制備低分子量肝素的方法技術

本發明專利技術提供了用于制備所具有的ＶＬＭＷＨ的含量相對于總肝素含量為至少１０ｗｔ％的極低分子量肝素（ＶＬＭＷＨ）組合物的方法，所述方法包括以色譜或化學的方式或通過過濾，在從非哺乳類的、具有血管的海洋動物提取的肝素組合物中，減小分子量高于８０００Ｄａ的肝素的相對比例。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本方面涉及制備極低分子量肝素組合物的方法。技術背景肝素是一類具有抗凝性質的硫酸化的葡糖胺聚糖的名稱。肝素在醫學上廣泛用作醫用介入設備(invasive medical equipment)的涂層劑例如導管和 植入體的涂層劑，以及治療劑和預防劑。此外，已經將肝素與體外循環血 液透析一起使用，作為化療藥物和抗炎藥物的助劑，作為生長因子的調節劑，并且用于治療血液動力學紊亂(haemodynamoic disorder)、 先兆子癇 (pre-eclampsia)、腸炎疾病(inflammator bowel disease)、癌癥(cancer)、,爭月永血 計全疾病(venous thromboembolic)、 不穩-定的冠月永局部擊夾血疾病(unstable coronary ischemic disease)牙口急、寸生月S血管局吾卩在夾血(acute cerebravascular ischemia)。當前，哺乳動物的組織尤其是來自豬和羊的組織是市售肝素的 一般來 源。雖然以前最常見的來源是牛肺，但現在最常見的來源是豬腸。肝素具有聚合結構，因而肝素組合物通常包含分子量通常為5 kDa至 40 kDa的肝素(例如參見Mulloy d a/., Thromb. Haemost. 84: 1052 -1056(2000))。分子量范圍如此廣的肝素通常是指未分級肝素(unfractionated heparin, UFH)。如當前商業上所使用的那樣，UFH的分子量通常地為5 kDa 至40kDa。近年來，人們對低分子量肝素(LMWH)即包含低分子量(通常小 于8kDa)肝素的物質的用途非常感興趣。可通過多種方法例如通過借助于化學裂解或酶j足分裂(enzymatic cleavage)的分級或解聚，例如通過亞硝酸解聚或肝素酶消化，由天然未分級 肝素制備LMWH。當前可得到的LMWH由豬的肝素制備。LMWH的效力 通常為抗Xa因子活性為至少70單位/mg,而抗Xa因子活性與抗IIa因子 活寸生的比{直為至少 1.5(參見 European Pharmacopoeia Commission. Pharmeuropa 1991: 3: 161 - 165)。相對于標準的未分級肝素(UFH)， LMWH具有以下幾個優點它更好 地被吸收，并且可以進行皮下給藥；在血流中保留更長的時間；具有更可 預測的臨床響應；可能引起更少的與UFH有關的不利副作用例如出血過多、 血小板數量偏低、骨質疏松和刺激注射部位。盡管LMWH的價格要高得多， LMWH的這些好處使得越來越多的醫生優先使用LMWH而不是UFH。然而，鑒于認識到可能存在屬間交叉病毒(cross-species viral)和朊病毒 感染，對源自哺乳動物的UFH或LMWH的使用越來越關注。人們越來越 熱衷于極低分子量肝素(VLMWH)的合成產品。因而，可以利用分子量為約 1.7 kDa的最小五聚結構，以合成的方式制備具有生物活性的肝素。如當前可得到的那樣，合成的VLMWH可以以Arixtra 從 Sanofi-Synthelabo 4尋至l], 或以、Synthetic Heparin 乂人Alchemia 4尋至U 。然而，這些解聚或合成方法的使用使LMWH和合成肝素的制備變得復 雜，并且使終產品相對昂貴，因而使其更少為缺乏大量資金的健康機構所 使用。因而，需要較簡單并且較廉價的途徑來獲得有效LMWH或VLMWH。
技術實現思路
我們發現，從海洋動物尤其是魚類提取的肝素天然地具有高含量的 LMWH，并且令人驚奇地具有高含量的極低分子量肝素(VLMWH)即分子量 小于3 kDa的肝素。在WO 02/076475中，描述了海洋肝素(marine heparin)的提取，其內容 在此引入作為參考。因此發現，來自豬、牛和鮭魚鰓及廢物的未分級肝素的LMWH和 VLMWH的含量如下表所示表1: UFH的LMWH和VLMWH* *的含量<table>table see original document page 4</column></row><table>高抗凝血酶親和力的VLMWH含量，使用來自Diagnostica Stago，Asnieres, France的Stachrom Heparin Kit觀、J定*" 來自LEO Pharma AS如上所示，上表所列的海洋肝素的VLMWH含量是對純化的牛抗凝血酶具有高親和力的VLMWH的含量。低親和力的VLMWH也可能存在，并且可能有助于產品的抗凝血作用。與LMWH優于UFH的原因相同，VLMWH優于LMWH。因而，尤其希望VLMWH具有延長的血液半衰期、減少的副作用(例如血小板減少)和提高的活性。我們尤其發現，對于海洋LMWH,分子量為1至3 kDa的肝素部分的 抗Xa因子活性比分子量為3至8kDa的肝素部分高至少20%。而且，在l 至3 kDa的范圍內，單一分子量的部分的抗Xa因子活性可以高至卯U/mg。因此，我們提出將海洋肝素用作制備VLMWH的原料。海洋肝素可以 從魚類或貝類廢物提取。而且，由于VLMWH的含量如此之高，所以無需 進行解聚，因而可以節約色鐠和過濾技術的使用(對于哺乳動物的UFH,情 況不是如此)。然而，如果需要的話，可以進行解聚。因此，本專利技術一個方面提供用于制備VLMWH組合物的方法，相對于 總肝素含量，該VLMWH組合物的VLMWH含量為至少10wt%，優選至少 15wt%，更優選至少20wt%,尤其是至少25wt°/。，更加尤其是至少30wt。/。(例 如至多100wt%,更典型地至多80wt%,例如至多30wt%),所述方法包括 以色語、酶或化學的方式或通過過濾，減小肝素組合物中分子量高于8000 Da(尤其是分子量高于3000Da)的肝素的相對比例，所述肝素組合物從非哺 乳類的、具有血管的海洋動物優選地是魚類或貝類提取，更優選在去除用 作例如人們食物之后的肌肉組織由來自所述動物的廢物提取。以色i普、光i普的方式或^f吏用i式劑盒(test kit)如上述的Stachrom Heparin Kit,可以對所制備的組合物中的VLMWH含量進行評價。非哺乳類的海洋動物包括淡水及咸水魚類和貝類。用作哺乳動物食物來源或用作魚粉(fish meal)、魚餅(fish food)和魚油原 料的魚類是優選的。特別優選使用養殖的魚類。合適的魚類的實例包括 鯉魚(carp)、魚巴魚(barbell)和其它鯉科之魚(cyprinid);鱈魚(cod)、狗鱈(hake)、 黑線鱈(haddock);鰈魚(flounder);大比目魚(halibut);鰨魚(sole);鯡魚(herring); 沙丁魚(sardine);魚齊魚(anchovy);鰺魚(jack);纟甾魚(mullet); 竹刀 魚(saury); 績魚(mackerel); ^丈魚(snoek); 帶魚(cutlass fish);魚由魚(red fish); 妒魚(bass);鰻魚(eel)(例如河鰻(river eel)、康吉鰻(conger)等)；匙吻鱘(paddle fish);羅非本文檔來自技高網...

【技術保護點】
制備極低分子量肝素組合物的方法，其中所述極低分子量肝素組合物中極低分子量肝素的含量相對于總肝素含量為至少１０ｗｔ％，所述方法包括：　　　　以色譜或化學的方式或通過過濾，減小分子量高于８０００Ｄａ的肝素在從非哺乳類的、有血管的海洋動物提取的肝素組合物中的相對比例。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：拉格納弗倫格斯拉德，奧利R奧迪加德，
申請(專利權)人：環境和生物科學大學，
類型：發明
國別省市：NO[挪威]