一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法技術

本發明專利技術提供的一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，通過檢測入RAC前后所測得的發光強度值，根據標準曲線得到萊克多巴胺的含量。本發明專利技術是基于萊克多巴胺對Ru(bpy)

Method for detecting ractopamine based on Electrochemiluminescence

The invention provides a method for detecting ractopamine based on an electrochemical luminescence method, and obtains the content of ractopamine according to a standard curve by detecting the luminous intensity value measured before and after entering the RAC. The present invention is based on ractopamine against Ru (bpy)

【技術實現步驟摘要】
一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法
本專利技術涉及添加劑的分析檢測
，尤其涉及一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法。
技術介紹
萊克多巴胺(Ractopamine)是常見的一種瘦肉精添加藥物，添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。但人們食用含“瘦肉精”豬肉過量后易引發心慌、肌肉震顫、頭痛以及臉部潮紅等癥狀，對心率失常、高血壓、青光眼、糖尿病、甲狀腺機能亢進等疾病的患者有較大危害。2000年，FDA(美國食品與藥品監督管理局)批準萊克多巴胺在養豬業中使用，它是美國唯一允許添加的β腎上腺激動劑，美國、加拿大、澳大利亞等24個國家和地區均秉持這一做法。但是2002年，我國農業部、衛生部、國家食品藥品監督管理局發布公告《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》，其中規定：萊克多巴胺與鹽酸克侖特羅、沙丁胺醇、西巴特羅等β腎上腺受體激動劑一起被禁用。嚴格控制肉類尤其是豬肉中萊克多巴胺的含量不超標是保證消費者健康的主要關卡。對于萊克多巴胺的檢測，目前應用比較成熟的方法和技術，例如質譜分析、色譜法、光譜和酶聯免疫吸附法(ELISA)，能夠達到高準確度、靈敏度定量檢測，但是這些方法大都需要精細的操作，前期準備工作較為繁瑣，操作繁瑣，不能滿足快速檢測的要求。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，通過構建噴射式Ru(bpy)32+/N丁基二乙醇胺(BDEA)電化學發光體系，能夠用淬滅法測定豬尿中萊克多巴胺殘留。為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：本專利技術提供了一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，包括以下步驟：1)將三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中進行反應，檢測所述反應產物的電化學發光信號強度，記為I0；所述三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺摩爾比為1：1～100；2)將待測樣品與三聯吡啶釕溶液和二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液進行共反應，檢測所述共反應產物的電化學發光信號強度，記為It；3)根據預制備的標準曲線與電化學發光信號強度差值，得到待測樣品中萊克多巴胺的濃度；所述標準曲線為萊克多巴胺濃度與電化學發光信號強度差之間的線性曲線，所述電化學發光信號差值為ΔI＝I0-It。優選的，所述步驟1)或步驟2)中所述三聯吡啶釕溶液或二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液的溶劑為磷酸緩沖液；所述磷酸緩沖液的pH值為7.5～9.0。優選的，所述步驟1)或步驟2)中二羥乙基N-丁基二乙醇胺以二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液形式存在；所述二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩爾濃度為10-7～10-9mol/L。優選的，所述步驟2)中所述三聯吡啶釕溶液和二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩爾比為1:1～100；所述待測樣品添加的體積為12～180μL。優選的，所述步驟2)中所述共反應的溫度為23～27℃。優選的，所述步驟3)中電化學檢測用工作電極為1.25～1.45V。優選的，所述步驟3)中在檢測時采用噴射式電化學發光檢測儀進行檢測產物；所述反應產物的噴射速率為2～6mL/min。優選的，所述步驟4)中標準曲線的為y＝-0.6836x+0.1816，相關系數r＝0.9989，x代表萊克多巴胺的質量濃度，y代表電化學發光信號差值。優選的，所述標準曲線在萊克多巴胺質量濃度為10-9～10-5g/mL范圍內具有線性關系。本專利技術提供的一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，基于萊克多巴胺對Ru(bpy)32+-N丁基二乙醇胺(BDEA)發光體系的強烈淬滅效應，建立了一種能夠快速、靈敏地檢測豬尿中萊克多巴胺殘留的方法。本專利技術提供的方法方法具有較寬的定量檢測范圍，電化學發光強度與Ru(bpy)32+濃度在10-9～10-5g/mL范圍內呈良好的線性相關性(相關系數r＝0.9989)；具有較高的檢測靈敏度，對萊克多巴胺的最低檢測限為5×10-10g/mL。進一步的，通過控制影響Ru(bpy)32+/N丁基二乙醇胺體系發光的主要參數，結合所構建的噴射式電化學發光分析系統，建立了一種能夠快速、靈敏地檢測豬尿中萊克多巴胺殘留的方法。附圖說明圖1為實施例1中萊克多巴胺(RAC)對Ru(bpy)32+/BDEA體系發光強度的湮滅效應；圖2為實施例2中Ru(bpy)32+/BDEA發光體系對不同濃度RAC的發光強度的響應情況；圖3為實施例2中Ru(bpy)32+/BDEA發光體系對不同濃度RAC的響應曲線；圖4為實施例1中Ru(bpy)32+/BDEA-RAC發光體系的穩定性測試結果。具體實施方式本專利技術提供了一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，包括以下步驟：1)將三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中進行反應，檢測所述反應產物的電化學發光信號強度I0；所述三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺摩爾比為1：1～100；2)將待測樣品與三聯吡啶釕溶液和二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液進行共反應，檢測所述共反應產物的電化學發光信號強度It；3)根據預制備的標準曲線與電化學發光信號強度差值，得到待測樣品中萊克多巴胺的濃度；所述標準曲線為萊克多巴胺濃度與電化學發光信號強度差之間的線性曲線。本專利技術將三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液中進行反應，檢測所述反應產物的電化學發光信號強度，記為I0；所述三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺摩爾比為1：1～100。具體的，本專利技術優選將三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液混合，進行反應。所述三聯吡啶釕溶液的摩爾濃度優選為10-7mol/L，所述二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液的摩爾濃度為10-7～10-9mol/L，更優選為10-8mol/L。本專利技術中，所述三聯吡啶釕溶液或二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液的溶劑優選為磷酸緩沖液；所述磷酸緩沖液的pH值優選為7.5～9.0，更優選為8.5。在本專利技術中，所述磷酸緩沖液的摩爾濃度優選為0.08～0.12mol/L，更優選為0.1mol/L。本專利技術中，所述三聯吡啶釕與二羥乙基N-丁基二乙醇胺摩爾比優選為1：1～10。所述三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺的來源沒有特殊限制，采用本領域技術人員所熟知的三聯吡啶釕與二羥乙基N-丁基二乙醇胺即可。三聯吡啶釕與二羥乙基N-丁基二乙醇胺反應后，本專利技術對得到的反應產物進行電化學發光檢測，得到初始電化學發光信號，即為I0。本專利技術將待測樣品與三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液體系中進行共反應，檢測所述共反應產物的電化學發光信號強度，記為It。本專利技術中，將待測樣品與三聯吡啶釕溶液和二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液混合進行共反應。本專利技術中，所述待測樣品沒有特殊限制，采用本領域技術人員所熟知的含有萊克多巴胺的樣品即可，例如豬尿。本專利技術中，所述豬尿優選進行前處理。所述前處理的方法具有為樣品經轉速為5000～6000rpm條件下進行離心3～7min，取上清液。本專利技術中，所述三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺的摩爾比與上步的三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺的摩爾比相同。本專利技術中，所述待測樣品添加的體積優選為120～180μL。本專利技術中，所述共反應的溫度優選為23～27℃，更優選為25℃。得到共反應產物后，本專利技術對所述共反應產本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將三聯吡啶釕和二羥乙基N?丁基二乙醇胺在溶液體系中進行反應，檢測所述反應產物的電化學發光信號強度，記為I

【技術特征摘要】
1.一種基于電化學發光法檢測萊克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液體系中進行反應，檢測所述反應產物的電化學發光信號強度，記為I0；所述三聯吡啶釕溶液與二羥乙基N-丁基二乙醇胺摩爾比為1：1～100；2)將待測樣品與三聯吡啶釕和二羥乙基N-丁基二乙醇胺在溶液體系中進行共反應，檢測所述共反應產物的電化學發光信號強度，記為It；3)根據預制備的標準曲線與電化學發光信號強度差值，得到待測樣品中萊克多巴胺的濃度；所述標準曲線為萊克多巴胺濃度與電化學發光信號強度差之間的線性曲線，所述電化學發光信號差值為ΔI＝I0-It。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)或步驟2)中溶液體系由磷酸緩沖液提供；所述磷酸緩沖液的pH值為7.5～9.0。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)或步驟2)中二羥乙基N-丁基二乙醇胺以二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液形式存在；所述二羥乙基N-丁基二乙醇胺溶液在溶液體...

【專利技術屬性】
技術研發人員：閆文龍，黃彬庚，王為敏，單磊，
申請(專利權)人：揚州千代科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇,32