本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種果蔬高效防拮抗菌素防霉保鮮劑及其制備方法，步驟如下：⑴由蘇云金芽孢桿菌CICC?23702產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶：⑵角質(zhì)酶、纖維素酶由從葡萄中分離的灰霉誘導(dǎo)產(chǎn)生；⑵由從葡萄中分離的灰霉誘導(dǎo)產(chǎn)生角質(zhì)酶、纖維素酶；⑶防霉保鮮劑配方：100份無菌水中加入海藻糖1?3份、甘油4?5份、環(huán)氧大豆油3?4份和殼聚糖0.2?0.4份，5?10份的幾丁質(zhì)酶、5?8份的角質(zhì)酶、8?10份的纖維素酶；⑷使用前抗菌酶復(fù)性。本發(fā)明專利技術(shù)的保鮮劑生產(chǎn)后形成干燥的粉末，非常容易保藏，常溫保存即可，不需要特殊條件，使用時(shí)直接噴灑至葡萄表面，延長(zhǎng)果蔬尤其是葡萄的保存期限。
Fruits and vegetables high Xiaojie antibiotic preservative and preparation method thereof
The invention relates to a high-efficiency anti mildew preservation of fruits and vegetables antagonistic antibiotic agent and a preparation method thereof, the steps are as follows: 1 the chitinase from Bacillus thuringiensis CICC Su Yun 23702: the cutinase, cellulase produced by separation from the grape gray mold of the induction; induced by isolated from grape gray mold to produce cutinase, the formula of cellulase; mildew preservation agent: 100 sterile water by adding trehalose 1 3, glycerol 4 5 copies, 4 copies of the 3 epoxy soybean oil and chitosan 0.2 0.4 copies, 10 copies of the 5 fiber chitinase, 5 cutinase, 8 copies of 10 copies of the 8 cellulase; the use of antibacterial enzyme renaturation. The invention of the preservative production after the formation of dry powder, very easy to collect, store at room temperature, without the need for special conditions, the use of direct spray to the surface of grape, prolong the retention period of grape fruits and vegetables especially.
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
果蔬高效拮抗菌素保鮮劑及制備方法
本專利技術(shù)屬于果蔬采后保鮮生物防治
，尤其是一種果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑及其制備方法。
技術(shù)介紹
現(xiàn)有技術(shù)中有諸多的灰霉菌(Botrytiscinerea)染病實(shí)例，而且灰霉菌在諸多水果中都能繁殖和生長(zhǎng)，產(chǎn)生病害。現(xiàn)有技術(shù)中通常是用化學(xué)藥劑來抑制灰霉菌的生長(zhǎng)，起主要確定體系在一下幾個(gè)方面：1、抗藥性危害：長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致病菌產(chǎn)生的抗藥性，降低了其防病效果，同時(shí)殘毒量增加而威脅著人類的健康。2、殘留性危害：隨著人們食品安全意識(shí)的加強(qiáng)，國(guó)內(nèi)外對(duì)水果的農(nóng)藥殘留要求也越來越嚴(yán)格，不使用化肥農(nóng)藥的綠色水果成為市場(chǎng)熱門。3、環(huán)境危害：頻繁反復(fù)的是用化學(xué)防霉劑對(duì)環(huán)境造成不可逆的傷害，容易造成環(huán)境中的灰霉菌變異等生物災(zāi)害，同時(shí)也會(huì)競(jìng)爭(zhēng)抑制環(huán)境中的其他有益菌的生長(zhǎng)。我國(guó)鮮食葡萄保鮮防腐技術(shù)越來越需要更加安全、環(huán)保的新技術(shù)，熏硫等化學(xué)劑防腐技術(shù)的被淘汰成為大勢(shì)所趨，及時(shí)開展新型綠色防腐保鮮劑的研究具有十分重大的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種防霉效果好，復(fù)性效率高的果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑及其制備方法。本專利技術(shù)實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：一種果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑的制備方法，具體成分如下：(1)由蘇云金芽孢桿菌CICC23702產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶：采用磁化水代替蒸餾水制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2～0.3wt％的幾丁質(zhì)配成高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的誘導(dǎo)培養(yǎng)液；在紅光條件下，加入30～40mL的增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)4d，復(fù)合誘導(dǎo)蘇云金芽孢桿菌高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，培養(yǎng)液采用超聲頻率為15KHz-20KHz的超聲波進(jìn)行細(xì)胞破碎并純化以敲除幾丁質(zhì)酶雜基，然后5000r/min低溫離心20min后收集上清液，調(diào)節(jié)pH5.5～5.8至該幾丁質(zhì)酶等電點(diǎn)，沉淀提取分離；(2)由從葡萄中分離的灰霉誘導(dǎo)產(chǎn)生角質(zhì)酶、纖維素酶誘導(dǎo)條件：將108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培養(yǎng)基中，其中培養(yǎng)基中加入0.8％～1.2％的角質(zhì)酶和2.0％～2.5％的纖維素酶以誘導(dǎo)霉菌高產(chǎn)角質(zhì)酶和纖維素酶，28℃培養(yǎng)4d后，5000r/min冷凍低溫離心10min～20min，以除去菌體和培養(yǎng)基殘?jiān)?，取上清液調(diào)節(jié)上清液pH6.2-6.9至兩酶等電點(diǎn)，沉淀提取生物活性物質(zhì)角質(zhì)酶和纖維素酶；(3)防霉保鮮劑配方：重量份數(shù)100份無菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、環(huán)氧大豆油3～4份和殼聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min攪拌1-1.5小時(shí)，使其完全溶解，5～10份的幾丁質(zhì)酶、5～8份的角質(zhì)酶、8～10份的纖維素酶，500～600r/min攪拌20～30分鐘混勻，所制備拮抗菌素防霉劑置于0℃～4℃條件下保存；(4)保鮮劑使用前首先進(jìn)行抗菌酶復(fù)性復(fù)性加入復(fù)性劑，復(fù)性劑為：將0.5～0.6份Mg2+、0.3～0.5份的Mn2+，并用10份的0.1mol/L磷酸緩沖液，混勻，調(diào)節(jié)pH7.2～7.9。而且，所述步驟⑴的誘導(dǎo)培養(yǎng)液成分為：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸餾水1L，pH7.0，121℃滅菌20min備用；而且，所述霉菌增殖培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，121℃滅菌20min。而且，100重量份數(shù)復(fù)性劑可以復(fù)性1-10重量份保鮮劑。本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下：本專利技術(shù)采用高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的菌種以及高效生產(chǎn)培養(yǎng)基來生產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，能夠大幅提高產(chǎn)率。本專利技術(shù)的保鮮劑生產(chǎn)后形成干燥的粉末，非常容易保藏，常溫保存即可，不需要特殊條件，使用時(shí)直接噴灑至葡萄表面，延長(zhǎng)果蔬尤其是葡萄的保存期限。本專利技術(shù)通過在培養(yǎng)基中增加誘導(dǎo)離子，同時(shí)輔以紅光誘導(dǎo)，能夠使幾丁質(zhì)的產(chǎn)量增加20％左右。經(jīng)過高頻超聲的震蕩，不僅能劈碎細(xì)胞，還能將幾丁質(zhì)上的雜基團(tuán)震蕩下去，提高幾丁質(zhì)酶的活性，保證生物保鮮劑的有效性。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。本專利技術(shù)以下沒有提及的均為重量百分比，如果涉及液體為體積百分比。一種果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑及其制備方法，具體成分如下：本保鮮劑主要作用成分為幾丁質(zhì)酶、角質(zhì)酶、細(xì)胞壁降解酶，具體制備過程如下⑴幾丁質(zhì)酶由產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的蘇云金芽孢桿菌(CICC23702)產(chǎn)生的，其為高生防拮抗菌素的主要成分。該菌株采用磁化水代替蒸餾水制備培養(yǎng)基(培養(yǎng)基成分：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，蒸餾水1000mL，pH7.0)，培養(yǎng)基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2％～0.3％的幾丁質(zhì)配成高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的誘導(dǎo)培養(yǎng)液；紅光條件下加入30～40mL的增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)4d，復(fù)合誘導(dǎo)蘇云金芽孢桿菌高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，培養(yǎng)液采用超聲頻率為15KHz-20KHz的超聲波細(xì)胞破碎后5000r/min低溫離心20min后收集上清液，調(diào)節(jié)pH5.5～5.8至該幾丁質(zhì)酶等電點(diǎn)，沉淀提取分離。其中，菌種蘇云金芽孢桿菌(CICC23702)于2016年5月30日購買于中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院，發(fā)票號(hào)：17576933。誘導(dǎo)培養(yǎng)液：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，蒸餾水1L，pH7.0，121℃滅菌20min備用。⑵角質(zhì)酶、纖維素酶由從葡萄中分離的灰霉誘導(dǎo)產(chǎn)生誘導(dǎo)條件：將108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培養(yǎng)基中，其中培養(yǎng)基中加入0.8％～1.2％的角質(zhì)酶和2.0％～2.5％的纖維素酶以誘導(dǎo)灰霉菌高產(chǎn)角質(zhì)酶和纖維素酶，28℃培養(yǎng)4d后，5000r/min冷凍低溫離心10min～20min，以除去菌體和培養(yǎng)基殘?jiān)?，取上清液調(diào)節(jié)上清液pH6.2-6.9至兩酶等電點(diǎn)，沉淀提取生物活性物質(zhì)角質(zhì)酶和纖維素酶。本步驟中使用的灰霉菌(孢子)又叫做灰葡萄孢霉，分離于葡萄。英文：Botrytiscinerea公開文獻(xiàn)：Botrytis：BiologyPathologyandControl,EditedbyY.Elad,B.Williamson,P.TudzynskiandN.Delen。霉菌增殖培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，121℃滅菌20min。⑶防霉保鮮劑配方：重量份數(shù)100份無菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、環(huán)氧大豆油3～4份和殼聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min攪拌1-1.5小時(shí)，使其完全溶解，5～10份的幾丁質(zhì)酶、5～8份的角質(zhì)酶、8～10份的纖維素酶，500～600r/min攪拌20～30分鐘混勻，所制備拮抗菌素防霉劑置于0℃～4℃條件下保存；⑷保鮮劑使用前首先進(jìn)行抗菌酶復(fù)性復(fù)性劑為：將0.5～0.6份Mg2+、0.3～0.5份的Mn2+，并用10份的0.1mol/L磷酸緩沖液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH7.2～7.9，以提升酶活性；使用時(shí)活化保鮮劑后噴施于果蔬表面，自然晾干后于適宜溫度、濕度和氣體條件下貯藏。100重量份數(shù)復(fù)性劑可以復(fù)性1-10重量份保鮮劑，可以根據(jù)需要自己選擇。相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明：本申請(qǐng)防霉保鮮劑噴灑于葡萄表面，能夠有效防止葡萄表面霉菌的生長(zhǎng)。復(fù)性后100份水中加入5份保鮮劑重量份，噴灑與葡萄表面本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑的制備方法，其特征在于：具體成分如下：⑴由蘇云金芽孢桿菌CICC?23702產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶：采用磁化水代替蒸餾水制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加0.8～1.0％的Mg
【技術(shù)特征摘要】
1.一種果蔬高生防拮抗菌素防霉保鮮劑的制備方法，其特征在于：具體成分如下：⑴由蘇云金芽孢桿菌CICC23702產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶：采用磁化水代替蒸餾水制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加0.8～1.0％的Mg2+、0.3％～0.5％的Mn2+以及0.2～0.3wt％的幾丁質(zhì)配成高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的誘導(dǎo)培養(yǎng)液；在紅光條件下，加入30～40mL的增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)4d，復(fù)合誘導(dǎo)蘇云金芽孢桿菌高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶，培養(yǎng)液采用超聲頻率為15KHz-20KHz的超聲波進(jìn)行細(xì)胞破碎并純化以敲除幾丁質(zhì)酶雜基，然后5000r/min低溫離心20min后收集上清液，調(diào)節(jié)pH5.5～5.8至該幾丁質(zhì)酶等電點(diǎn)，沉淀提取分離；⑵由從葡萄中分離的灰霉誘導(dǎo)產(chǎn)生角質(zhì)酶、纖維素酶誘導(dǎo)條件：將108spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培養(yǎng)基中，其中培養(yǎng)基中加入0.8％～1.2％的角質(zhì)酶和2.0％～2.5％的纖維素酶以誘導(dǎo)霉菌高產(chǎn)角質(zhì)酶和纖維素酶，28℃培養(yǎng)4d后，5000r/min冷凍低溫離心10min～20min，以除去菌體和培養(yǎng)基殘?jiān)?，取上清液調(diào)節(jié)上清液pH6.2-6.9至兩酶等電點(diǎn)，沉淀提取生物活性物質(zhì)角質(zhì)酶和纖維素酶；⑶防霉保鮮劑配方：重量份數(shù)...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李麗梅，劉霞，喬麗萍，楊維巧，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：天津捷盛東輝保鮮科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：天津,12
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