一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法，該方法是利用糖來增加天然產(chǎn)物分配系數(shù)和選擇逆流色譜溶劑，具體是將一系列不同劑量的糖加入已選定的兩相體系中并徹底混勻，分析糖劑量與分配系數(shù)的關(guān)系，然后根據(jù)這一關(guān)系確定需要的糖劑量，從而確定合適的逆流色譜溶劑的組成。采用該方法可以很容易的獲得合適的溶劑，使得目標(biāo)化合物在這一溶劑中具有合適的K值，尤其適用于成分復(fù)雜的天然產(chǎn)物，該方法簡單實用，可大大減少逆流色譜溶劑選擇的難度和時間，便于推廣應(yīng)用。

Method for optimizing countercurrent chromatography solvent by using sugar

The present invention provides a method of using sugar to optimize solvent countercurrent chromatography, this method is the use of sugar to increase natural product distribution coefficient and the choice of solvent countercurrent chromatography, in particular a series of different doses of sugar have been selected in the two-phase system and thorough mixing, analysis of the relationship between sugar quantity and distribution coefficient, and then to determine the dose of sugar needed according to this relationship, so as to determine the composition of the appropriate solvent countercurrent chromatography. This method can easily obtain the appropriate solvent, the target compounds have the appropriate K value in this solvent, especially suitable for the natural product component complex, the method is simple and practical, can greatly reduce the difficulty of countercurrent chromatography solvent and time, and is convenient for popularization and application.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法
本專利技術(shù)屬于逆流色譜
，涉及一種確定逆流色譜溶劑的方法，尤其涉及一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法。
技術(shù)介紹
逆流色譜是一種無需固相載體的全液－液相分配色譜，由于其不使用固相載體而僅使用液相作固定相，因此與其它色譜相比，逆流色譜有顯著的優(yōu)勢，不僅可以避免固相載體造成的吸附、變性、拖尾等不利因素，使樣品幾乎100％回收，而且對于一些結(jié)構(gòu)類似而分配系數(shù)不同的化合物，也常常有較好的選擇性。此外，逆流色譜也容易較好地與其它色譜進行聯(lián)用，解決分離中的問題。但是，由于天然產(chǎn)物成分復(fù)雜，逆流色譜分離天然產(chǎn)物仍有很多挑戰(zhàn)，其關(guān)鍵還是在于兩相分配。選擇合適的溶劑體系是逆流色譜分離過程中的第一步也是最重要的一步，約占據(jù)了整個工作量的90％。盡管已經(jīng)存在許多兩相溶劑體系家族和相對應(yīng)的溶劑選擇策略，例如在Ito規(guī)律上建立的Ito溶劑體系、Arizona溶劑體系、以薄層色譜為基礎(chǔ)的HEMWat溶劑體系猜測法、九九表式定向溶劑選擇策略和別的以實驗為基礎(chǔ)的計算方法。但是選擇合適的溶劑仍然需要專業(yè)的知識并且非常繁瑣和耗時。因此，選擇一個合適的溶劑，使目標(biāo)化合物在這一溶劑中具有合適的K值，仍是當(dāng)前研究的重點和難點。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對上述現(xiàn)有逆流色譜分離過程中溶劑選擇復(fù)雜、耗時長、需要專業(yè)知識等缺點，提供一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法，經(jīng)大量實驗驗證該方法是一種可行且簡單的溶劑選擇策略，可以快速地分離高純度的黃酮類化合物和鬼臼毒素類化合物。本專利技術(shù)提供一種利用糖來增加天然產(chǎn)物分配系數(shù)和選擇逆流色譜溶劑的方法，該方法是將一系列不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的糖的水溶液加入已選定的兩相溶劑中并徹底混勻得到兩相體系，分析糖劑量與分配系數(shù)的關(guān)系，然后根據(jù)所需的分配系數(shù)確定合適的糖劑量，從而獲得逆流色譜溶劑的組成。上述技術(shù)方案中，所述的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、木糖中的一種或多種組合。上述的用來調(diào)節(jié)分配系數(shù)以獲得糖劑量與分配系數(shù)關(guān)系的糖水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)可以是5-30％。所述的兩相體系是正己烷－乙酸乙酯－甲醇－糖的水溶液。本專利技術(shù)的有益效果在于：該方法簡單實用，可大大減少逆流色譜溶劑選擇的難度和時間，便于推廣應(yīng)用。(1)糖是一種甜的、短鏈、可溶性的碳水化合物。作為添加劑，和鹽析制備化合物的策略相比，糖析制備的策略更綠色更環(huán)保，不會產(chǎn)生鹽腐蝕等并發(fā)癥。(2)本專利技術(shù)中添加糖到正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水的兩相體系，可以改變?nèi)軇┮约盎衔镌趦上囿w系中的分配，從而可以快速有效地找到合適的溶劑體系。(3)采用正己烷、乙酸乙酯、甲醇、糖的水溶液兩相體系進行逆流色譜分離，可以實現(xiàn)高純度的逆流色譜制備。(4)當(dāng)吸附有含糖的純品的反相C18色譜柱用甲醇和水洗脫時，也可良好地實現(xiàn)逆流色譜和柱色譜的連用，提高單位時間的生產(chǎn)效率，同時也降低能耗；也可以重復(fù)進行，便于自動化生產(chǎn)。附圖說明圖1在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)體系中，蔗糖與化合物K值關(guān)系圖；圖2.在正已烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)體系中，蔗糖與化合物K值關(guān)系圖；圖3.在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)體系中，蔗糖與化合物K值關(guān)系圖；圖4.每種糖對化合物在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-20％糖溶液4.5:5.5:4.5:5.5(v/v)中分配系數(shù)的影響關(guān)系圖；圖5.糖影響兩相的溶劑分配；圖6.逆流色譜分離過程中，八角蓮粗品在不加糖的兩相體系和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％蔗糖的體系(4:6:4:6v/v)中的糖析作用比較。具體實施方式下面通過實施例對本專利技術(shù)的技術(shù)方案作進一步的描述。實施例1：黃酮類化合物和鬼臼毒素類化合物的物理性質(zhì)測定，包括以下步驟：1、提取和富集首先八角蓮提取液直接進行柱色譜吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯體積比2:1進行洗脫，除去大極性雜質(zhì)，收集洗脫液。洗脫液中化合物的物理性質(zhì)根據(jù)ChemBioOfficeUltra13.0,CambridgeSoft計算如表1所示。當(dāng)石油醚和乙酸乙酯體積比2:1洗脫得到的粗產(chǎn)品包括親水性的鬼臼毒素類化合物和疏水性的黃酮類化合物。表1.所選擇的化合物物理性質(zhì)bb根據(jù)ChemBioOfficeUltra13.0,CambridgeSoft計算實施例2：黃酮類化合物和鬼臼毒素類化合物在以蔗糖為添加劑的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)體系中的分配系數(shù)測定，包括以下步驟：1、提取和富集同實施例1類似，首先八角蓮提取液直接進行柱色譜吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯體積比2:1進行洗脫，除去大極性雜質(zhì)，收集洗脫液。2.糖溶液配制將蔗糖溶解到一定質(zhì)量的水中分別配制形成質(zhì)量濃度10％、20％、30％的糖溶液。3.八角蓮中化合物在以蔗糖為添加劑的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)體系中的分配系數(shù)的測定將八角蓮粗品加入到裝有兩相體系體積比為4：6：4：6的2mL離心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖濃度的水溶液。兩相溶劑平衡建立以后，分別取上相和下相進行HPLC分析。HPLC分析條件為：C18反相色譜柱(ZorbaxSB-C18,250mm×4.6mmI.D.,5μm)，保護柱(10mm×4.6mmI.D.,5μm)；流動相為甲醇和0.1％三氟乙酸(TFA)。洗脫采用梯度模式，具體參數(shù)如下：0-5min，甲醇由10％梯度變化到30％，三氟乙酸由90％梯度變化到70％；5-35min，甲醇由30％梯度變化到70％，三氟乙酸由70％梯度變化到30％；35-45min,甲醇由70％梯度變化到100％，三氟乙酸由30％梯度變化到0％。流速為0.8mL/min，樣本進樣量10μL,柱溫控制在30℃。洗脫物利用DAD檢測器進行檢測，檢測波長為254nm。分配系數(shù)為化合物在上相的峰面積和下相的峰面積的比值。結(jié)果表明(圖1)八角蓮粗品以不同濃度的蔗糖為添加劑的兩相體系中的分配系數(shù)變化，在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)體系中，蔗糖明顯地增加化合物的K值。實施例3：黃酮類化合物和鬼臼毒素類化合物在以蔗糖為添加劑的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)體系中的分配系數(shù)測定，包括以下步驟：1、提取和富集同實施例1類似，首先八角蓮提取液直接進行柱色譜吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯體積比2:1進行洗脫，除去大極性雜質(zhì)，收集洗脫液。2.糖溶液配制將蔗糖溶解到一定質(zhì)量的水中分別配制形成質(zhì)量濃度10％、20％、30％的糖溶液。3.八角蓮中化合物在以蔗糖為添加劑的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)體系中的分配系數(shù)的測定將八角蓮粗品加入到裝有兩相體系體積比為5：5：5：5的2mL離心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖濃度的水溶液。兩相溶劑平衡建立以后，分別取上相和下相進行HPLC分析。HPLC分析條件同實施例2相同，分配系數(shù)為化合物在上相的峰面積和下相的峰面積的比值。結(jié)果表明(圖2)八角蓮粗品以不同濃度的蔗糖為添加劑的兩相體系中的分配系數(shù)變化，在正已烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)體系中，蔗糖明顯地增加化合物的K值。實施例4：黃酮類化合物本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法，其特征在于,該方法為將一系列不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的糖的水溶液加入已選定的兩相溶劑中，徹底混勻得到兩相體系，獲取糖劑量與分配系數(shù)的關(guān)系，根據(jù)所需的分配系數(shù)獲得相對應(yīng)的糖劑量，從而確定出逆流色譜溶劑。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法，其特征在于,該方法為將一系列不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的糖的水溶液加入已選定的兩相溶劑中，徹底混勻得到兩相體系，獲取糖劑量與分配系數(shù)的關(guān)系，根據(jù)所需的分配系數(shù)獲得相對應(yīng)的糖劑量，從而確定出逆流色譜溶劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用糖來優(yōu)選逆流色譜溶劑的方法，其特征在于，所述的糖是蔗...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吳世華，張利紅，
申請(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33