本發明專利技術涉及一種針對ＣＤ２０抗原的單克隆抗體，其中該抗體的每條輕鏈的可變區由與鼠核酸序列ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５具有至少７０％同一性的序列編碼，該抗體的每條重鏈的可變區由與鼠核酸序列ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７具有至少７０％同一性的序列編碼，而且該抗體的輕鏈和重鏈的恒定區是來自于非鼠種類的恒定區。本發明專利技術還涉及該抗體用于激活免疫效應細胞的Ｆｃγ ＲⅢＡ受體的用途，和用于制備藥物尤其是治療白血病或淋巴瘤的藥物的用途。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】針對B型淋巴造血增殖的細胞毒性抗體本專利技術涉及一種針對CD20抗原的單克隆抗體，其中每條輕鏈的 可變區由與鼠核酸序列SEQ ID No.5具有至少70X序列同一性的序列 編碼，每條重鏈的可變區由與鼠核酸序列SEQ ID No.7具有至少70% 同一性的序列編碼，而且輕鏈和重鏈的恒定區是來自非鼠種類的恒定 區，本專利技術同時涉及這種抗體的用途，用于激活免疫效應細胞中的 Fc7RIII受體，和用于制備藥物，尤其是用于治療白血病或淋巴瘤。介紹和現有技術CD20抗原是一種疏水性跨膜蛋白，分子量為35-37kDa，其存在 于成熟的B淋巴細胞的表面(Valentine " a/. (1987) Prac. Wa".爿cad. Sc〖. C/SJ 84(22): 8085-8089; Valentine W a/. (1989)丄S/o/. CAew.， 264(19): 11282-11287)。它在B淋巴細胞(B細胞)，從早期前B階段起的發育 期間表達直到分化成漿細胞時為止，在漿細胞階段這種表達消失。CD20 抗原存在于正常的B淋巴細胞與惡性B細胞上。更具體地，CD20抗原 在大多數B表型淋巴瘤中(80%淋巴瘤)中表達:例如，它在超過90% 的非何杰金氏B細胞淋巴瘤(NHL)，以及超過95X的B型慢性淋巴 細胞白血病(B-CLL)中表達。CD抗原不在造血干細胞與漿細胞上表達。CD20的功能還沒有完全清楚，但是它可以用作鈣通道，并參與B 淋巴細胞分化的第一階段的調控(Golay "a/. (1985) /mm""o/. 135(6): 3795-3801)和增殖的調控(Tedder "a/. (Aug 1986)五w. , /mm腸/. 16(8): 881-887)。因此，盡管它在B細胞激活和增殖中的作用還有一些不確定，但 是由于它的定位，CD20抗原是使用特異性識別CD20的抗體用于治療 包括腫瘤B細胞，如NHL或B — CLL等疾病的重要靶。而且，該抗原是理想的靶，因為它是膜蛋白，其表達調節和多態性還是未知的。僅僅一個非放射性標記的抗-CD20單克隆抗體，Rituxan (Genentech)，目前是商業可獲得用于治療B細胞淋巴瘤。當聯合化療 時，它在患有NHL的患者中顯示鼓舞人心的臨床效果。然而，當單獨 使用時，它的效力是可變的而且經常是不大的(Teeling W a/. (2004) 脅od 104(6): 1793-1800)。此外，Rituxan 在B-CLL中對B細胞只有較小的作用。這種低程度的效力與各種現象相關:一方面，B-CLL B細胞只以相對低的量表達CD20,另一方面，在體外對這些細胞，Rituxan⑧只誘導很低的ADCC(抗體依賴的細胞毒性)活性水平。這兩種觀察結果可以解釋在腫瘤 中CD20表達水平(定量流式細胞儀)與治療應答之間觀察到的相關性。因為B-CLL是西方國家最普遍的白血病形式，而且高劑量化療治 療有時候證實是不夠的，并包括導致造血發育不全和免疫缺乏的副作 用，單克隆抗體仿佛是一種新的方法。因此，開發能特異性靶向CD20 抗原，并允許腫瘤細胞如B-CLL被破壞的抗體是首要的，B-CLL只有 限程度地表達這種抗原。Genmab (Teeling & a/. (2004) 104(6): 1793-1800)建議把抗體2F2和7D8用于治療B-CLL，這兩個抗體能激活補體，其高于Rituxan 誘導的補體。然而，這些抗體，與Rituxan⑧類似，具有低的ADCC活 性。但是， 一些臨床醫生表示，補體活性是有害副作用的起因，因為 抗體觸發了激活系統，其導致廣譜非特異性活性(炎性，過敏性或血 管反應等等)的分子(特別是，過敏毒素)的產生。此外，這些抗體 仍然處于研究階段，而且它們的臨床效力還有待評估。在申請FR03/02713 (WO 2004/029092)中，本申請人描述了一種抗 《020抗體，其可以在YB2/0系中產生，并與Rituxan⑧相比，由于其 誘導高ADCC活性和通過Jurkat-CD16細胞的高IL-2生產水平的能力 而選擇它。顯著需要新的抗-CD20抗體，其將擴展使用目前可用的免 疫療法治療的B細胞疾病的范圍；特別是對于其中在涉及的B細胞群 體中較小程度地表達CD20抗原而且不存在令人滿意的免疫療法的B 細胞疾病的情況。為了該目的，本申請人已經開發了新的CD20抗體，與Rituxan⑧ 相比，其顯示特別高的ADCC活性。
技術實現思路
本專利技術的第一個目的因此涉及一種針對CD20抗原的單克隆抗體， 其中每條輕鏈的可變區由與鼠核酸序列SEQ ID No.5具有至少70%同 一性的序列編碼，每條重鏈的可變區由與鼠核酸序列SEQ ID No.7具有 至少70%同一性的序列編碼，而且輕鏈和重鏈的恒定區是來自非鼠種 類的恒定區。抗體由通過二硫鍵連接到一起的重鏈和輕鏈組成。每條鏈由位于 N-末端的可變區(或結構域)(由重排的輕鏈V-J基因和重鏈V-D-J基 因編碼)，其對抗體針對的抗原是特異性的，與位于C-末端的恒定區 組成，該恒定區由來自輕鏈的單個CL結構域，或重鏈的幾個結構域組 成。為了本專利技術的目的，"單克隆抗體"或"單克隆抗體組合物"的 表達指具有相同和獨特的特異性的抗體分子制劑。根據本專利技術的抗體，其中輕鏈和重鏈中的可變區來自與輕鏈和重 鏈的恒定區不同的種類，則被稱為"嵌合"抗體。鼠核酸序列SEQ ID No.5與SEQ ID No.7，分別編碼由鼠雜交瘤 CAT-13.6E12產生的抗體的每條輕鏈的可變區與每條重鏈的可變區，可 獲自德國微生物保藏中心(DSMZ)，保藏號為ACC 474。該雜交瘤產 生針對CD20的鼠IgG2a， /c-型單克隆抗體。這些鼠序列被選擇以衍生出本專利技術抗體的可變區序列，由于 CAT-13.6E12鼠抗體對于CD20抗原的特異性，該抗原也被Rituxan 識別。本專利技術抗體的可變區與序列SEQIDNo. 5和SEQIDNo. 7具有 至少70%的同一性，這種序列同一性為本專利技術的抗體提供了與 CAT-13.6E2鼠抗體相同的特異性。優選地，這種序列同一性還為本發 明的抗體提供了與CAT-13.6E2鼠抗體相同的靶親和力。而且，本申請人還令人驚訝地表明，在存在表達F(yyRIIIA受體的 胞外結構域(如附圖說明圖11所示)的Jurkat-CD16細胞時，CAT-13.6E12鼠 抗體能誘導IL-2的分泌，這指示了鼠抗體與人CD16 (Fc7RIIIA)之間強 的結合，其再次促發了本申請人的選擇。此外，在本專利技術的抗體中，輕鏈和重鏈的恒定區來自于非鼠的種 類。在這點上，所有的非鼠哺乳動物種和屬都可以使用，尤其是人， 猴，鼠(除小鼠以外)，豬，牛，馬，貓，犬，以及鳥。本專利技術的抗體可以使用本領域技術人員熟知的標準重組DNA技 術構建，更特別地使用，例如，Morrison W a/. (1984) /Voc， 7VW/.爿cad. 6W.81: 6851-6855描述的"嵌合"抗體構建技術，其中重組DNA技術 用于把非人哺乳動物抗體中的重鏈的恒定區和/或輕鏈的恒定區，置換 為人免疫球蛋白的相應區域。下面將舉例說明一個特定的實施方案。有利地，本發本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種針對ＣＤ２０抗原的單克隆抗體，其中該抗體的每條輕鏈的可變區由與鼠核酸序列ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５具有至少７０％同一性的序列編碼，該抗體每條重鏈的可變區由與鼠核酸序列ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７具有至少７０％同一性的序列編碼，而且該抗體重鏈和輕鏈的恒定區是來自于非鼠物種的恒定區。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：克里斯托夫德羅默夫，克里斯蒂娜戈謝，讓呂克泰約，讓弗朗索瓦普羅斯特，
申請(專利權)人：分餾及生物技術法國實驗室，
類型：發明
國別省市：FR[法國]
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