類胰高血糖素肽的合成制造技術(shù)

發(fā)明專利技術(shù)一種合成ＧＬＰ－１肽的新穎方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及肽藥物合成的領(lǐng)域，即一種合成GLP-1肽;敫動劑的 殺斤方法。
技術(shù)介紹
新穎種類的4唐尿病藥物，GLP-1或類力夷高血糖素肽1 ^敫動劑， 是一種有前途的新穎種類的治療性化合物。然而，其通過標準固相 肽合成技術(shù)的制備不是那么容易的。基本上，人GLP-1為一種序列 上與胰高血糖素有關(guān)的天然發(fā)生的肽。文獻中已描述天然GLP-1的 各種些微地修正的設(shè)計的序列變體，目的為增加效力。該種GLP-1肽的制備已描述于WO 05/027978和WO 02/ 90388中；然而，沒有任何已利用于肽合成的方法比非常基本的標 準Fmoc固相方法好。本專利技術(shù)的專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)先前技藝的方法不允許良好產(chǎn)率而為工 業(yè)制備上不可接受。顯然地，發(fā)現(xiàn)到序列依賴性、個別的偶合步驟 是高度無效率的。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的為專利技術(shù)合成GLP-1肽激動劑的另一或改良的方 法。此目的通過本專利技術(shù)的方法解決，其包含在固相合成期間在獨特的內(nèi)序列4立置4吏用Fmoc"叚月f氨酸(pseudoproline)乂又肽單元4、替只 使用單一 Fmoc-氨基酸。根據(jù)本專利技術(shù)，專利技術(shù)一種制備GLP-1或GLP-1激動劑肽的方法, 其中該肽具有下式A-(Rl)x-(R2)y國R3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser誦Tyr-Le u國Glu國R8-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala國Trp-Leu-Val-R4-R5-(R6) w-(R7)z國B或具有下式A-(Rl)x-(R2)y-R3國Gly-Thr畫Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-B或具有下式A畫(Rl)x-(R2)y-R3國Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser畫B或具有下式A畫(Rl)x-(R2)y-R3-Gly隱Thr-Phe陽Thr-Ser匿Asp-Val陽Ser畫Ser-Tyr-L eu-Glu-Gly-B或具有下式A-(Rl)x畫(R2)y-R3-Gly畫Thr畫Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-L eu-Glu-R8-Gln畫Ala國Ala畫Lys-Glu-Phe國Ile-Ala-Trp-Leu國Val-R4-B或具有下式A-(Rl)x-(R2)y匿R3-Gly畫Thr-Phe國Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-L eu-Glu-R8-Gln畫Ala誦Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-R4-Gly-B，其中B二-OH或國NH2，A = H-、 Ac-、 Boc-、 Fmoc-,Rl=His、 D-His、去氨基(desamino)-組氨酸、2-氨基-組氨酸、 P-羥基-組氨酸、高組氨酸(homohistidine)、 a-氟曱基-組氨酸或a-曱 基-組氨酸，R2 = -Ala、 D-Ala、 -Val、 D-Val、 Gly、 Aib (a-氨基異丁酸)，R3 = Glu、 Asp、 Met、 Leu,優(yōu)選Glu或Asp，最優(yōu)選Asp，R4 = -Lys或Arg，R5 = -Gly、 Aib、 Ala、 D-Ala,R6 = Arg、 Lys或Gly，R7 = Arg、 Lys或Gly，優(yōu)選Lys或Gly，R8 = Gly或Aib,且其中，獨立i也，x、 y、 w、 z為0或l，其限制條件為當(dāng)x-l 時y=l,及其限制條件為當(dāng)z=l時w=l,其中個別氨基酸可視需要具有保護基團，其包含下列步驟a.通過包含々i脯氨酸雙肽的Fmoc-保護0見需要進一步合適地側(cè)鏈經(jīng)保護)的氨基酸或雙肽的逐步偶合以線性方式在固相上合成肽，其限制條件為在獨特的一個分別為-Val-Ser-及/或Val-Ser-Ser 并在上述序列式中以粗體字強調(diào)的適當(dāng)序列位置，第 一個假脯氨酸 雙肽系偶合至生長中的肽鏈，該，支脯氨酸雙肽系選自由 Fmoc-Val-SerCFMe'Mepro)-OH 、 Fmoc-Val-Ser0FH'Hpro)-OH 、 Fmoc-Ser(P)-Ser0FMe，Mepro)-OH及Fmoc-Ser(P)-SerCFH'Hpro)-OH所 組成的群，且其中P為一種在至少80% TFA水溶液的強酸條件下 裂解的酸可裂解的側(cè)鏈^f呆護基團，優(yōu)選P在以下所定義的弱酸條4牛 下不裂解，最優(yōu)選P為三級-丁基或為三苯曱基，b. /人固相裂解肽，且^L需要將肽鏈去保護。具體實施例方式GLP-1肽的活性對序列的改變4艮4文感，大部l分周邊序列元素允 許殘基的一些保守取代。顯然地，較小的改變對生物穩(wěn)定性或受體 結(jié)合且因此對藥理活性仍可具有無法預(yù)并牛的效果。對此的良好回顧 參見Sarrauste de Menthi6re等人，European J. Medicinal Chemistry 39， 2004: 473-480。 GLP-1肽家族的核心序列部分確實不容"HM壬4可 的改變。包含此核心部分的全長或部分肽的線性固相合成遇到個別偶 合步驟達到接近不可能的點的完全無效率的重大問題，即使重復(fù)偶 合亦如此。延長偶合時間、增高偶合溫度等等使反應(yīng)承擔(dān)增加消旋 作用或不要的副產(chǎn)物的風(fēng)險。"i午多作者(Sarrauste,上述，和Adelhorst等人，J. Biol. Chem. 269 (1994)， 6275-6278)已通過二色性光鐠分析天然GLP-l-肽在水溶液 中的二級結(jié)構(gòu)(例如Chen等人，(1974)通過二色性光譜測定蛋白質(zhì) 在水;容液中的螺4i及貝它形式。生物4匕學(xué)13, 3350-3359, Greenfield,N.和Fasman ， G. D. (1969)用于蛋白質(zhì)構(gòu)形的評估的計算二色光語。 生物化學(xué)8， 4108-4116)且發(fā)現(xiàn)，然而，除了無^見巻曲(unorder)及螺 線結(jié)構(gòu)的遠較大的區(qū)域的外，僅相當(dāng)?shù)秃?10 % )的(3-折疊構(gòu)型引 起肽骨架的聚集。所使用的光語法不允許將對應(yīng)GLP-1序列部份配 置至該等結(jié)構(gòu)元素。在
中通常相信固相合成中的聚集且因 此產(chǎn)生的問題與|3_折疊構(gòu)型的延長區(qū)域的發(fā)生有關(guān)。低P-折疊構(gòu)型 含量對于大部分至少10 aa長度的肽是常見的且與任何合成方法中 的稀有問題無關(guān)。Fmoc-假脯氨酸雙肽單元可從現(xiàn)有商業(yè)途徑獲得；它們的合成 已被披露(例如Ruckle等人，Tetrahedron 1999, 55(37): 11281-11288; Keller等人，1998,丄Am. Chem. Soc. 120: 2714-2720)。該種假脯 氨酸肽最少用于在特殊的中心序列片^殳或序列位置或部分序列 國Val-Ser-Ser-中引入至少一個中心絲氨酸殘基，以允i午于此序列位 置在部分序列-Val-Ser-或-Ser-Ser-使用假脯氨酸雙肽，此為本專利技術(shù) 的要點，且除了最后進一步地在部分序歹iJ-Gly-Thr-或-Phe-Thr-中， 優(yōu)選在部分序列-Gly-Thr-中，引入第二個假脯氨酸殘基者的外。本 專利技術(shù)的該種4叚月甫氨酸為書亍生自Ser或Thr的N-Fmoc-肽基-(4S)-l,3-唑咬羧酸酯類且就本專利技術(shù)而言具有式I的共同結(jié)構(gòu)其中K為選自由Ser、 Val本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種制備ＧＬＰ－１或ＧＬＰ－１激動劑肽的方法，其中該肽具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｒ８－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｒ４－Ｒ５－（Ｒ６）ｗ－（Ｒ７）ｚ－Ｂ　或具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｂ　或具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｂ　或具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｂ　或具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｒ８－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｒ４－Ｂ　或具有下式　Ａ－（Ｒ１）ｘ－（Ｒ２）ｙ－Ｒ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｒ８－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｒ４－Ｇｌｙ－Ｂ　，其中　Ｂ＝－ＯＨ或－ＮＨ２，　Ａ＝Ｈ－、Ａｃ－、Ｂｏｃ－、Ｆｍｏｃ－，　Ｒ１＝Ｈｉｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、去氨基（ｄｅｓａｍｉｎｏ）－組氨酸、２－氨基－組氨酸、β－羥基－組氨酸、高組氨酸（ｈｏｍｏｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）、α－氟甲基－組氨酸或α－甲基－組氨酸，　Ｒ２＝－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ、－Ｖａｌ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｉｂ（α－氨基異丁酸），　Ｒ３＝Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ，優(yōu)選Ｇｌｕ或Ａｓｐ，最優(yōu)選Ａｓｐ，　Ｒ４＝－Ｌｙｓ或Ａｒｇ，　Ｒ５＝－Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ，　Ｒ６＝Ａｒｇ、Ｌｙｓ或Ｇｌｙ，　Ｒ７＝Ａｒｇ、Ｌｙｓ或Ｇｌｙ，優(yōu)選Ｌｙｓ或Ｇｌｙ，　Ｒ８＝Ｇｌｙ或Ａｉｂ，　且其中，獨立地，ｘ、ｙ、ｗ、ｚ為０或１，其限制條件為當(dāng)ｘ＝１時ｙ＝１，及其限制條件為當(dāng)ｚ＝１時ｗ＝１，及進一步地其中個別氨基酸可視需要具有保護基團，其包含下列步驟：　ａ．通過包含假脯氨酸（ｐｓｅｕｄｏｐｒｏｌｉｎｅ）雙肽的Ｆｍｏｃ－保護...

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：奧列格韋布特斯基，史蒂芬瓦爾瑞，馬蒂厄吉羅，卡斯滕邁寧豪斯，
申請(專利權(quán))人：隆薩股份公司，
類型：發(fā)明
國別省市：CH[瑞士]