一種定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫試紙條及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫試紙條及其制備方法，定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫試紙條包括底板，底板上依次相互交錯排列樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，包被膜貼合在底板中部，包被膜一側邊緣上端貼覆結合墊，另一側邊緣上端貼合吸水紙，結合墊遠離包被膜的一側邊緣上方貼覆樣品墊。與現有技術相比，本發明專利技術具有以下優點：將時間分辨免疫層析技術引入可溶性生長刺激基因2蛋白的檢測中，結合時間分辨熒光檢測儀，實現了可溶性生長刺激基因2蛋白的單人份定量檢測，且靈敏度高，批內、批間差小，為臨床使用提供了極大便利；本發明專利技術操作簡便，適合大規模生產，對于可溶性生長刺激基因2蛋白的定量檢測有著積極的意義。

Time resolved fluorescent immunity test strip for quantitative detection of sST2 and preparation method thereof

The invention discloses a preparation method for quantitative detection of sST2 time resolved fluorescence immunoassay test strip and method for quantitative detection of sST2, time-resolved fluorescence immunoassay test strip comprises a bottom plate, bottom plate are mutually staggered with the sample pad, pad, coating film and absorbent paper, coated film in the middle of the bottom plate, the upper envelope on one side of the membrane covered with pad edge, the edge of the other side is attached to the absorbent paper, combining pad away from the package side edge above the membrane covering the sample pad. Compared with the prior art, the invention has the following advantages: the time-resolved immunochromatographic technology into soluble growth stimulating protein 2 gene detection, combined with time-resolved fluorescence detector, the soluble growth stimulating gene single quantitative detection of 2 protein, and high sensitivity, the intra - and inter difference, provide a great convenience for clinical use; the present invention has simple operation, suitable for mass production and has a positive significance for quantitative soluble growth stimulated gene 2 protein detection.

【技術實現步驟摘要】
一種定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫試紙條及其制備方法
本專利技術屬于醫學檢驗領域，具體涉及一種定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫試紙條及其制備方法。
技術介紹
生長刺激表達基因2蛋白(ST2)是心肌細胞受到生物機械應力后產生的一種心肌蛋白，1989年Tominaga等首先發現了ST2基因，但因未發現其功能性配體，一直被誤認為是孤兒受體。2005年Schmitz等發現其特異性功能配體白細胞介素IL-33。ST2基因表達于肥大細胞、激活的輔助性T細胞(Th2)、巨噬細胞和心肌細胞。人的ST2基因可編碼一種可溶性生長刺激表達基因2蛋白(sST2)和一種跨膜形式生長刺激表達基因2蛋白(ST2L)，兩者的轉錄分別受到不同的啟動子調控。IL-33屬于IL-1家族，廣泛存在于多種組織細胞中，是炎癥反應的重要調節因子之一。正常情況下，IL-33存在于細胞核中，作為轉錄抑制因子發揮作用。當細胞受到損傷時，IL-33可分泌到胞外，主要通過結合受體ST2傳遞信號，作為細胞因子發揮免疫調節等作用。ST2L/IL-33信號通路在抗動脈粥樣硬化、抗心肌纖維化和心肌細胞肥大等的過程中發揮重要作用。心臟成纖維細胞受到機械應力刺激后可產生IL-33，而IL-33與其受體ST2L結合后，將活化信號傳遞至細胞內，經過下游的IL-1相關蛋白激酶、髓樣分化因子88和腫瘤壞死因子受體相關因子6等一系列信號分子，激活核轉錄核因子(NF)-κB和Map激酶，從而影響基因的轉錄，誘發Th2細胞效應分子IL-4和IL-5等的釋放。當心臟成纖維細胞和心肌細胞受到強壓力負荷時，這些效應分子可使心臟做出保護性變化，拮抗牽拉過度導致的心肌肥大并心肌纖維化發生。而sST2是IL-3的誘騙受體，能夠結合并中和IL-33，表現為對ST2L/IL-33信號通路的負性調節。血清中過多的sST2可以使心肌在受到機械應力損傷時缺乏足夠的IL-33保護作用，進而發生心肌重塑和心功能障礙。與冠脈造影和左心室功能正常人群相比，主動脈狹窄患者和充血性心肌病患者的sST2水平顯著增高。急性心衰患者的sST2水平越高，心衰的嚴重程度越高，sST2與NYHA心功能分級正相關。因此，通過檢測sST2水平，可鑒別不同風險水平的患者，從而針對不同風險的患者給予適當的治療方案，進而有效降低心衰的發病率和死亡率。臨床上，sST2的濃度可用于估計心臟代謝失調，心室重構等。sST2可作為心衰的標志物，不僅可用于篩查心衰患者，獨立的對心力衰竭進行診斷，對心衰患者進行風險分層；作為急性心力衰竭患者結構和功能惡化的預測性指標，是急性心力衰竭預后的強有力的預測因子；sST2能夠很好的預測患者在短期、中長期(三個月、一年、三至五年)內的死亡率，為患者是否進行心臟移植提供數據支持，有利于提前干預提供患者的治愈率和成活率。標記免疫分析法是將具有高度敏感性的標記示蹤技術和免疫學中抗原抗體的高度特異性反應相結合的產物，包括放射免疫(RIA)、酶聯免疫分析(EIA)、化學發光免疫分析(CLIA)、電化學發光免疫分析(ECLIA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)。TRFIA技術是20世紀70年代末Wallac公司創立的一種非放射性標記免疫分析技術。示蹤物選用的是鑭系元素如銪、鉍、釤和鏑的三價稀土離子及其螯合物，用以代替熒光物質、酶、同位素、化學發光物質來標記抗體、抗原、激素、多肽、蛋白質、核酸探針及生物細胞等，在一定的反應體系(例如常用的抗原抗體反應、生物素親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等)內發生反應后，用時間分辨熒光免疫分析檢測儀測定反應產物中的特異熒光強度，并與相對應的標準熒光曲線比對，判斷反應體系中分析物的濃度，從而達到定量分析待測物的目的。TRFIA的反應原理和其他標記免疫分析相似。常用的有雙位點夾心法和固相抗體競爭法。雙位點夾心分析法多用來測定蛋白質類大分子化合物。使用針對被測物上不同抗原決定簇的兩個單克隆抗體，一個用Eu3+標記，另一個包被固相載體，經過免疫反應形成免疫復合物后，再將Eu3+從復合物上完全解離下來，在Eu3+的增強液中與另一種螯合劑結合，在協同劑的作用下，形成一個Eu3+包裹于其內部的微膠囊(膠態分子團)。它在激發光作用下能發射出很強的熒光信號,其強弱與待測抗原(或抗體)含量相關。該法用于測定蛋白質類大分子化合物。固相抗體競爭法多用于一些小分子半抗原化合物的測定，因分子質量小，不能直接進行固相包被，如多肽、甲狀腺激素類和一些藥物等，都必須經過化學耦聯劑與載體蛋白質進行共價鍵結合,然后可包被聚苯乙烯微量滴定條孔壁，制成固相抗原。其原理是：限量固相抗體與Eu3+標記抗原和樣品中的待測抗原競爭性結合，樣品中的抗原濃度越高，固相抗體結合的Eu3+標記抗原量就越少，反之亦然，即固相抗體上的熒光信號強度與樣品中的抗原濃度成反比。TRFIA技術是近年來新興起來的一種超微量快速免疫檢測技術，具有靈敏度高、特異性強、穩定性好，而且測定范圍更寬，實際壽命長，操作簡便和非放射性等特點，非常適用于生物學、醫學上的分析檢測。該技術越來越受到各領域科研工作者的關注，應用范圍也不斷發展，是繼放射免疫分析、酶標、化學發光、電化學發光之后的一種更新、更靈敏的檢測方法。目前，檢測sST2的方法主要是采用的是酶聯免疫法(ELISA)。ELISA技術存在以下缺點：檢測設備要求高，成本高；干擾因素較多，重復性不好；檢測時間長。因此酶聯免疫技術檢測可溶性生長刺激基因2蛋白不適合臨床快速診斷。
技術實現思路
為了解決現有技術存在的缺陷，本專利技術提供一種可用于定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條及其制備方法，采用該免疫分析試紙條，不僅能夠提供較高的靈敏度和特異性，操作簡單，可實現快速檢測，滿足了臨床檢驗的需要，而且降低了成本，滿足國內市場的需求。為了解決上述技術問題，本專利技術提供如下技術方案：本專利技術一種定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，包括：包括底板，底板上依次相互交錯排列樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，包被膜貼合在底板中部，包被膜一側邊緣上端貼覆結合墊，另一側邊緣上端貼合吸水紙，結合墊遠離包被膜的一側邊緣上方貼覆樣品墊；底板以及底板上依次相互交錯排列的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述包被膜貼合在底板中部上，所述結合墊貼合在底板上，一側壓覆在包被膜一側邊緣上，所述樣品墊貼合在底板上，一側壓覆在結合墊邊緣上，所述吸水紙一側壓覆在包被膜另一側邊緣上；所述結合墊上包被有稀土離子微球標記的sST2單克隆抗體I，所述稀土離子微球標記的sST2單克隆抗體I為鼠源性sST2單克隆抗體，所述包被膜上包被有檢測線和質控線，所述檢測線固定有識別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II，所述質控線固定有兔抗鼠IgG抗體；所述包被膜上檢測線和質控線相互平行，所述檢測線靠近所述結合墊，所述質控線靠近所述吸水紙。優選的，所述結合墊為聚酯膜。優選的，所包被膜為硝酸纖維素膜。優選的，所述稀土離子微球為用于標記的任何鑭系金屬元素微球。優選的，所述稀土離子微球表面帶有活性基團，可以連接蛋白、糖類等生物物質。優選的，所述稀土離子微球的直徑為100nm-300nm。優選的，本專利技術提供定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種定量檢測可溶性生長刺激表達基因2蛋白(sST2)的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，包括：底板以及底板上依次相互交錯排列的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述包被膜貼合在底板中部上，所述結合墊貼合在底板上，一側壓覆在包被膜一側邊緣上，所述樣品墊貼合在底板上，一側壓覆在結合墊邊緣上，所述吸水紙一側壓覆在包被膜另一側邊緣上；所述結合墊上包被有稀土粒子微球標記的sST2單克隆抗體I，所述包被膜上包被有檢測線和質控線，所述檢測線固定有識別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II，所述質控線固定有兔抗鼠IgG抗體；所述包被膜上檢測線和質控線相互平行，所述檢測線靠近所述結合墊，所述質控線靠近所述吸水紙。

【技術特征摘要】
1.一種定量檢測可溶性生長刺激表達基因2蛋白(sST2)的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，包括：底板以及底板上依次相互交錯排列的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述包被膜貼合在底板中部上，所述結合墊貼合在底板上，一側壓覆在包被膜一側邊緣上，所述樣品墊貼合在底板上，一側壓覆在結合墊邊緣上，所述吸水紙一側壓覆在包被膜另一側邊緣上；所述結合墊上包被有稀土粒子微球標記的sST2單克隆抗體I，所述包被膜上包被有檢測線和質控線，所述檢測線固定有識別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II，所述質控線固定有兔抗鼠IgG抗體；所述包被膜上檢測線和質控線相互平行，所述檢測線靠近所述結合墊，所述質控線靠近所述吸水紙。2.根據權利要求1所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，所述結合墊為聚酯膜；所包被膜為硝酸纖維素膜。3.根據權利要求1所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，所述稀土離子微球為用于標記的任何鑭系金屬元素微球。4.根據權利要求3所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，所述稀土離子微球表面帶有活性基團。5.根據權利要求3所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，稀土離子微球的直徑為100nm-300nm。6.根據權利要求1-5中任一項所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，所述試紙條還包括一卡殼，所述試紙條裝入在卡殼內，露出樣品墊、結合墊、包被膜上的檢測線和質控線、以及吸水墊。7.根據權利要求6所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條，其特征在于，所述卡殼為塑料卡殼。8.一種根據權利要求6或7所述定量檢測sST2的時間分辨熒光免疫分析試紙條的制備方法，包括如下步驟：(1)在包被膜的不同位置分別固定識別不同抗原表位的sST2單克隆抗體II和兔抗鼠IgG抗體，形成檢測線和質控線；(2)制備稀土離子微球標記的sST2單克隆抗體I，并噴涂在結合...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陶劍，周穎，蘭成杰，
申請(專利權)人：天津歐爾克醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：天津,12