一種免疫球蛋白M檢測試劑盒及檢測方法技術

本發明專利技術屬于生物技術領域，具體涉及一種免疫球蛋白M檢測試劑盒及檢測方法，包括試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白M標準品，所述試劑R1包括第一緩沖液20～300mmol/L、促進劑5～50mmol/L、聚乙二醇?400?0.5～10g/L和氯化鈉5～50g/L；所述試劑R2包括第二緩沖液20～300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒10～50％w/v、氯化鈉5～50g/L和穩定劑0.5～10g/L。與現有的試劑盒相比，本發明專利技術試劑盒具有更高的特異性、準確度、精密度和穩定性，適于大范圍推廣應用。

Immunoglobulin M detection kit and detection method

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to an immunoglobulin M detection kit and detection method, including reagent R1, reagent R2 and immunoglobulin M standard, the R1 kit includes a first buffer of 20 ~ 300mmol/L, 5 ~ 50mmol/L, polyethylene glycol accelerator 400 0.5 ~ 10g/L and 5 sodium chloride to 50g/L; the reagent R2 including second buffer 20 ~ 300mmol/L magnetic particles and anti Human Immunoglobulin M antibody coated sodium chloride 10 ~ 50%w/v, 5 ~ 50g/L and 0.5 ~ 10g/L stabilizer. Compared with the existing reagent kits, the kit of the invention has higher specificity, accuracy, precision and stability, and is suitable for wide range of popularization and application.

【技術實現步驟摘要】
一種免疫球蛋白M檢測試劑盒及檢測方法
本專利技術屬于生物
，具體涉及一種免疫球蛋白M檢測試劑盒及檢測方法。
技術介紹
免疫球蛋白是一組具有抗體活性的蛋白質，主要存在于血漿中，也見于其他體液、組織和一些分泌液中。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。其中，IgM是五類免疫球蛋白中分子量最大的一種。其分子量為9×105道爾頓，故又稱為巨球蛋白。在正常人血清中的平均濃度為60～180mg％，約占血清總免疫球蛋白的6％。IgM的升高常見于巨球蛋白血癥、細菌和寄生蟲傳染病、肝臟疾病、類風濕性關節炎及膽囊纖維癥等。IgM的減少常見于原發性無丙種球蛋白血癥，非IgA和IgG型多發性骨髓瘤，霍奇金病，慢性淋巴細胞白血病，蛋白喪失性胃腸病等。目前臨床上使用較為廣泛的免疫球蛋白A的檢測方法為酶聯免疫吸附法和高效液相色譜法，酶聯免疫吸附法操作過程復雜，耗時長，且對操作人員有較高的專業技術要求高，而且檢測不準確。而隨著生化檢測技術的不斷改進和完善，由于比濁法用于免疫球蛋白測定，具有快速、準確、就愛你百納、易于自動化等優點，正日益受到人們的關注。如中國專利申請CN104407159A公開了一種免疫球蛋白IgM免疫比濁法檢測試劑盒，它包含試劑R1、試劑R2和校準品，其中試劑R1組成為：pH7.6Tris緩沖液、氯化鈉、聚乙二醇400、二氧化硅包覆的磁性納米顆粒；試劑R2組成為：pH7.6Tris緩沖液、羊抗人IgM抗體、牛血清白蛋白、Kathon-CG。該試劑盒通過在試劑R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性納米顆粒和在試劑R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon-CG，有效的提高了試劑盒的穩定性和分析靈敏度，其線性范圍也較好，試劑的準確度高，有利于在市場中進一步的推廣使用。但是該試劑盒忽略了磁顆粒的聚集現象，在實際應用中，磁顆粒傾向于黏附于反應器內壁，降低了免疫反應，從而導致試劑盒的靈敏度下降，另外，該試劑盒抗原和抗體的結合不夠穩定，易解離，特異性不強。中國專利申請CN105572384A公開了一種高性價比的人血液免疫球蛋白G檢測試劑盒，包括試劑2，所述試劑2為標記有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗體的膠乳顆粒溶液；其中，所述膠乳顆粒粒徑范圍為40nm～120nm，每升試劑2中抗體的用量為20ml～30ml。但是該試劑盒未能解決抗體在稀溶液中穩定性的問題。因此，有必要提供一種靈敏度高、特異性強、準確度高、穩定性高的試劑盒。
技術實現思路
為了解決現有技術中存在的技術問題，本專利技術的目的在于提供一種免疫球蛋白M檢測試劑盒，其解決了因磁微粒傾向聚集的現象和抗體不穩定導致現有的試劑盒的特異性和穩定性不高的問題。本專利技術提供了一種免疫球蛋白M檢測試劑盒，包括試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白M標準品，所述試劑R1包括第一緩沖液20～300mmol/L、促進劑5～50mmol/L、聚乙二醇-4000.5～10g/L和氯化鈉5～50g/L；所述試劑R2包括第二緩沖液20～300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒10～50％w/v、氯化鈉5～50g/L和穩定劑0.5～10g/L。進一步地，所述第一緩沖液、所述第二緩沖液選自PBS緩沖液、Tris緩沖液和醋酸鹽緩沖液中的一種。進一步地，所述促進劑由非極性氨基酸和CHAPS按1:(0.5～2)的重量比在組成。進一步地，所述促進劑由非極性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重量比在組成。進一步地，所述非極性氨基酸選自苯丙氨酸、亮氨酸和纈氨酸中的一種或幾種。進一步地，所述非極性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02～0.1)的重量比在組成。進一步地，所述非極性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.06的重量比在組成。進一步地，所述穩定劑包括以下重量份數的組份：聚乙烯吡咯烷酮0.05～2份、二硫蘇糖醇0.01～0.1份、無機鹽0.1～2份、牛血清白蛋白0.05～2份和甘油1～2份。進一步地，所述穩定劑包括以下重量份數的組份：聚乙烯吡咯烷酮1.2份、二硫蘇糖醇0.06份、無機鹽1.5份、牛血清白蛋白1份和甘油1.5份。進一步地，所述無機鹽選自氯化鈣、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈣、溴化鈉、溴化鉀、硫酸鈉和硫酸鉀中的一種或幾種。進一步地，所述無機鹽選自氯化鈣。進一步地，所述試劑R1和所述試劑R2的pH均為6～10。進一步地，所述抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒由以下步驟制得：將磁微粒用MES緩沖液分散，使磁微粒的濃度為60～90mg/m，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，攪拌后加入抗人免疫球蛋白M抗體，攪拌好混合均勻，室溫下孵育10～24h，分離磁微粒，即得。除外，本專利技術還提供了一種利用上述免疫球蛋白M檢測試劑盒檢測免疫球蛋白M含量的方法，包括以下步驟：A)取2μl待測樣品，加入250μl所述試劑R1，孵育3～6min后得到吸光度A1，加入50μl所述試劑R2反應3～6min后得吸光度A2，計算ΔA；B)使用所述免疫球蛋白M標準品繪制標準曲線，并根據ΔA和標準曲線得到待測樣品中免疫球蛋白M的含量。免疫比濁法的測試原理為：樣本中免疫球蛋白M抗原與抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒產生抗原抗體反應的凝集反應，形成抗原抗體復合物，其濁度的變化通過測定特定波長的吸光度值，即可得出免疫球蛋白M的含量。專利技術人在實踐過程中發現，當樣本發生溶血時，血細胞內部的一些物質流入反應系統內，其可以引起磁微粒的非特異性聚集，具體地說是容易使磁微粒在反應容器內壁上黏附，嚴重影響了測試的進行和降低了免疫反應。經過不懈地努力，專利技術人發現了一種促進劑，其一方面可以有效避免磁微粒的聚集現象，另一方面，驚奇地，其可以有效促進抗原和抗體的結合，并且兩者的結合穩定，提高了試劑盒的特異性。優選地，促進劑由非極性氨基酸和CHAPS按1:(0.5～2)的重量比在組成，更優選地，由非極性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重量比在組成。其中，非極性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02～0.1)的重量比在組成。雖然促進劑能有效促進抗原和抗體的結合的機理不明，但專利技術人認為可能是因為在反應過程中，非極性氨基酸圍繞在抗原抗體周圍，使得抗原抗體分子上的疏水決定簇在水中不易形成氫鍵，而傾向于彼此間的相互吸引，促進了抗原與抗體之間的疏水性作用，而抗原抗體的疏水作用結合比氫鍵結合更具有高度特異性，因此能夠使試劑盒的特異性提高。另外，本專利技術還提供了一種穩定劑，其解決了抗體在稀溶液中穩定性不高這一難題，其能夠使抗體保持穩定，且不會影響抗體的性質，從而提高了試劑盒的穩定性。與現有技術相比，本專利技術試劑盒具有以下優勢：1)本專利技術提供了一種免疫球蛋白M檢測試劑盒，其具有準確度高、特異性好、精密度高、穩定性優異的優點。2)本專利技術通過加入了促進劑，其一方面可以有效避免磁微粒的聚集現象，另一方面，可以有效促進抗原和抗體的結合，并且兩者的結合穩定，提高了試劑盒的特異性；另外通過加入穩定劑，使本專利技術試劑盒在4℃的條件下保存6個月后，準確度、精密度、特異性仍然保持不變，具有優異的穩定性。具體實施方式：以下通過具體實施方式的描述對本專利技術作進一步說明，但這并非是對本本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種免疫球蛋白M檢測試劑盒，其特征在于，包括試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白M標準品，所述試劑R1包括第一緩沖液20～300mmol/L、促進劑5～50mmol/L、聚乙二醇?400?0.5～10g/L和氯化鈉5～50g/L；所述試劑R2包括第二緩沖液20～300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒10～50％w/v、氯化鈉5～50g/L和穩定劑0.5～10g/L。

【技術特征摘要】
1.一種免疫球蛋白M檢測試劑盒，其特征在于，包括試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白M標準品，所述試劑R1包括第一緩沖液20～300mmol/L、促進劑5～50mmol/L、聚乙二醇-4000.5～10g/L和氯化鈉5～50g/L；所述試劑R2包括第二緩沖液20～300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗體包被的磁微粒10～50％w/v、氯化鈉5～50g/L和穩定劑0.5～10g/L。2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一緩沖液、所述第二緩沖液選自PBS緩沖液、Tris緩沖液和醋酸鹽緩沖液中的一種。3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述促進劑由非極性氨基酸和CHAPS按1:(0.5～2)的重量比在組成。4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述非極性氨基酸選自苯丙氨酸、亮氨酸和纈氨酸中的一種或幾種。5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述非極性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02～0.1)的重量比在組成。6.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述穩定劑包括以下重量份數的組份：聚乙烯吡咯烷酮0.05～2份、二硫蘇糖醇0.0...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳立國，鄒偉權，張亞麗，李慶祥，母潤紅，王濤，蘇焱，
申請(專利權)人：廣州華弘生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44