穩(wěn)定白細胞干擾素的方法技術

本文介紹用二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物處理人的干擾素，使之達到穩(wěn)定狀態(tài)。（*該技術在2010年保護過期，可自由使用*）

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物使白細胞干擾素(IFN-α)，特別是凍干型IFN-α穩(wěn)定化的方法。對IFN-α可以理解為具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)活性的體特異性蛋白。就抗病毒感染的意義而言，其抗病毒作用不是通過對病毒本身的直接影響，而是通過對它們的靶細胞作用達到的。除抗病毒活性之外，α-干擾素還對癌腫瘤產(chǎn)生具體作用，使之適用于治療癌癥，而且影響身體的免疫系統(tǒng)，例如，它激活巨噬細胞和NK細胞，并且增強細胞膜在免疫學上有意義的各種組分的表達。由于DNA重組技術的出現(xiàn)，目前可用微生物方法大量制備IFN-α，但盡管作了最大努力，迄今尚不能從天然物質(zhì)(白細胞，淋巴細胞)分離和純化制得。為加強臨床試驗，首次開拓了這一新技術，盡可能廣泛地將IFN-α用于治療，并且有可能為人們探索用活性物質(zhì)進行治療而提供足夠的活性物質(zhì)。目前存在的問題是純IFN-α在貯存期間不夠穩(wěn)定，并逐漸失去生物活性。因此，為提高IFN-α的穩(wěn)定性，已使用了各種輔藥。加入甘氨酸就可使IFN-α達到一定程度的穩(wěn)定狀態(tài)(參見Publ.PCT 申請86/00，531號和歐洲專利公開82，481號)，但最好同時加入白蛋白。在致力于使IFN-α盡可能長期保持良好的穩(wěn)定狀態(tài)，同時又避免應用高分子化合物(例如血清白蛋白，動物膠，葡聚糖或淀粉衍生物)的過程中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)采用二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物是成功的。因此，本專利技術涉及一些組合物，尤以凍干型為最佳，該組合物含有二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物;以及涉及組合物的制備方法，該方法包括用二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物處理IFN-α溶液，必要時將所得溶液凍干;本專利技術還涉及以本專利技術組合物為主的藥物制劑，以及二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物在IFN-α的穩(wěn)定化方面的應用。本專利技術組合物可用于制備防治大量感染和免疫調(diào)節(jié)異常(尤其是瘤)的藥物制劑。穩(wěn)定化作用可適用于天然或重組體IFN-α(γ-IFN-α)。重組體IFN-αA(γ-IFN-αA)是本專利技術特別優(yōu)選的IFN-α。本專利技術組合物中IFN-α含量并不嚴格要求，其濃度范圍超過10的倍率，并且主要僅受IFN-α溶解度上限的限制。在人IFN-α情況下，可考慮的濃度高達5×108國際單位(I.U.)/ml，優(yōu)選為0.1×106至1×108I.U./ml，最好為1×106至5×107I.U./ml。將二糖(最好為乳糖或蔗糖)加到濃度為0.5%至15%(重量/體積)，最好為5%(重量/體積)的IFN-α溶液中。膽汁酸或膽汁酸衍生物可以是，例如，膽酸，脫氧膽酸，甘氨脫氧膽酸，牛磺脫氧膽酸，鵝脫氧膽酸，甘氨鵝脫氧膽酸，牛磺鵝脫氧膽酸，甘氨膽酸和牛磺膽酸。其中，以甘氨膽酸為最佳。將其加到濃度為0.01至3%(重量/體積)，最好為0.5%(重量/體積)的IFN-α溶液中。還可加入其它輔藥，例如，pH調(diào)節(jié)劑(如氫氧化鈉)，pH緩沖劑(如磷酸鹽緩沖劑和檸檬酸緩沖劑)，等滲劑(如氯化鈉)和防腐劑(如對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯)，以及加固凍干組織的試劑(如甘氫酸)。下面實施例詳述本
技術實現(xiàn)思路
。按照文獻中所述的已知方法或本
人員熟知的方法，可以得到實施例中所用的純γ-IFN-αA。為測定γ-IFN-αA的抗病毒活性，用Madison Darby牛腎臟MDBK細胞和VSV(水皰性口炎病毒)病毒進行細胞病理學的試驗，已由Rubinstein等人作過介紹〔參見J.Virol.37，755-758(1981)〕。MDBK細胞和VSV病毒一般容易得到和能夠得到，例如，可由美國標準菌庫(ATCC)(MDBKATCC Nos.CCL21和CRL6071VSVATCC No.VR-1 59)得到。研究穩(wěn)定性試驗時，將含γ-IFN-αA和添加劑的溶液于不同溫度(5℃，25℃，35℃，45℃，55℃和65℃)下凍干和貯存。經(jīng)預定的時間后，測定仍在凍干物中存在的IFN-α的抗病毒活性。下面實施例是為了說明本專利技術而非限制本專利技術。實施例1將3百萬I.U.的γ-IFN-αA溶于1ml含有人血清白蛋白、甘氨酸或乳糖和其它任意輔藥(參見表1)的水中，所得溶液經(jīng)無菌過濾(隔膜過濾器，孔徑為0.2μm)，裝入10ml玻璃小瓶中，然后放在經(jīng)蒸汽消毒的冰凍干燥器內(nèi)。該溶液于-40℃冰凍4小時后，在壓力為0.1mbar、約-30℃下進行真空凍干法的初級干燥14小時，接著在全真空、+20℃下進行第二級干燥4小時，充氮下，在冰凍干燥器內(nèi)，用合適的鋁蓋封閉玻璃小瓶，接著進行各種穩(wěn)定性試驗。試驗結(jié)果列于表1。表1 含γ-IFN-αA的凍干組合物凍干物成分 1 2 3 4 5γ-IFN-αA(百萬I.U.) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0氯化鈉(mg) 9.0 - - - -人血清白蛋白(mg) 5.0 - - - -無致熱質(zhì)甘露糖醇(mg) - - - - 20.0甘氨酸(mg) - 20.0 - 10.0 -乳糖(mg) - - 50.0 - -NaH2PO4.H2O加至pH7.4 - 適量 - - 適量NaOH IN加至pH7.4 - - 適量 適量 -注射用水 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml抗病毒活性(百萬I.U.)制成凍干制品后 3.0 3.0 2.7 3.3 2.32周后/5℃ 3.2 3.0 2.8 3.3 1.82周后/25℃ 3.2 2.7 3.4 3.1 1.52周后/35℃ 3.3 2.8 3.3 2.7 1.22周后/45℃ 2.7 2.0 3.0 2.9 0.92周后/55℃ 2.8 1.5 2.4 2.1 0.82周后/65℃ 2.1 0.6 - - 0.43個月后/5℃ 2.7 2.5 3.0 3.6 -3個月后/25℃ 2.5 2.3 3.1 3.2 -3個月后/35℃ 2.4 2.1 3.1 2.7 -3個月后/45℃ 1.7 1.2 2.8 1.3 -6個月后/5℃ 3.5 3.1 3.2 3.1 -6個月后/25℃ 3.3 3.1 3.2 2.4 -6個月后/35℃ 2.6 1.9 3.0 2.4 -6個月后/45℃ 未測 1.7 3.0 1.1 -12個月后/5℃ 3.7 未測 3.0 2.8 -12個月后/25℃ 2.9 未測 2.9 2.5 -12個月后/35℃ 2.1 未測 2.7 1.3 -12個月后/45℃ 未測 未測 2.7 1.6 -含乳糖的凍干物能達到最佳結(jié)果(見第3欄)。該制劑甚至在貯藏溫度為45℃下，長期保存后仍顯示出極好的穩(wěn)定性，這對IFN-α來說，幾乎是最高貯藏溫度。這一結(jié)果還可進一步明確證實含1百萬I.U.γ-IFN-αA的凍干試驗(見表2)。表2 含γ-IFN-αA的凍干組合物1 2凍干物成分γ-IFN-αA(百萬I.U.) 0.5 0.5甘氨酸(mg) 10.0 -乳糖(mg) - 50.0NaOH IN本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種制備含α－干擾素、二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物的組合物的方法，其特征在于用二糖和任意膽汁酸或膽汁酸衍生物處理α－干擾素，最好用甘氨膽酸處理，必要時，將所得溶液凍干。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：阿爾貝托費羅，
申請(專利權(quán))人：霍夫曼拉羅奇有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：CH[瑞士]