一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價(jià)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價(jià)方法，所述巖生忍冬成分鑒定方法采用理化反應(yīng)和薄層層析法鑒定巖生忍冬的化學(xué)成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法檢測巖生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的體外抑菌活性。本發(fā)明專利技術(shù)采用理化反應(yīng)法和薄層層析法粗略鑒定該植物進(jìn)行主要化學(xué)成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法測定該植物體外抑菌活性，用多種細(xì)菌株進(jìn)行抗菌作用的對比，分析不同溶劑提取物的活性成分對細(xì)菌的抑制效果。

A kind of Caprifoliaceae component identification and antimicrobial activity evaluation method

The invention discloses a Caprifoliaceae component identification and antimicrobial activity evaluation method, component identification method of the Caprifoliaceae by chemical physical and chemical reaction and TLC identification of Caprifoliaceae, antibacterial activity in vitro by K-B method and broth dilution method was used to detect the Caprifoliaceae petroleum ether, ethyl acetate, methanol and water extracts. The invention adopts the chemical reaction method and TLC identification of the rough plant main chemical composition, in vitro antibacterial activity of the plant was determined by K-B method and broth dilution method, antibacterial effect compared with a variety of bacterial strains, analysis of different solvent extracts of the active ingredients of the antibacterial effect.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價(jià)方法
本專利技術(shù)屬于巖生忍冬成分鑒定
，尤其涉及一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價(jià)方法。
技術(shù)介紹
巖生忍冬(LonicerarupicolaHook.f.etThomson)，又名西藏忍冬，為忍冬科忍冬屬植物，產(chǎn)于寧夏南部、甘肅臨潭、青海東南部、四川西部、云南西北部及西藏東部至西南部，長于海拔3.6km以上的高山或山坡灌木叢中。在中國，忍冬屬資源也較為豐富，尤以西南部種類最多。忍冬屬內(nèi)有不少藥用植物和具有觀賞價(jià)值的綠化植物，據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，屬內(nèi)可藥用植物有49種，對許多致病菌有較強(qiáng)的抗菌作用。據(jù)現(xiàn)有資料表明，忍冬屬植物中的化學(xué)成分主要有四類：黃酮類、揮發(fā)油類、綠原酸類、苷類，此外還有甾醇類、糖類、無機(jī)元素類等。近年來，隨著合成及半合成抗菌素的增多和廣泛使用，臨床上細(xì)菌耐藥性問題日趨嚴(yán)重，面對這一嚴(yán)峻現(xiàn)狀，發(fā)揮中藥的治療優(yōu)勢將成為重要課題。隨著抗菌素種類增多和廣泛使用，細(xì)菌耐藥性問題日趨嚴(yán)重，藥物的不良反應(yīng)也不斷增加。由于化學(xué)合成藥物開發(fā)難度大，毒副作用明顯。學(xué)者們都在各種中草藥成分的抗菌活性方面展開了研究工作，期望從中草藥中得到更加理想的抗菌藥物。目前為止，忍冬屬植物中除金銀花、山銀花等在醫(yī)藥、食品等方面廣為應(yīng)用而其藥理毒理作用得到深入研究外，其他忍冬屬的藥理毒理作用很少有研究報(bào)道。相關(guān)報(bào)道金銀花醇浸液對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎桿菌、腦膜炎雙球菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌、百日咳桿菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌、霍亂桿菌等多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有一定的抑制作用。山銀花對白喉?xiàng)U菌也有很強(qiáng)的抗菌作用，高劑量的山銀花能明顯減少金黃色葡萄球菌感染小鼠所致死亡率。目前，由于巖生忍冬生長條件的特殊性及其資源分布等因素，對巖生忍冬作為藥用植物研究尤其是對其活性成分和抗菌活性無明確報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價(jià)方法，旨在解決目前由于巖生忍冬生長條件的特殊性及其資源分布等因素，對巖生忍冬作為藥用植物研究尤其是對其活性成分和抗菌活性無明確報(bào)道的問題。本專利技術(shù)是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種巖生忍冬成分鑒定方法，所述巖生忍冬成分鑒定方法采用理化反應(yīng)和薄層層析法鑒定巖生忍冬的化學(xué)成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法檢測巖生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的體外抑菌活性；所述理化反應(yīng)具體包括：稱取10g巖生忍冬粉末，浸泡于100mL蒸餾水中，密封浸泡24h，過濾，取其濾液；取若干滅菌試管，在試管中加入一定量巖生忍冬濾液，再分別加入各類一定量檢測試劑，觀察并記錄結(jié)果；所述薄層層析法具體包括：取層析缸，以石油醚：乙酸乙酯＝1:10，v/v，為展開劑，在硅膠板上點(diǎn)樣后放入層析缸中，展開后在紫外燈365nm下觀察記錄有無熒光及熒光顏色，噴上顯色劑后再在紫外燈365nm下觀察熒光情況并記錄。進(jìn)一步，所述理化反應(yīng)中試劑配制包括：有機(jī)酸類顯色劑：甲基紅試劑：稱取甲基紅100mg溶于100mL乙醇中即可；溴甲酚綠指示劑：稱取溴甲酚綠0.04g溶于100mL乙醇中，用0.1mol/mL氫氧化鈉溶液調(diào)至藍(lán)色剛剛出現(xiàn)，移入棕色瓶中保存；吖啶試劑：稱取吖啶5mg溶于100mL乙醇中即可；酚和鞣質(zhì)類顯色劑：氯化鈉明膠試劑：稱取明膠1g溶于50mL水中，然后加10g氯化鈉使溶解，加水稀釋到100mL；三氯化鐵試劑：5％三氯化鐵乙醇溶液加入少許鹽酸；三萜、甾體類顯色劑：20％磷鉬酸乙醇試劑；黃酮類顯色劑：2％醋酸鎂甲醇試劑；苯丙素類顯色劑：5％氫氧化鈉甲醇溶液試劑；醌類顯色劑：無色亞甲基藍(lán)試劑：準(zhǔn)確稱取100mg亞甲基藍(lán)溶于100mL乙醇中，加入1mL冰醋酸、1g鋅粉，攪拌至藍(lán)色消失，移入棕色瓶中，避光保存；強(qiáng)心苷類顯色劑：3，5-二硝基苯甲酸試劑：稱取3，5-二硝基苯甲酸1g，用50mL甲醇溶解，加入1mol/L氫氧化鈉溶液50mL，混合即可；三氯乙酸試劑：稱取25g三氯乙酸溶于100mL乙醇中即可；生物堿類顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑：稱取次硝酸鉍0.85g加入10mL冰醋酸和40mL水混合得溶液1；稱取碘化鉀8g加入20mL水溶液得溶液2；取溶液1和溶液2混合，取混合液1mL，加入2mL冰醋酸和10mL水混合即得試劑，移入棕色瓶中保存；碘-碘化鉀試劑：稱取碘1g和碘化鉀10g溶于50mL水中加熱溶解，加入2mL冰醋酸用水稀釋到100mL，移入棕色瓶中保存。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬石油醚提取物制備方法，所述巖生忍冬石油醚提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L石油醚中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL石油醚提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了4mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm微孔濾膜過濾。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬乙酸乙酯提取物制備方法，所述巖生忍冬乙酸乙酯提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L甲醇溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL乙酸乙酯提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了6mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬醇提取物制備方法，所述巖生忍冬醇提取物制備方法包括：稱取100g粉碎后的巖生忍冬浸泡于1L甲醇溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL甲醇提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了3mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬水提取物制備方法，所述巖生忍冬水提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L蒸餾水中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL蒸餾水提取物用二甲基亞砜溶解至溶液，共加入了5mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬成分抗菌活性評價(jià)方法，所述巖生忍冬成分抗菌活性評價(jià)方法包括：(1)石油醚提取物制備：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L石油醚中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL石油醚提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了4mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm微孔濾膜過濾；乙酸乙酯提取物制備：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L乙酸乙酯溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL乙酸乙酯提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了6mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾；醇提取物制備：稱取100g粉碎后的巖生忍冬浸泡于1L甲醇溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種巖生忍冬成分鑒定方法，其特征在于，所述巖生忍冬成分鑒定方法采用理化反應(yīng)和薄層層析法鑒定巖生忍冬的化學(xué)成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法檢測巖生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的體外抑菌活性；所述理化反應(yīng)具體包括：稱取10g巖生忍冬粉末，浸泡于100mL蒸餾水中，密封浸泡24h，過濾，取其濾液；取若干滅菌試管，在試管中加入巖生忍冬濾液，再分別加入各類一定量檢測試劑，觀察并記錄結(jié)果；所述薄層層析法具體包括：取層析缸，以石油醚：乙酸乙酯＝1:10，v/v，為展開劑，在硅膠板上點(diǎn)樣后放入層析缸中，展開后在紫外燈365nm下觀察記錄有無熒光及熒光顏色，噴上顯色劑后再在紫外燈365nm下觀察熒光情況并記錄。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種巖生忍冬成分鑒定方法，其特征在于，所述巖生忍冬成分鑒定方法采用理化反應(yīng)和薄層層析法鑒定巖生忍冬的化學(xué)成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法檢測巖生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的體外抑菌活性；所述理化反應(yīng)具體包括：稱取10g巖生忍冬粉末，浸泡于100mL蒸餾水中，密封浸泡24h，過濾，取其濾液；取若干滅菌試管，在試管中加入巖生忍冬濾液，再分別加入各類一定量檢測試劑，觀察并記錄結(jié)果；所述薄層層析法具體包括：取層析缸，以石油醚：乙酸乙酯＝1:10，v/v，為展開劑，在硅膠板上點(diǎn)樣后放入層析缸中，展開后在紫外燈365nm下觀察記錄有無熒光及熒光顏色，噴上顯色劑后再在紫外燈365nm下觀察熒光情況并記錄。2.如權(quán)利要求1所述的巖生忍冬成分鑒定方法，其特征在于，所述理化反應(yīng)中試劑配制包括：有機(jī)酸類顯色劑：甲基紅試劑：稱取甲基紅100mg溶于100mL乙醇中即可；溴甲酚綠指示劑：稱取溴甲酚綠0.04g溶于100mL乙醇中，用0.1mol/mL氫氧化鈉溶液調(diào)至藍(lán)色剛剛出現(xiàn)，移入棕色瓶中保存；吖啶試劑：稱取吖啶5mg溶于100mL乙醇中即可；酚和鞣質(zhì)類顯色劑：氯化鈉明膠試劑：稱取明膠1g溶于50mL水中，然后加10g氯化鈉使溶解，加水稀釋到100mL；三氯化鐵試劑：5％三氯化鐵乙醇溶液加入少許鹽酸；三萜、甾體類顯色劑：20％磷鉬酸乙醇試劑；黃酮類顯色劑：2％醋酸鎂甲醇試劑；苯丙素類顯色劑：5％氫氧化鈉甲醇溶液試劑；醌類顯色劑：無色亞甲基藍(lán)試劑：準(zhǔn)確稱取100mg亞甲基藍(lán)溶于100mL乙醇中，加入1mL冰醋酸、1g鋅粉，攪拌至藍(lán)色消失，移入棕色瓶中，避光保存；強(qiáng)心苷類顯色劑：3，5-二硝基苯甲酸試劑：稱取3，5-二硝基苯甲酸1g，用50mL甲醇溶解，加入1mol/L氫氧化鈉溶液50mL，混合即可；三氯乙酸試劑：稱取25g三氯乙酸溶于100mL乙醇中即可；生物堿類顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑：稱取次硝酸鉍0.85g加入10mL冰醋酸和40mL水混合得溶液1；稱取碘化鉀8g加入20mL水溶液得溶液2；取溶液1和溶液2混合，取混合液1mL，加入2mL冰醋酸和10mL水混合即得試劑，移入棕色瓶中保存；碘-碘化鉀試劑：稱取碘1g和碘化鉀10g溶于50mL水中加熱溶解，加入2mL冰醋酸用水稀釋到100mL，移入棕色瓶中保存。3.一種如權(quán)利要求1所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬石油醚提取物制備方法，其特征在于，所述巖生忍冬石油醚提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L石油醚中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL石油醚提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了4mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm微孔濾膜過濾。4.一種如權(quán)利要求1所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬乙酸乙酯提取物制備方法，其特征在于，所述巖生忍冬乙酸乙酯提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L乙酸乙酯溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL乙酸乙酯提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了6mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。5.一種如權(quán)利要求1所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬醇提取物制備方法，其特征在于，所述巖生忍冬醇提取物制備方法包括：稱取100g粉碎后的巖生忍冬浸泡于1L甲醇溶液中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL甲醇提取物用二甲基亞砜溶解至溶液透亮，共加入了3mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。6.一種如權(quán)利要求1所述巖生忍冬成分鑒定方法中巖生忍冬水提取物制備方法，其特征在于，所述巖生忍冬水提取物制備方法包括：稱取100g巖生忍冬浸泡于1L蒸餾水中，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回流提取3次濾液，每次浸泡48h，濃縮至浸膏狀，轉(zhuǎn)數(shù)控制在90rpm，溫度控制在50℃；取1mL蒸餾水提取物用二甲基亞砜溶解至溶液，共加入了5mL二甲基亞砜，在無菌工作臺(tái)中用0.22μm的微孔濾膜過濾。7.一種如權(quán)利要...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳朝喜，
申請(專利權(quán))人：西南民族大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：四川,51