本發(fā)明專利技術(shù)公開了短鏈的具有生物活性的四肽，包括序列ＧｘｘＧ和ＰｘｘＰ，其中Ｇ（甘氨酸）和Ｐ（脯氨酸）是保守的，ｘ是可變的氨基酸。所述肽可以單獨(dú)的或組合的方式使用來(lái)刺激皮膚中細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的產(chǎn)生。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了一種快速的、低成本的生產(chǎn)四肽的異質(zhì)制劑的方法。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】用于誘導(dǎo)細(xì) 卜基質(zhì)蛋白合成的肽片段本申ifi青求2006年6月13日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?0/813^84的美國(guó)臨時(shí) 申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，該文獻(xiàn)內(nèi)W&th全文引入作為參考。皮膚老ifcffi常表現(xiàn)為鈹紋的形成與傷口愈合能力的削弱。傷口定義為 皮膚的上皮完整性的破壞。正常的傷口愈合過(guò)程包括復(fù)雜的、動(dòng)態(tài)的、但是經(jīng) 過(guò)精確安排的一系列導(dǎo)致?lián)p傷組織修復(fù)的事件。普通皮膚中最多的組分是細(xì)胞 夕卜基質(zhì)(ECM)， 一種由其所包圍的細(xì)胞產(chǎn)生的膠狀基質(zhì)。ECM由兩種主要類別 組成，包括纖維結(jié)構(gòu)蛋白與蛋白多糖。目前已知ECM的成分和交聯(lián)狀態(tài)的改變 與老化以及大量的獲得性或遺傳性皮膚失調(diào)都有關(guān)系。人們也已經(jīng)證明ECM不 僅具有結(jié)構(gòu)支撐的作用，還能影響諸如分化和增殖的細(xì)胞行為。同樣，越來(lái)越 多的研究表明其基質(zhì)的組分可能是細(xì)胞信號(hào)源，肯詢多促肚皮細(xì)胞增殖和移動(dòng)， 從而加十姊口愈合。最多的一類纖維ECM肝是膠原蛋白家族，其包括至少16種不同 鄉(xiāng)的膠原蛋白。皮膚基質(zhì)中的膠原蛋白主要由I型(80-85%)和m型(8-11%)膠 原蛋白組成，二者均為纖維狀或桿狀的膠原蛋白。皮膚的拉伸強(qiáng)度主要由這些 纖維 原蛋白肝決定，它們自我組裝為^"尾連接的微原纖維，并互相交錯(cuò) 地橫向并列排布。膠原蛋白分子與相鄰的膠原蛋白^ 相互交聯(lián)，進(jìn)一步加強(qiáng) 了膠原蛋白纖維的強(qiáng)度和穩(wěn)定性。對(duì)膠原蛋白網(wǎng)絡(luò)的損傷(例如，酶或物理?yè)p 傷等)，或其整體性的破壞，導(dǎo)致了修復(fù)治愈的發(fā)生。闕在禾被文獻(xiàn)和專利中都鵬了刺激產(chǎn)生ECM蛋白的各種具有生物活性的肽類。這些肽以前是從天然資源中分離得到的，最近則成為結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系 學(xué)研究的目標(biāo)。天然的肽類還被作為合成的肽類似物設(shè)計(jì)的出發(fā)點(diǎn)。ECM蛋白中特定的序列會(huì)嫩刺激皮膚中有用的成分，如I型、m型 膠原蛋白，纖維結(jié)合蛋白等(Katayama et al., J. BIOL. CHEM. 288: 9941-9944 (1983》。Katayama等A/人IMI^原蛋白前肽的羧端(殘基197-241)中鑒定了五 肽KTTKS(SEQIDNO: 17)。 MT肽被切割于產(chǎn)生成熟的膠原蛋白的時(shí)候。切 害i脂的前肽可能Mil生物合成反饋機(jī)帝摻與調(diào)節(jié)膠原蛋白的生產(chǎn)，其中KTTKS 肽鵬激活作用。Maquart等人(JSocBIOL. 193:423畫28(1999))報(bào)道了肽GHK和 CNYYSNS同樣刺激ECM合成。這些序列會(huì),在ECM周轉(zhuǎn)的時(shí)候被釋放，從 而傳遞需要ECM修復(fù)的信號(hào)。M31J^任一種機(jī)制釋放出來(lái)的短B游列通常被 稱為"馬曲^J3太(matrikines)" (Maquart etal.， J. Soc. BIOL. 193:423-28(1999))。雖然已經(jīng)有一定數(shù)量的天然或合成肽存在，但是人們,需要改進(jìn)的 生物活性E^其^ffl方法。專利技術(shù) 本專利技術(shù)公開了特征為氨基,列基序GxxG或PxxP的四肽，其中G (甘氨酸)和P (脯氨酸)殘基是保守的，x是可變的氨基酸。該四肽來(lái)源于ECM 蛋白一級(jí)序列中多次出現(xiàn)的序列，該ECM為IVM^原蛋白。所披露的序列誘 導(dǎo)所有形式的膠原蛋白產(chǎn)生，其誘導(dǎo)能力高于早先已知的肽序列，包括 SEDERMASAS (法國(guó))公司的商標(biāo)為MATRIXYL 的KTTKS。，一步， 包含不同的多次重復(fù)序列組合的組合物弓胞了更強(qiáng)烈的膠原蛋白合成應(yīng)答。可 以預(yù)期肽類組合物對(duì)多種不同的ECM蛋白有額外的優(yōu)點(diǎn)。生產(chǎn)特定組合的用于ECM修復(fù)的四肽會(huì)使得成本過(guò)高，難以進(jìn)行商 業(yè)應(yīng)用。公開了一種相對(duì)簡(jiǎn)單廉價(jià)的方法，即生產(chǎn)生物活性四肽的不同的混合 物。通過(guò)生產(chǎn)基序GxxG和PxxP的四肽的組合庫(kù)，我們可以在一次生產(chǎn)^lf呈中 得到不同的生物活性四肽(例如，GEPQ、 GPEG、 GPPG和GEEG)。四肽組合 物相對(duì)于單一肽育的多誘導(dǎo)更多的ECM蛋白合成。包含所公開的單一或混合形式 的四肽的組合物能夠被用于皮膚護(hù)理行業(yè)，包括但不限于針對(duì)皮膚褶鈹、膚色 調(diào)節(jié)、皮皿致或^l^松弛等。所公開的四肽刺激合成膠原蛋白能夠有效地改 善受損皮膚和老化皮膚的健康和皿。附圖簡(jiǎn)述圖l是SEQIDNO:45，為IVMMI蛋白氨基lW列，表明GxxG四 肽的存在。所有粗體序列標(biāo)有單下劃線，重薪列標(biāo)有雙下劃線。圖2是SEQIDNO:46，為mME原蛋白氨基!W列，表明移碼(frame shift)活性PGPR和GAGP的存在。所有移碼活,列標(biāo)記為粗體，加單下劃線， 發(fā)生一個(gè)移^(one fimae shift away)的GxxG序列標(biāo)有雙下劃線。圖3同樣是SEQIDNO:45，為IV型膠原蛋白氨基,列，表明PGPP 四肽的存在。專利技術(shù)詳述本專利技術(shù)主要針對(duì)刺激ECM蛋白產(chǎn)生并調(diào)節(jié)傷口愈合的四肽，以及它 們的應(yīng)用。 勝本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)戯式是一種分離的四肽，包括基序GxxG或PxxP。 在這個(gè)實(shí)船式中，G (甘氨酸)或P (脯氨酸)是保守的，x是可變的氮基酸。 一般地，所述的肽可以是落入上述范圍的任何一種肽，更加雌的是SEQ ID NO:l、 SEQ IDNO:2、 SEQ IDNO:3、 SEQ IDNO:5、 SEQ IDNQ:7、 SEQ IDNO:8、 SEQIDNO:9、 SEQIDNQ:IO、 SEQIDNO:ll、 SEQIDNQ:12、 SEQIDNO:13、 SEQIDNQ:14、 SEQIDNO:15或SEQE)NO:16。本專利技術(shù)的另一個(gè)實(shí)施方式是一種分離的四肽，包括基序GxPG，其中 在兩個(gè)可變位點(diǎn)之一或兩者上，x是P。在這個(gè)實(shí)施方式中，G (甘氨酸)和P (脯氨酸)是保守的，x是可變的氨基酸。 一般地，所述的肽可以是落入戰(zhàn)范 圍的任何一種肽，更加優(yōu)選的是SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQIDNO:5或 SEQIDNO:7。本專利技術(shù)的另一個(gè)實(shí)施方式是一種分離的四肽，包括基序GExG。在這 個(gè)實(shí)歸式中，G (甘氨酸)和E (谷氨酸)是保守的，x是可變的氨基酸。一 般地，所述的肽可以是落入，范圍的任何一種肽，更加im的是SEQIDNO:5 或SEQIDNO:8。本專利技術(shù)的另一個(gè)實(shí)施方式是一種分離的四肽，包括基序PGxP。在這 個(gè)實(shí)施方式中，P (脯氨酸)和G (甘氨酸)是保守的，x是可變的氨基酸。一 般地，本專利技術(shù)所述的肽可以是落入上述范圍的^f可一種肽，更加優(yōu)選的是SEQEDNO:ll、 SEQIDNO:12、 SEQIDNO:14或SEQIDNO:16。本專利技術(shù)的另一個(gè)實(shí)施方式是一種分離的四肽，包括基序PExP。在這 個(gè)實(shí)歸式中，P (脯氨酸)和E (谷氨酸)是保守的，x是可變的氨基酸。一 般地，所述的肽可以是落入J^范圍的倒可一種肽，更力口im的是SEQIDNO:l 或SEQIDNO:9。本專利技術(shù)的另一個(gè)實(shí)施方式是一種移碼活性四肽。在這個(gè)實(shí)施方式中， 所述四肽在ECM蛋白中GxxG或PxxP四肽的基礎(chǔ)上發(fā)生一個(gè)移碼。 一般地， 所述的肽可以是落入上述范圍的任何一種肽，更加優(yōu)選的是SEQ ID NO:4或 SEQIDNO:6。戰(zhàn)一種肽可以含有D型或L型氨基酸。所^l太可以含有所有的D 型或L型氨基酸。這些肽可以具有酸性的C末端(-C02H)或者， 的，具有氨 基的C末端(-CONH2,-CONHR或者-CQNR2)。這些本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種能夠誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白產(chǎn)生的四肽，其包括式ＧｘｘＧ，其中Ｇ是甘氨酸并且ｘ是可變氨基酸。
【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：L張，SM哈里斯，TJ法拉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：赫里克斯生物醫(yī)療公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：US[美國(guó)]
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