋白融合蛋白，其包含：a.第一免疫球蛋白區(qū)；b.非來源于免疫球蛋白的第一治療肽；以及c.連接肽；其中所述連接肽將所述第一治療肽連接至所述第一免疫球蛋白區(qū)的氨基末端。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其進(jìn)一步包含第二免疫球蛋白區(qū)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)，免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)，或免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)和免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)兩者。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)包含免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)，免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)，或免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)和免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)兩者。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:5-8中的任一個(gè)的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于曲妥珠單抗免疫球蛋白序列、帕利珠單抗免疫球蛋白序列或曲妥珠單抗免疫球蛋白序列和帕利珠單抗免疫球蛋白序列兩者的氨基酸序列。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)包含基于或來源于曲妥珠單抗免疫球蛋白序列、帕利珠單抗免疫球蛋白序列或曲妥珠單抗免疫球蛋白序列和帕利珠單抗免疫球蛋白序列兩者的氨基酸序列。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述連接肽包含約1個(gè)至約50個(gè)氨基酸。10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述連接肽的氨基酸不形成規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)。11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述連接肽包含與SEQIDNO:115-118、237-239中的任一個(gè)的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一治療肽的活性與標(biāo)準(zhǔn)使用制劑中的第一治療肽的活性相當(dāng)。13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述免疫球蛋白融合蛋白中的第一免疫球蛋白區(qū)的活性與天然第一免疫球蛋白區(qū)的活性相當(dāng)。14.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)具有式I：A2-E1-T2-E2，其中A2為所述第二免疫球蛋白區(qū)，E1為第一延伸肽，E2為第二延伸肽，并且T2為第二治療肽。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中E1包含與SEQIDNO:119的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。16.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中E2包含與SEQIDNO:120的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。17.根據(jù)權(quán)利要求14-16中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中T2為激素。18.根據(jù)權(quán)利要求14-17中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中T2對(duì)于治療代謝紊亂和/或由所述代謝紊亂引起的疾病是有效的。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述代謝紊亂為脂肪代謝障礙、糖尿病、高甘油三酯血癥或其組合。20.根據(jù)權(quán)利要求14-19中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中T2包含與瘦素氨基酸序列和/或SEQIDNO:96的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。21.根據(jù)權(quán)利要求2、14-20中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:43的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。22.根據(jù)權(quán)利要求2、14-20中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)包含與SEQIDNO:44的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。23.根據(jù)權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其進(jìn)一步包含附加治療肽。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述附加治療肽附接至所述第一免疫球蛋白區(qū)。25.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第二免疫球蛋白區(qū)附接至附加治療肽。26.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽為GLP-1受體激動(dòng)劑或其合成物。27.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽為胰高血糖素類似物或其合成物。28.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽為激素或其合成物。29.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽與鉀通道結(jié)合。30.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽為神經(jīng)毒素。31.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽為屬于胰島素超家族的激素。32.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽包含與毒蜥外泌肽-4氨基酸序列和/或SEQIDNO:95的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。33.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽包含與SEQIDNO:97的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。34.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽包含與SEQIDNO:98的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。35.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽包含與胰島素氨基酸序列和/或SEQIDNO:105的氨基酸序列約或至少約80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列。36.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一治療肽包含與泌酸調(diào)節(jié)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：峰·王，巖·劉，英·王，付廣森，彼得·G·舒爾茨，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：加州生物醫(yī)學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：美國,US