一種提高作物耐鹽能力促生菌株的篩選方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種提高作物耐鹽能力的促生菌株的篩選方法，屬于微生物分離與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)方法包括篩選優(yōu)勢菌株和組合優(yōu)勢菌株兩部分。篩選優(yōu)勢菌株是通過一系列耐鹽促生功能篩選，最終獲得具有多種功能或優(yōu)勢功能的菌株；組合優(yōu)勢菌株則遵循菌株間即互利共生又功能互補(bǔ)的原則，以提高菌株組合在作物根際的定殖和功能表達(dá)能力，實(shí)現(xiàn)一加一大于二的效果。通過本發(fā)明專利技術(shù)方法篩選獲得的復(fù)合菌系，在田間應(yīng)用效果突出，克服了同類研究因菌株單一或采用簡單組合方法，田間應(yīng)用效果不穩(wěn)定和效果差的問題，極大地促進(jìn)了鹽堿地作物的生產(chǎn)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種提高作物耐鹽能力促生菌株的篩選方法
本專利技術(shù)涉及微生物分離與應(yīng)用
，具體地，涉及一種提高作物耐鹽能力促生菌株的篩選方法。
技術(shù)介紹
目前，隨著社會的發(fā)展和人口的增加，對耕地資源的需求越來越多。我國有鹽堿地9913萬公頃，其中環(huán)渤海70萬公頃，是重要的潛在耕地資源。鹽堿地的改良是國際性難題，世界各國都在努力尋找鹽堿地改良的科學(xué)方法，目前可應(yīng)有的方法有物理的改良技術(shù)，如以水壓鹽法，滲管排鹽以及一些耕作措施；化學(xué)的改良技術(shù)，如使用土壤改良劑；生物改良技術(shù)，利用微生物的促生作用，以提高植物耐鹽性和生物產(chǎn)量。其中物理方法并不適宜淡水資源匱乏的地區(qū)，使用土壤改良劑，材料用量大，受地方資源的限制，微生物由于成本低，繁殖快，可利用它們的促生、防病、抗衰老等作用，大幅度提高作物的耐鹽、抗旱性和生物產(chǎn)量，從而達(dá)到改善鹽堿地的目的。利用根際促生微生物提高鹽堿地作物耐鹽促生的方法具有投資少，見效快，效益高的特點(diǎn)，已經(jīng)成為國際上的研究熱點(diǎn)。但是根據(jù)專利技術(shù)人的經(jīng)驗(yàn)和相關(guān)報(bào)道，大部分菌株功能一般，效果不佳且或效果不穩(wěn)定，優(yōu)良菌株/菌系的高效率選方法顯得十分重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的是提供一種提高作物耐鹽能力促生菌株的篩選方法。為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供了具有提高作物耐鹽能力促生菌株的篩選方法，包括以下步驟:(1)篩選優(yōu)勢菌株；(2)組合優(yōu)勢菌株。步驟(1)是將重度鹽堿地上生長的植物進(jìn)行原位采集后，將其根際土壤、非根際土壤和根系三個(gè)樣品進(jìn)行稀釋，培養(yǎng)基上培養(yǎng)并分離獲得的細(xì)菌菌株。上述方法中，對分離獲得的細(xì)菌進(jìn)行耐鹽度，耐堿度，溶磷，固氮，和產(chǎn)IAA、ACCD、嗜鐵素耐鹽促生功能的檢測，篩選具有上述一個(gè)或多個(gè)優(yōu)勢功能的菌株。上述方法中，功能檢測所使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1/3KMB培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基，所述1/3KMB培養(yǎng)基的配方為胰蛋白胨6g/L，蛋白胨1g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO40.5g/LpH7.0。所述的LB培養(yǎng)基的配方為胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl5g/L，pH7.0。其中，耐鹽度檢測是檢測并獲得在含氯化鈉0.1％-5％的培養(yǎng)基中能生長的菌株。其中，酸堿度檢測是檢測并獲得在pH值為7.0-9.0的培養(yǎng)基中能夠生長的菌株。步驟(2)組合優(yōu)勢菌株是將步驟(1)篩選得到的具有一個(gè)或多個(gè)優(yōu)勢功能的菌株按照功能互補(bǔ)，協(xié)同共生的原則進(jìn)行組合。本專利技術(shù)提供了一種促進(jìn)鹽堿地作物生長的生物肥的制備方法，將上述篩選方法獲得的菌株與腐熟的有機(jī)肥混合，使混合后肥料的活菌數(shù)＞2×107CFU/g。本專利技術(shù)提供了上述篩選方法在鹽堿地作物促生中的應(yīng)用。本專利技術(shù)提供了上述篩選方法在篩選促生菌株或菌系中的應(yīng)用。本專利技術(shù)方法通過一系列耐鹽促生功能篩選，最終獲得具有多種功能或優(yōu)勢功能的菌株，利用互利共生又功能互補(bǔ)的原則將菌株進(jìn)行合理組合，以提高菌株組合在作物根際的定殖和功能表達(dá)能力，實(shí)現(xiàn)一加一大于二的效果。通過該方法篩選獲得的復(fù)合菌系，在田間應(yīng)用效果突出，克服了同類研究因菌株單一或采用簡單組合方法，田間應(yīng)用效果不穩(wěn)定和效果差的問題。具體實(shí)施方式除非另有定義，下文中所使用的所有專業(yè)術(shù)語與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中所使用的專業(yè)術(shù)語只是為了描述具體實(shí)施例的目的，并不是旨在限制本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。除有特別說明，本專利技術(shù)中用到的各種試劑、原料均為可以從市場上購買的商品或者可以通過公知的方法制得的產(chǎn)品。實(shí)施例1重度鹽堿地植物根系細(xì)菌的分離及其促生功能檢測將重度鹽堿地上生長的植物進(jìn)行原位采集，裝入無菌樣品袋中，記錄釆樣的經(jīng)緯度、溫濕度以及采樣生境。輕柔搖蕩植株樣品，去除根上附著的松散土土壤即根圍土壤。稱取根圍土1g，加入5mL生理鹽水，渦旋震蕩器振蕩1min后獲得的土壤懸液，即為根圍土樣1。剪下根系，附帶一點(diǎn)莖干以使根系都在一起。將根系放在PA瓶中，加入5mL生理鹽水，在渦旋儀上最大頻率振蕩1min。該土壤懸液即為根際土樣2。隨后將根系轉(zhuǎn)移到新PA瓶中，進(jìn)行表面滅菌(95％乙醇浸泡5min，5％次氯酸鈉浸泡5min，無菌水洗滌12次)，然后用燒過的無菌鑷子將根轉(zhuǎn)移到研缽中，加入1ml生理鹽水和適量滅菌石英砂進(jìn)行研磨，用研缽碾碎后加入4mL生理鹽水溶解，該懸液即為根系樣3。上述獲得的3中樣品懸液振蕩均勻后，靜置1min后依次制成樣品1：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5梯度的土壤稀釋液。樣品2：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6梯度的土壤稀釋液。樣品3：10-1、10-2、10-3、10-4梯度的土壤稀釋液。將上述樣品1：10-3、10-4、10-5；樣品2：10-4、10-5、10-6；樣品3：10-2、10-3、10-4梯度的土壤稀釋液分別涂布到含氯化鈉濃度為5％以及pH8.0的基礎(chǔ)培養(yǎng)基1/3KMB平板上，每個(gè)平板涂布菌液100μL，重復(fù)2次。30℃倒置培養(yǎng)2d。最終將獲得的單菌落進(jìn)行保存待用。實(shí)施例2提高鹽堿地作物生產(chǎn)性能優(yōu)良菌株/系和菌株組合篩選方法將稀釋分離獲得的細(xì)菌菌株進(jìn)行活化后，離心收集菌體，用生理鹽水洗滌2次后，重懸于1mL生理鹽水中待用。①準(zhǔn)備好含氯化鈉0％，5％，pH＝9.0的1/3KMB平板，CAS，有機(jī)磷，無機(jī)磷，阿須貝，ADF8種平板，依次將每種菌懸液點(diǎn)到8種平板上，30℃倒置培養(yǎng)7d。②將重懸液按百分之一的接種量，接種到含有色氨酸終濃度為100mg/L的1/3KMB液體培養(yǎng)基中，30℃，48-72h培養(yǎng)。然后進(jìn)行IAA檢測(500μg/ml色氨酸)。記錄每株菌的促生結(jié)果，并整理成excel統(tǒng)計(jì)表。依據(jù)生物功能互補(bǔ)，營養(yǎng)吸收互補(bǔ)，協(xié)同共生的原則，將多株功能菌進(jìn)行組配，通過盆栽試驗(yàn)，檢驗(yàn)提高植物耐鹽、促生、防病等應(yīng)用效果，篩選優(yōu)良復(fù)合菌系。實(shí)施例3全功能菌系組合及玉米盆栽篩選試驗(yàn)以功能互補(bǔ)為原則，以盡量多地涵蓋生物功能譜為目標(biāo)，分別挑選具有不同功能的優(yōu)勢菌株，如具有較強(qiáng)產(chǎn)IAA、解磷、固氮功能的解淀粉芽孢桿菌ZCM18【該菌株于2016年9月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為CGMCCNo.12959，分類名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)】，具有較強(qiáng)產(chǎn)嗜鐵素、拮抗病原真菌和產(chǎn)乙烯脫氨酶的優(yōu)勢菌株特基拉芽孢桿菌ZCM5【該菌株于2016年9月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為CGMCCNo.12960，分類名為特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)】功能互補(bǔ)的耐鹽堿菌株，進(jìn)行組合。各菌株單獨(dú)培養(yǎng)，按發(fā)酵液中活菌數(shù)量1：1配成復(fù)合菌液，復(fù)合菌液的活菌數(shù)為1×1010cfu/mL，將菌液接種到含鹽0.3％土壤玉米種子周圍，每顆玉米種子500μL。陽性對照為單一優(yōu)勢菌株處理，空白對照組接種無菌水，每顆玉米種子500μL。重復(fù)10次。光照室培養(yǎng)25d，統(tǒng)計(jì)玉米的株高、地上干重、根干重等生物量指標(biāo)。經(jīng)比較，優(yōu)良菌株組合處理的植株生物量都優(yōu)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種提高作物耐鹽能力的促生菌株的篩選方法，包括以下步驟：(1)篩選優(yōu)勢菌株；(2)組合優(yōu)勢菌株。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種提高作物耐鹽能力的促生菌株的篩選方法，包括以下步驟：(1)篩選優(yōu)勢菌株；(2)組合優(yōu)勢菌株。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(1)是將重度鹽堿地上生長的植物進(jìn)行原位采集后，將其根際土壤、非根際土壤和根系三個(gè)樣品進(jìn)行稀釋，培養(yǎng)基上培養(yǎng)并分離獲得的細(xì)菌菌株。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選方法，其特征在于，對分離獲得的細(xì)菌進(jìn)行耐鹽度，耐堿度，溶磷，固氮，以及產(chǎn)IAA、ACCD和嗜鐵素耐鹽促生功能的檢測，篩選具有上述一個(gè)或多個(gè)優(yōu)勢功能的菌株。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的篩選方法，其特征在于，功能檢測所使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1/3KMB培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基，所述1/3KMB培養(yǎng)基的配方為胰蛋白胨6g/L，蛋白胨1g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO40.5g/LpH7.0。5...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：彭杰麗，王占武，胡棟，張翠綿，賈楠，
申請(專利權(quán))人：河北省農(nóng)林科學(xué)院遺傳生理研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：河北,13