制備9α-羥基-3-氧代-4,24(25)-豆甾二烯-26-羧酸衍生物的方法技術

本發明專利技術涉及通式（Ⅰ）表示的新的９α－羥基－３－氧代－４，２４，（２５）－豆甾二烯－２６－羧酸衍生物，＆這里，Ｍ代表氫，Ｃ－［１－４］烷基或藥學上可接受的陽離子。本發明專利技術還涉及制備這些化合物的方法。通式（Ⅰ）表示的新化合物顯示出抗血膽甾醇過多的作用。（*該技術在2010年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及通式(Ⅰ)表示的新的9α-羥基-3-氧代-4，24(25)-豆甾二烯-26-羧酸衍生物， 這里M代表氫、C1-4烷基或藥學上可接受的陽離子，以及含有這些化合物的藥物組合物。本專利技術還涉及通過β-谷甾醇或來源于植物的含β-谷甾醇的甾醇的微生物降解，如果需要的話，接著進行成鹽或酯化反應，制備通式(Ⅰ)的化合物的方法，和制備含有通式(Ⅰ)的化合物的藥物組合物的方法。在通式(Ⅰ)表示的化合物的藥學上可接受的鹽包括那些與無機陽離子或有機陽離子所生成的鹽，這些離子如鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子、鋁離子、鋅離子、銨離子、亞乙二銨離子、甲基三羥甲基銨離子或四甲基銨離子。本專利技術通式(Ⅰ)表示的化合物(這里M如前所述)是新的，并且具有價值的藥理性質;這些化合物也作為制備藥學上重要的甾族衍生物的起始原料。已經知道，利用甾醇作為碳源時細菌降解甾族化合物的骨架和側鏈。C.J.Sih及其合作者已經闡明了甾醇側鏈的降解機理〔J.Am.Chem.Soc.89，1957(1967);同上，104，4718(1982);同上，104，4720(1982)〕。膽甾醇的側鏈降解始于側鏈末端的羥基化。26位碳原子上羥基的氧化導致形成羧酸，后者通過脂肪酸特有的β-氧化機理降解，其結果是逐步縮短側鏈。在24位碳原子上有一個乙基的β-谷甾醇的側鏈降解與膽甾醇的側鏈降解不同。在降解中，細菌降解側鏈在連結24位碳原子的28位碳原子上引入羧基，然后通過β-氧化機理使24位和28位碳原子之間的鍵斷裂。側鏈降解的同時，酶催化轉換影響甾族化合物的骨架，導致骨架的分裂，接著就是環系統的完全降解。骨架分裂以下述方式發生從甾醇形成具有9α-羥基-1，4-二烯-3-酮結構的甾族衍生物，接著自發重排生成毫無治療價值的斷甾族化合物，斷甾族化合物中的骨架B環上9位和10位碳原子之間的鍵是斷裂的。〔R.M.Dodson和R.D.MuirJ.Am.Chem.Soc.83，4627(1961);K.Schubert及合作者Z.Naturforsch 156，584(1960)〕。廿世紀七十年代，通過導致遺傳突變的處理，從應用甾醇的細菌制得了改變了遺傳性質的菌株。這些菌株沒有催化引發甾族類化合物骨架降解的反應的活性酶。人們也已知道，當形成原生質體〔J.Tomcsik和S.Guex-HolzerSchweiz.Z.Allg.Path.Bact.15，517(1952);C.WeibullJ.Bacteriol.66，688(1953)〕或原生質球狀體〔H.Sato和其合作者Canad.J.Microbiol，11，807(1965)〕時，在等滲條件下通過酶催化水解，能夠全部或部分地分解細菌的細胞壁;細菌的細胞壁能夠再生。原生質體或球狀原生質體的聚乙二醇誘導熔合涉及遺傳重組，產生了帶有新的遺傳信息的細胞〔K.Fodor和L.AlfoldiProc.Natl.Acad.Sci.USA73，2147(1976);P.Schaeffer及其合作者Proc.Natl.Acad.Sci.USA73，2151(1976);N.Rastogi及其合作者J.Gen.Microbiol，129，1227(1983);同上，137a，135(1986)〕。我們使用G.E.Peterson及其合作者的方法〔J.Lipid Research 3，275(1962)〕，從各種土壤樣品中分離出了降解谷甾醇的微生物。從使用甾醇的微生物菌株中，我們挑選了分枝桿菌菌株;通過使用UV輻射的遺傳致變處理，我們從分枝桿菌菌株制得了突變菌株，這一菌株不再降解甾族化合物骨架。通過使用N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍的遺傳致變處理，我們從這種菌種株培養出能進行遺傳標記的突變菌株，比如那些需要各種培養基(腺嘌呤、吡咯氨酸、纈氨酸)的菌株或那些抗各種抗生素(例如鏈酶素)的菌株。通過體內遺傳重組，該遺傳重組使用了帶有這些遺傳標記突變菌株的原生質球狀融熔體，我們培養出了重組分枝桿菌菌株，該菌株部分地降解甾醇側鏈。標記名稱BCS394下這種類型的分枝桿菌菌株生產出新的尚未發表的谷甾醇降解產物，該產物為主要產物，比如9α-羥基-3-氧代-4，24(25)-豆甾二烯-26-羧酸(Ⅰ，這里M代表氫)和9α-羥基-3-氧代-4，24(25)-豆甾二烯-26-羧酸甲酯(Ⅰ，這里M是甲基)。上述產物寄存在國家農業和工業微生物收藏中心(布達佩斯)，寄存號是NCAIM B(P)001038。寄存號是NCAIM B(P)001038的分枝桿菌菌株的分類學性質如下微生物菌落呈灰白色;在45℃下繁殖，在50℃和無氧情況下不能繁殖。該菌株能有效地利用氯化銨、硝酸鈣、硝酸鈉和磷酸氫銨作為唯一的氮源，以及葡萄糖、丙三醇、果糖、麥芽糖、木糖、琥珀酸鈉、丙酮酸鈉和醋酸鈉作為唯一的碳源;它不能利用蔗糖、淀粉和阿拉伯糖。該菌株不能降解酪氨酸，并且缺乏色素形成作用。我們進一步出乎預料地發現，通式(Ⅰ)表示的新化合物(這里M代表的意義如前述)是哺乳動物體內膽固醇生物合成的強抑制劑，并能有效地降低血漿中膽固醇含量。廿世八十年代，流行病學研究揭示出這樣的事實血漿中高的膽甾醇含量是冠狀動脈粥樣硬化發病率高的主要危險因素。膽甾醇生物合成的主要器官是肝臟;合成的起始原料是乙酸，膽甾醇合成路線以具有萜烯結構的甲瓦龍酸和角鯊烯為中間體〔K.BlockArgew.Chem.77，944(1965);F.LynenAngew.Chem.77，929(1965)〕。在抑制膽甾醇生物合成的物質中，8(14)-脫氫-15-氧代甾醇的微生物最為重要，其中最有效的試劑是3β-羥基-5α-膽甾基-8(14)-烯-15-酮(Colestolone)，其顯著的降低血漿膽甾醇效果已在幾種動物體、也在人體內得到了證明〔G.J.schroepfer jr.及其合作者J.Biol.Chem.263、4110(1988);G.F.Schroepfer jr.及其合作者Proc.Natl.Acad.Sci.USA79，3042(1982)〕。以9α-羥基-3-氧代-4，24(25)-豆甾二烯-26-羧酸(Ⅰ，這里M代表氫)為例說明化合物的抑制膽甾醇生物合成效果。將該化合物的抑制效果與A.Erdo及其合作者〔Eur.J.Biochem.77，31(1977);Biochim.Biophys.Acta.486，71(1977)方法中3β-羥基-5α-膽甾基-8(14)-烯-15-酮(Colestolone)的抑制效果進行對比，A.Endo等研究了在大鼠肝臟均漿中將放射標記的乙酸引入膽甾醇的情況。實驗中使用了重50-60g的Hannover wistar雄性大鼠。實驗前，在顛倒白天黑夜的環境(白天從下午四點到早晨四點，黑夜從早晨四點到下午四點)中，以富集有5%膽甾醇胺(cholestyramine)的咀嚼飼料喂養大鼠一星期;大鼠可以無限制地得到飼料和飲水。實驗當天將大鼠去頭，肝臟浸入冰冷的Krebs/Ringer碳酸氫鹽緩沖液中，并切成碎片。使用組織均質化器并緩緩操作，我們制得天然的肝臟均漿。稱取100mg濕潤的肝臟均漿置于玻璃塞試管中。上述操作都在穩定的冷卻下進行。培育混合物包本文檔來自技高網...

【技術保護點】
制備式（Ⅰ）表示的９α－羥基－３－氧代－４，２４（２５）－豆甾二烯－２６－羧酸衍生物的方法，＊＊＊（Ⅰ）這里，Ｍ代表氫、Ｃ↓［１－４］烷基或藥學上可接受的陽離子，包括通過含有可被利用的碳源、氮源以及天然鹽培養基里的寄存號為ＮＣＡＩＭ Ｂ（Ｐ）００１０３８的分枝桿菌ＳＰ．ＢＣＳ－３９４或其突變物的浸入需氧培養，發酵β－谷甾醇或含有來源于植物的β－谷甾醇的甾醇混合物，如果需要的話，可將通式（Ⅰ）表示的化合物，這里Ｍ代表氫和／或甲基，從培養基中分離出來，如果需要，還可以將通式（Ⅰ）表示的化合物，這里Ｍ代表氫，轉化為通式（Ⅰ）表示的化合物，這里Ｍ代表Ｃ↓［１－４］烷基或藥學上可接受的陽離子。

【技術特征摘要】
...

【專利技術屬性】
技術研發人員：加伯安布拉斯，安德烈亞梅德斯帕克，安東尼亞杰科尼博卡，安扎斯加沃，埃娃伊爾凱，吉奧吉哈杰斯，拉茲洛西伯尼，約茲塞夫納吉加拉霍宛徹，艾姆爾莫拉維克斯克，
申請(專利權)人：格德昂理查德化學工廠股份公司，
類型：發明
國別省市：HU[匈牙利]