綠色木霉菌及其規(guī)模化制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種綠色木霉菌及其規(guī)模化制備方法，屬于木霉菌的制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)所述的綠色木霉菌，該菌株為木霉(Trichoderma)屬中的綠色木霉菌株HS?F9，該菌株的保藏編號(hào)為CGMCC?No.12079。所述的綠色木霉菌的規(guī)模化制備方法，采用液固雙相發(fā)酵工藝，經(jīng)液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵及固體培養(yǎng)基分盤發(fā)酵，固態(tài)發(fā)酵過程采用中央空調(diào)、溫控系統(tǒng)和高壓微霧加濕器進(jìn)行控溫控濕，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫烘干后磨料制粉。本發(fā)明專利技術(shù)所述的綠色木霉菌，其抗菌光譜性強(qiáng)，還具有一定的促進(jìn)作物生長(zhǎng)的作用；同時(shí)本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種簡(jiǎn)單易行的規(guī)模化制備方法，效率高，成本低。

Trichoderma viride and its large-scale preparation method

The invention relates to a green Trichoderma and a large-scale preparation method thereof, belonging to the technical field of the preparation of trichoderma. The invention of Trichoderma viride, Trichoderma strains for the (Trichoderma) HS green Trichoderma strains of the genus F9, the accession number of the strain is CGMCC No.12079. Large scale preparation method of Trichoderma viride said, using the liquid-solid two-phase fermentation process, the liquid medium and solid medium fermentation seed disk fermentation, solid state fermentation using central air conditioning, temperature control system and high-pressure micro mist humidifier for controlling temperature and humidity, fermentation products by low-temperature drying after abrasive powder. The invention of Trichoderma viride, its antibacterial spectrum and strong, but also has a certain role in promoting the growth of crops; at the same time provide a large scale preparation method, a simple and easy method of the invention has high efficiency, low cost.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
綠色木霉菌及其規(guī)模化制備方法
本專利技術(shù)涉及一種綠色木霉菌及其規(guī)模化制備方法，屬于木霉菌的制備

技術(shù)介紹
植物土傳病害是一類極其常見的植物病害，包括根腐病、立枯病、猝倒病、枯萎病等，病原物通常侵染植物根部，引起作物根部乃至全株的病害，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于植物土傳病害的防治，常規(guī)方法包括化學(xué)防治和生物防治。其中，化學(xué)防治對(duì)大多數(shù)病害蟲防效甚微，且化學(xué)農(nóng)藥會(huì)造成大量農(nóng)藥殘留，造成環(huán)境污染，危害人類健康；同時(shí)，長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥是的病原菌對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，進(jìn)而導(dǎo)致化學(xué)防效不斷下降甚至失效。生物防治由于克服了化學(xué)防治的上述弊端，且對(duì)大多土傳病害經(jīng)濟(jì)有效，因而越來越受到人們的青睞和重視。木霉(Trichoderma)屬于半知菌類、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，是一類廣泛分布于土壤、空氣、枯枝落葉及各種發(fā)酵物上的真菌。綠色木霉(Trichodermaviride)在木霉屬中是一種較為理想的抗土傳病的半知菌，不僅效果快，且抗菌的光譜性強(qiáng)，還具有一定的促進(jìn)作物生長(zhǎng)的作用。綠色木霉尤其對(duì)防治土壤中國(guó)的立枯病和赤霉病具有快速而顯著的作用。此外，綠色木霉還可以對(duì)作物的營(yíng)養(yǎng)利用、環(huán)境溫度及光照等適應(yīng)方面發(fā)揮促進(jìn)作用。因此，綠色木霉成為目前較為具有研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景的生物防治劑。目前，綠色木霉菌劑的生產(chǎn)工藝主要為固態(tài)發(fā)酵，普遍存在生產(chǎn)周期長(zhǎng)、產(chǎn)孢量低、成本高等問題，阻礙了綠色木霉的規(guī)模化生產(chǎn)進(jìn)程。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種綠色木霉菌，其抗菌光譜性強(qiáng)，還具有一定的促進(jìn)作物生長(zhǎng)的作用；同時(shí)本專利技術(shù)提供了一種簡(jiǎn)單易行的規(guī)模化制備方法，效率高，成本低。本專利技術(shù)所述的綠色木霉菌，該菌株為木霉(Trichoderma)屬中的綠色木霉菌株HS-F9，該綠色木霉菌株已于2016年1月18日，保藏至中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，分類命名為綠色木霉菌(Trichodermaviride)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12079。綠色木霉菌株是從山東省淄博市沂源縣大張莊鎮(zhèn)落葉覆蓋的枯樹根部土壤中采用羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基和纖維素剛果紅鑒別培養(yǎng)基涂布分離所得的高產(chǎn)孢菌株。用所述的綠色木霉菌制得生物防治品，生物防治品用于防治番茄根結(jié)線蟲病或溫室黃瓜及番茄灰霉病等病害。所述的綠色木霉菌的規(guī)模化制備方法，采用液固雙相發(fā)酵工藝，經(jīng)液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵及固體培養(yǎng)基分盤發(fā)酵，固態(tài)發(fā)酵過程采用中央空調(diào)、溫控系統(tǒng)和高壓微霧加濕器進(jìn)行控溫控濕，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫烘干后磨料制粉。所述液體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的原料制成：葡萄糖0.01％-3％，酵母粉0.01％-3％，蛋白胨0.01％-2％，磷酸氫二鉀0.01％-2％，硫酸鎂0.01％-2％，硫酸亞鐵0.01％-2％，氯化鋅0.01％-1％。所述固體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的原料制成：主料50％-90％，輔料10％-45％，無機(jī)鹽0.05％-5％；固體培養(yǎng)基的含水量為30％-70％；主料中，面粉與麩皮的質(zhì)量比為1:1；輔料中，玉米粉、豆粕、花生殼的質(zhì)量比為2:1:1；無機(jī)鹽類由以下質(zhì)量體積百分含量的溶液制成：磷酸二氫鉀0.01％-2％、檸檬酸0.01％-2％、硫酸亞鐵0.01％-1％、硫酸鎂0.01％-1％；制備固體培養(yǎng)基時(shí)，先將無機(jī)鹽溶解在水中，再與主料和輔料攪拌混合。所述的液固雙相發(fā)酵工藝，是先將綠色木霉菌株接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，再采用自動(dòng)化接種工藝將液體種子接種到固體培養(yǎng)基中進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，自動(dòng)化接種工藝中的接種量為1％-15％。所述分盤發(fā)酵是指當(dāng)綠色木霉進(jìn)入快速生長(zhǎng)期、溫度超過35℃時(shí)，將半成品曲料轉(zhuǎn)移到不銹鋼篩盤中繼續(xù)發(fā)酵。所述固態(tài)發(fā)酵過程中，溫度控制在20-35℃，濕度控制在80％-99％。所述低溫烘干時(shí)，溫度控制在25-50℃。所述生產(chǎn)過程中所有與滅過菌的物料直接或間接接觸的設(shè)備均是采用純不銹鋼材料或其他不生銹、耐腐蝕、抗老化、易清洗的材料制成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下有益效果：(1)固體培養(yǎng)基所用的麩皮、玉米粉、豆粕、花生殼來源廣泛、價(jià)格低廉，大大降低了生產(chǎn)成本；(2)所有與滅過菌的物料直接或間接接觸的設(shè)備都是采用純不銹鋼制作，便于清洗消毒，且耐腐蝕、抗老化，解決了清洗和滅菌的死角問題，經(jīng)過多次實(shí)踐檢驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)設(shè)備檢測(cè)零雜菌的突破；(3)采用蒸球蒸料、接種機(jī)自動(dòng)化接種工藝，在不增加耗能的情況下，勞動(dòng)效率提高了5倍，每天運(yùn)行的班次由傳統(tǒng)的1個(gè)增加至2個(gè)，產(chǎn)量翻了10翻，生產(chǎn)效率大幅度提高；(4)采用液體接種，均勻度大為改觀，不再出現(xiàn)局部生長(zhǎng)過快或者過慢現(xiàn)象，且增加了物料的濕度，又避免了物料發(fā)粘狀況；此外，液體接種后可直接分盤發(fā)酵，省去堆積培養(yǎng)環(huán)節(jié)，節(jié)省勞動(dòng)力，增加生產(chǎn)穩(wěn)定性；(5)采用分盤發(fā)酵的方式，將快速生長(zhǎng)期的半成品曲料轉(zhuǎn)移到不銹鋼篩盤中繼續(xù)發(fā)酵，增加了物料的表面積，排除二氧化碳等廢氣，使曲料重新充分與氧氣接觸，又便于噴水降溫、加濕，更好的控制綠色木霉的產(chǎn)酶發(fā)孢條件，因?yàn)楫?dāng)綠色木霉到達(dá)菌絲生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，耗氧量達(dá)到峰值，同時(shí)產(chǎn)生大量的熱與二氧化碳等廢氣，通風(fēng)量的增加帶走了曲料的部分水分，溫度的急劇升高(35℃以上)、廢氣的大量產(chǎn)生、水分的丟失嚴(yán)重惡化了綠色木霉的生長(zhǎng)繁殖條件，導(dǎo)致傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品的各種酶活力低；(6)生產(chǎn)過程中，采用中央空調(diào)、溫控系統(tǒng)、高壓微霧加濕器進(jìn)行嚴(yán)格控溫控濕，中央空調(diào)的三級(jí)空氣過濾裝置，使進(jìn)風(fēng)完全無菌，其中散熱器、表冷器的使用，可實(shí)現(xiàn)冷暖風(fēng)的自由輸送，實(shí)現(xiàn)了溫度的自動(dòng)精準(zhǔn)控制；高壓微霧加濕器具有耗電少、成本低、霧化效果佳的優(yōu)點(diǎn)，其產(chǎn)生的水粒子直徑僅為1-5μm，在空氣中水粒子分布均勻，不產(chǎn)生凝水，運(yùn)行穩(wěn)定性好、加濕效率高(最高達(dá)到99％)等特點(diǎn)，能精準(zhǔn)控濕且易于自動(dòng)化管理；因此，中央空調(diào)、溫控系統(tǒng)及高壓微霧加濕器的應(yīng)用解決了傳統(tǒng)工藝梅雨季節(jié)濕度大、溫度高、物料發(fā)粘、燒曲壞曲，寒冬季節(jié)干燥(北方)、溫控效果差、易干曲等難題，實(shí)現(xiàn)了固體發(fā)酵過程條件的精準(zhǔn)控制；(7)建立了一條全新的低溫烘干工藝，提高了烘干效率及孢子活性，烘干車間室內(nèi)地面安裝蒸汽盤管來提高室溫；車間密封，阻隔外界潮氣進(jìn)入；進(jìn)風(fēng)經(jīng)過三級(jí)空氣過濾后，再經(jīng)過除濕器除濕后方能進(jìn)入烘干車間，完全阻隔外界雜質(zhì)雜菌以及潮氣進(jìn)入；室內(nèi)每100m3設(shè)750w風(fēng)扇一臺(tái)，增加了室內(nèi)空氣流動(dòng)性；排風(fēng)扇兩臺(tái)，及時(shí)將濕氣、舊風(fēng)排出；采用新的烘干工藝后，烘干時(shí)間由以前的48-72小時(shí)，縮短到現(xiàn)在的24-36小時(shí)，在提高了烘干效率的同時(shí)，也保證了產(chǎn)品質(zhì)量，成品水分由以前的10％-12％降為6％-8％，同時(shí)也避免了出現(xiàn)陰雨天氣久烘不干的壞曲現(xiàn)象；(8)采用本專利技術(shù)所述的規(guī)模化制備方法生產(chǎn)綠色木霉菌，產(chǎn)孢量高達(dá)7.7×1011個(gè)/g(干重)，且制備的產(chǎn)品活性高、保存周期長(zhǎng)，室溫貯藏11個(gè)月后孢子萌發(fā)率仍能達(dá)到90％左右。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步的說明，但并不限制本專利技術(shù)的實(shí)施。實(shí)施例1綠色木霉菌株的分離與篩選：1.培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)培養(yǎng)基、纖維素剛果紅鑒別培養(yǎng)基和土豆葡萄糖(PDB)培養(yǎng)基。2.土壤采樣：采集被落葉覆蓋的枯樹根部土壤樣品。3.分離：將1g土壤樣品加入裝有100mL無菌生理鹽水和玻璃珠的三角瓶中充分搖振，靜置后取本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種綠色木霉菌，其特征在于：該菌株為木霉(Trichoderma)屬中的綠色木霉菌株HS?F9，該菌株的保藏編號(hào)為CGMCC?No.12079。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種綠色木霉菌，其特征在于：該菌株為木霉(Trichoderma)屬中的綠色木霉菌株HS-F9，該菌株的保藏編號(hào)為CGMCCNo.12079。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠色木霉菌，其特征在于：用所述的綠色木霉菌制得生物防治品，生物防治品用于防治番茄根結(jié)線蟲病或溫室黃瓜及番茄灰霉病。3.一種權(quán)利要求1所述的綠色木霉菌的規(guī)模化制備方法，其特征在于：采用液固雙相發(fā)酵工藝，經(jīng)液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵及固體培養(yǎng)基分盤發(fā)酵，固態(tài)發(fā)酵過程采用中央空調(diào)、溫控系統(tǒng)和高壓微霧加濕器進(jìn)行控溫控濕，發(fā)酵產(chǎn)物采用低溫烘干后磨料制粉。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的綠色木霉菌的規(guī)模化制備方法，其特征在于：液體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的原料制成：葡萄糖0.01％-3％，酵母粉0.01％-3％，蛋白胨0.01％-2％，磷酸氫二鉀0.01％-2％，硫酸鎂0.01％-2％，硫酸亞鐵0.01％-2％，氯化鋅0.01％-1％。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的綠色木霉菌的規(guī)模化制備方法，其特征在于：固體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的原料制成：主料50％-90％，輔料10％-45％，無機(jī)鹽0.05％-5％；固體培養(yǎng)基的含水量為30％-70％；主料中，面粉與麩皮的質(zhì)量...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周長(zhǎng)春，許正宏，陸震鳴，史勁松，房華，周鳳云，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：沂源康源生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：山東,37