細胞捕獲方法、已捕獲特定細胞的器件的制造方法及含特定細胞溶液的制造方法技術

本發明專利技術為一種細胞捕獲方法，其為使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定的細胞選擇性地捕獲的細胞捕獲方法，其中，所述細胞捕獲器件具有筐體和過濾器，所述筐體含有將液體導入至內部的導入區域和用于將液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在導入區域與排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于液體通過的多個貫通孔，所述細胞捕獲方法具有n次流過液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過液體的工序至第n次的流過液體的工序中，過濾器上的導入區域中的液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過液體的工序結束時，在過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止液體自細胞捕獲器件的排出。

Cell capture method, method of manufacturing a device that captures a particular cell, and method of manufacturing a cell containing solution

The invention relates to a method for cell capture, the specific cells selectively using cell trapping device filter, the liquid contained in the filter on the surface containing cells in solution capture cell capture method, wherein the cell capture device has a body and a filter basket, the basket body will contain a lead-in area to import liquid and liquid discharge flow path for discharged to the outside of the cell containing the liquid from the solution contains more than 2 kinds of cells and the treatment solution for treatment of the cells in the cell containing solution; the filter is arranged between the lead-in area and the discharge flow path and the flow on the road. A plurality of through holes through the liquid for forming in the thickness direction, the cell capture method is n times through the liquid process, where n is a natural number, at first times the liquid flows from The process to N times the flow of fluid in the process of the surface area of import filter liquid in maintaining liquid level regulation, at the end of the N time of the flow of fluid in the process when the filter has a specified height level under the condition of stop discharge of liquid from the cell capture device.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】細胞捕獲方法、已捕獲特定細胞的器件的制造方法及含特定細胞溶液的制造方法
本專利技術涉及通過過濾系統從含有2種以上細胞的含細胞溶液及血液中僅將特定的細胞捕獲并進行檢測時、在不會對選擇性地捕獲的細胞造成傷害的情況下僅將特定的細胞捕獲而富集的特定細胞的捕獲方法、將所捕獲的特定細胞捕獲之后的已捕獲特定細胞的器件的制造方法、含有所捕獲的特定細胞的溶液的制造方法。
技術介紹
近年來，在血液領域中開發了很多從溶液中僅將特定的細胞捕獲并檢測的技術。在進行輸血時僅將白細胞除去的技術或者在免疫療法中將特定的白細胞取出的技術中進行了很多研究。其中備受矚目的是血中循環腫瘤細胞(以下記為CTC)的檢測技術。CTC由于臨床意義很高，因此進行了很多研究，近年來特別期待在抗癌劑的篩選或癌的早期發現的診斷技術中的應用。近年來，提出了通過使用利用了聚對二甲苯的樹脂過濾器而有效地檢測少量的CTC的方法(專利文獻1)。或者，還提出了通過使用代替樹脂而利用了金屬的過濾器使過濾器的強度提高、利用白細胞與癌細胞變形能力的差異進行分離的方法(專利文獻2)。現有技術文獻專利文獻專利文獻1：國際公開第2010/135603號專利文獻2：日本特開2013/42689號
技術實現思路
專利技術要解決的技術問題在使用了過濾技術從含有2種以上細胞的含細胞溶液及血液中將稀少細胞等特定細胞取出的過程中，期待在不對選擇性地捕獲的細胞造成傷害的情況下僅將特定的細胞捕獲而富集。例如，以往已知的過濾法可以高效地將血液中的白細胞或紅細胞、血小板除去，但由于白細胞與癌細胞大小接近，因此無法全部除去。過濾法是利用白細胞的大小與癌細胞的大小差異、變形能力的差異進行分離的方法。此方法中，通過在過濾器的材質、孔形狀、孔徑、開口率、流速上下工夫，可以相當大程度地將白細胞與癌細胞分離。但是，進行過濾將白細胞與癌細胞分離之后，將已捕獲的癌細胞從過濾器上取出并非易事，在取出時有可能對細胞造成傷害。本專利技術的課題在于提供通過過濾將特定的細胞捕獲后、不對已捕獲的細胞造成傷害即可取出的細胞捕獲方法、制造用于取出的已捕獲特定細胞的器件的方法、以及制造含有所捕獲的細胞的含特定細胞的溶液的方法。用于解決技術問題的方法專利技術人們進行反復研究的結果發現，在通過過濾將細胞捕獲之后至對細胞進行解析和檢測的期間，通過一次都不將盒體(細胞捕獲器件)內的液體抽出而連續地進行液體置換的處理，可以在不對細胞造成傷害的情況下進行取出。根據本專利技術的方法，由于可以防止細胞被夾住在孔內和細胞的變形，因此可以期待細胞的高回收效率和傷害更少的細胞的回收。當通過過濾從含細胞溶液中僅將特定的細胞捕獲時，通過在使液面距離過濾器表面殘留至目標捕獲細胞的平均粒徑以上的高度的狀態下進行處理，由于防止細胞被夾住在孔內和細胞變形，可以在不對細胞造成傷害的情況下進行取出。即，本專利技術一個方式的細胞捕獲方法的特征在于，其是使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定細胞選擇性地捕獲的細胞捕獲方法，所述細胞捕獲器件具有筐體和所述過濾器，所述筐體含有具有規定的容積且將所述液體導入至內部的導入區域、和用于將所述液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的所述含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在所述導入區域與所述排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于所述液體通過的多個貫通孔，其中，所述細胞捕獲方法具有n次對所述細胞捕獲器件流過所述液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過所述液體的工序至第n次的流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過所述液體的工序結束時，在所述過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止所述液體自所述細胞捕獲器件的排出。這里，所述筐體可以是含有設置在所述導入區域的上方的上蓋及所述液體的導入流路的方式。可以是在第1次的流過所述液體的工序之前，預先在所述筐體的包含所述導入區域內且比所述過濾器更靠上游側的部位充滿洗滌液的方式。可以是流過所述液體的工序包含：流過固定液的工序；流過透過液的工序、流過染色液的工序及流過洗滌液的工序中的1個以上工序；和流過所述含細胞溶液的工序的方式。可以是所述n為1、流過所述液體的工序是流過所述含細胞溶液的工序的方式。可以是在流過所述液體的工序中，第1次流過的所述液體是含細胞溶液、第2次流過的所述液體是洗滌液的方式。可以是在流過所述液體的工序中，捕獲對象的細胞的至少一部分浸漬于所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體中的方式。可以是在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為捕獲對象的細胞的大小以上的方式。可以是在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為50μm以上的方式。可以是所述含細胞溶液的溶劑由含有哺乳動物的全血、血清、血漿或來自于它們的蛋白質的水溶液構成的方式。可以是所述過濾器使用高分子材料或金屬加工而成的方式。可以是在流過所述液體的工序中，對所述細胞捕獲器件導入所述液體的速度為50～1000μL/min的方式。另外，本專利技術一個方式的已捕獲特定細胞的器件的制造方法的特征在于，其是制造通過使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定細胞選擇性地捕獲了的已捕獲特定細胞的器件的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，所述細胞捕獲器件具有筐體和所述過濾器，所述筐體含有具有規定的容積且將所述液體導入至內部的導入區域、和用于將所述液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的所述含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在所述導入區域與所述排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于所述液體通過的多個貫通孔，其中，所述方法具有n次對所述細胞捕獲器件流過所述液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過所述液體的工序至第n次的流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過所述液體的工序結束時，在所述過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止所述液體自所述細胞捕獲器件的排出。這里，所述筐體可以是含有設置在所述導入區域的上方的上蓋及所述液體的導入流路的方式。可以是在第1次的流過所述液體的工序之前，預先在所述筐體的包含所述導入區域內且比所述過濾器更靠上游側的部位充滿洗滌液的方式。可以是流過所述液體的工序包含：流過固定液的工序；流過透過液的工序、流過染色液的工序及流過洗滌液的工序中的1個以上工序；和流過所述含細胞溶液的工序的方式。可以是所述n為1、流過所述液體的工序是流過所述含細胞溶液的工序的方式。可以是在流過所述液體的工序中，第1次流過的所述液體是含細胞溶液、第2次流過的所述液體是洗滌液的方式。可以是在流過所述液體的工序中，捕獲對象的細胞的至少一部分浸漬于所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體中的方式。可以是在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為捕獲對象的細胞的大小以上的方式。可以是在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為50μm以上的方式。可以是所述含細胞溶液的溶劑由含有哺本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種細胞捕獲方法，其為使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定的細胞選擇性地捕獲的細胞捕獲方法，所述細胞捕獲器件具有筐體和所述過濾器，所述筐體含有具有規定的容積且將所述液體導入至內部的導入區域、和用于將所述液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的所述含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在所述導入區域與所述排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于所述液體通過的多個貫通孔，所述細胞捕獲方法具有n次對所述細胞捕獲器件流過所述液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過所述液體的工序至第n次的流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過所述液體的工序結束時，在所述過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止所述液體自所述細胞捕獲器件的排出。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.08.29 US 62/0434541.一種細胞捕獲方法，其為使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定的細胞選擇性地捕獲的細胞捕獲方法，所述細胞捕獲器件具有筐體和所述過濾器，所述筐體含有具有規定的容積且將所述液體導入至內部的導入區域、和用于將所述液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的所述含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在所述導入區域與所述排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于所述液體通過的多個貫通孔，所述細胞捕獲方法具有n次對所述細胞捕獲器件流過所述液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過所述液體的工序至第n次的流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過所述液體的工序結束時，在所述過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止所述液體自所述細胞捕獲器件的排出。2.根據權利要求1所述的細胞捕獲方法，其中，所述筐體含有設置在所述導入區域的上方的上蓋及所述液體的導入流路。3.根據權利要求1或2所述的細胞捕獲方法，其中，在第1次的流過所述液體的工序之前，預先在所述筐體的包含所述導入區域內且比所述過濾器更靠上游側的部位充滿洗滌液。4.根據權利要求1～3中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，流過所述液體的工序包含：流過固定液的工序；流過透過液的工序、流過染色液的工序及流過洗滌液的工序中的1個以上的工序；和流過所述含細胞溶液的工序。5.根據權利要求1～3中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，所述n為1，流過所述液體的工序是流過所述含細胞溶液的工序。6.根據權利要求1～3中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，流過所述液體的工序中，第1次流過的所述液體是含細胞溶液，第2次流過的所述液體是洗滌液。7.根據權利要求1～6中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，在流過所述液體的工序中，捕獲對象的細胞的至少一部分浸漬于所述過濾器上的所述導入區域的所述液體中。8.根據權利要求1～7中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為捕獲對象的細胞的大小以上。9.根據權利要求1～8中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，在流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面高度為50μm以上。10.根據權利要求1～9中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，所述含細胞溶液的溶劑由含有哺乳動物的全血、血清、血漿或來自于它們的蛋白質的水溶液構成。11.根據權利要求1～10中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，所述過濾器使用高分子材料或金屬加工而成。12.根據權利要求1～11中任一項所述的細胞捕獲方法，其中，在流過所述液體的工序中，對所述細胞捕獲器件導入所述液體的速度為50～1000μL/min。13.一種已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其是制造通過使用細胞捕獲器件對液體進行過濾、在過濾器表面上將含細胞溶液中所含的特定細胞選擇性地捕獲了的已捕獲特定細胞的器件的方法，所述細胞捕獲器件具有筐體和所述過濾器，所述筐體含有具有規定的容積且將所述液體導入至內部的導入區域、和用于將所述液體排出至外部的排出流路，所述液體選自含有2種以上細胞的所述含細胞溶液及用于對該含細胞溶液中的細胞進行處理的處理液；所述過濾器設置在所述導入區域與所述排出流路之間的流路上，且在厚度方向上形成有用于所述液體通過的多個貫通孔，所述方法具有n次對所述細胞捕獲器件流過所述液體的工序，這里n為自然數，在從第1次的流過所述液體的工序至第n次的流過所述液體的工序中，所述過濾器上的所述導入區域中的所述液體的液面維持規定的液面高度，在第n次的流過所述液體的工序結束時，在所述過濾器具有規定高度的液面的狀態下停止所述液體自所述細胞捕獲器件的排出。14.根據權利要求13所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，所述筐體含有設置在所述導入區域的上方的上蓋及所述液體的導入流路。15.根據權利要求13或14所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，在第1次的流過所述液體的工序之前，預先在所述筐體的包含所述導入區域內且比所述過濾器更靠上游側的部位充滿洗滌液。16.根據權利要求13～15中任一項所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，流過所述液體的工序包含：流過固定液的工序；流過透過液的工序、流過染色液的工序及流過洗滌液的工序中的1個以上的工序；和流過所述含細胞溶液的工序。17.根據權利要求13～15中任一項所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，所述n為1，流過所述液體的工序是流過所述含細胞溶液的工序。18.根據權利要求13～15中任一項所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，在流過所述液體的工序中，第1次流過的所述液體是含細胞溶液，第2次流過的所述液體是洗滌液。19.根據權利要求13～18中任一項所述的已捕獲特定細胞的器件的制造方法，其中，在流過所述液體的工序中，捕獲對象的細胞的至少一部分浸漬于所述過濾器上的所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：八木理美，高井健次，菊原得仁，A·H·蔡，
申請(專利權)人：日立化成株式會社，
類型：發明
國別省市：日本,JP