抗?B7?H4抗體及免疫綴合物制造技術

本發明專利技術提供抗?B7?H4抗體及免疫綴合物以及其使用方法。

B7 anti H4 antibody and immune conjugates

The present invention provides anti B7 antibodies and immune H4 conjugates and methods of use thereof.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】本申請主張2014年9月12日申請之美國臨時申請第62/049,701號之優先權，該臨時申請以全文引用的方式并入本文中以達成任何目的。序列表本申請是與電子格式的序列表一起提交的。該序列表以2015年9月5日創建的題目為“2015-09-11_01146-0038-00PCT_Sequence_Listing_ST25.txt”的文件提供，其大小為200,604個字節。通過援引將該電子格式的序列表中的信息完整收入本文。專利
本專利技術關于抗-B7-H4抗體及免疫綴合物以及其使用方法。專利技術背景B7-H4為I型跨膜蛋白且為提供輔助信號與T細胞受體抗原信號一起之蛋白質B7超家族一員。B7-H4為T細胞功能之負調控劑且T細胞之接合抑制其生長、細胞因子分泌及細胞毒性。小鼠中B7-H4之消除不影響免疫細胞穩態且無自體免疫征象。Zhu等人,Blood,113(8):1759-1767(2009)；Suh等人,MolecularandCellularBiology,26(17):6403-6411(2006)。B7-H4之受體未知且未鑒別。人B7-H4為282個氨基酸之蛋白質(包括氨基端信號序列)，其中在氨基端信號序列切割后預測約227個氨基酸在細胞外間隙中。B7-H4包含Ig樣V結構域、Ig樣C結構域、跨膜結構域及短胞質尾。三重陰性乳腺癌(TNBC)占所有乳腺癌報導病例不到20％，且對臨床醫師而言，仍然為重大挑戰。因為此等腫瘤對激素受體(ER及PR)及人表皮生長因子受體2(Her2)非陽性，所以TNBC患者不適合已有效治療大部分彼等受體陽性乳腺癌的使用ER/PR/Her2受體拮抗劑之靶向療法。基底樣及富含Her2之兩種其他乳腺癌亞型不大可能表達ER或PR且大部分基底樣癌癥亦為Her2陰性的。雖然TNBC與基底樣均缺乏ER/PR及Her2表達，但僅僅80％TNBC顯示與侵襲性基底樣亞型相關之分子型態。出于此原因，TNBC及基底樣視為不同亞型，但具有重迭之特征。TNBC及基底樣具有侵襲性不如其他之各種組織學亞型(分泌性、腺樣囊性、髓性、侵襲性導管及化生性)，但整體上大部分與早期發作及快速進展相關。一旦疾病變成轉移性，自復發至死亡之中值時間比乳腺癌其他形式短得多。TNBC之當前治療庫包括蒽環霉素(anthracycline)、紫杉烷(taxane)、鉑劑及使用生物試劑之臨床試驗。然而，尚無TNBC管理之公認標準照護且此等患者之預后仍然不良。靶向TNBC之方法已限于尋找藉由抑制DNA修復(Chk1、Chk2PARP)、血管生成(VEGF及VEGA)、EGFR、PI3K/Akt/mTor及Src信號傳導路徑來侵襲癌癥之秘密途徑。幾種靶向方法包括雄激素受體，其在超過70％乳腺癌中表達；及FGFR，據報導其在4％TNBC中擴增。迄今為止，治療TNBC尚無證實之分子標靶。B7-H4為能夠經由其共抑制信號以及T細胞受體對抗原依賴性信號傳導下調免疫系統之B7家族一員。B7-H4在正常人組織中很少表達，但在包括女性生殖系統癌癥(乳腺癌、卵巢癌及子宮內膜癌)之無數人癌癥中高度過度表達。據報導B7-H4之流行率在構成原發性(約95％)及轉移性乳腺癌(約97％)之侵襲性導管及小葉癌中為高的。雖然B7-H4染色增加與陰性PR及Her2狀態相關，但表達與腫瘤級別或階段無關。除彼等類型乳腺癌中高比例B7H4染色細胞之外，浸潤性淋巴球數目亦伴隨降低。近來，在肺部轉移性乳腺癌之B7-H4基因剔除模型中，作者報導B7-H4-/-小鼠具有較少肺腫瘤結，且展示與野生型小鼠相比，對腫瘤攻擊增強之存活及記憶反應。此歸因于結合B7-H4-Ig融合蛋白之腫瘤相關嗜中性白血球對CD4及CD8細胞之免疫抑制作用。此亦可解釋為何SCID小鼠中植入之過度表達B7-H4之SKOV3細胞比野生型SKOV3細胞更具侵襲性地生長。此外，展示在SKBR3細胞中B7-H4mRNA及蛋白質之基因敲低導致增加的胱天蛋白酶活性及細胞凋亡。總體而言，存在足夠證據確保研究B7-H4為乳腺癌之分子標靶。在本領域中需要靶向B7-H4之藥劑，以診斷及治療B7-H4相關病癥，諸如癌癥。本專利技術實現此需要且提供其他益處。專利技術概述本專利技術提供抗-B7-H4抗體及免疫綴合物以及其使用方法。在一些實施方案中，提供結合B7-H4之分離抗體，其包含：(a)(i)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(ii)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3，及(iii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2；或(b)(i)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3，(ii)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3，及(iii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3；或(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3。在一些實施方案中，該抗體包含SEQIDNO:53之重鏈框架FR3序列。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(b)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含SEQIDNO:47之輕鏈框架FR3序列。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)與SEQIDNO:38之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VH序列；(b)與SEQIDNO:126之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VL序列；或(c)與SEQIDNO:127之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VH序列；或(d)如(a)中之VH序列及如(b)中之VL序列；或(e)如(c)中之VH序列及如(b)中之VL序列。在一些實施方案中，該抗體包含SEQIDNO:38或127之VH序列。在一些實施方案中，該抗體包含SEQIDNO:126之VL序列。在一些實施方案中，提供結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含(a)SEQIDNO:38之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列；或(b)SEQIDNO:127之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列。在一些實施方案中，提供結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；或(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種結合B7?H4之分離抗體，其中該抗體包含：(a)(i)包含SEQ?ID?NO:128之氨基酸序列之HVR?H3，(ii)包含SEQ?ID?NO:129之氨基酸序列之HVR?L3，及(iii)包含SEQ?ID?NO:40之氨基酸序列之HVR?H2；或(b)(i)包含SEQ?ID?NO:41之氨基酸序列之HVR?H3，(ii)包含SEQ?ID?NO:129之氨基酸序列之HVR?L3，及(iii)包含SEQ?ID?NO:40之氨基酸序列之HVR?H2。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.09.12 US 62/049,7011.一種結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(ii)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3，及(iii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2；或(b)(i)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3，(ii)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3，及(iii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2。2.如權利要求1之抗體，其中該抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3；或(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，及(iii)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3。3.如權利要求1或權利要求2之抗體，其進一步包含SEQIDNO:53之重鏈框架FR3序列。4.如前述權利要求中任一項之抗體，其包含(a)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(b)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(c)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3。5.如前述權利要求中任一項之抗體，其包含SEQIDNO:47之輕鏈框架FR3序列。6.如前述權利要求中任一項之抗體，其中該抗體包含(a)與SEQIDNO:38之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VH序列；(b)與SEQIDNO:126之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VL序列；或(c)與SEQIDNO:127之氨基酸序列具有至少95％序列同一性之VH序列；或(d)如(a)中之VH序列及如(b)中之VL序列；或(e)如(c)中之VH序列及如(b)中之VL序列。7.如前述權利要求中任一項之抗體，其包含SEQIDNO:38或127之VH序列。8.如前述權利要求中任一項之抗體，其包含SEQIDNO:126之VL序列。9.一種結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含(a)SEQIDNO:38之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列；或(b)SEQIDNO:127之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列。10.一種結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；或(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3。11.如前述權利要求中任一項之抗體，其為單克隆抗體。12.如前述權利要求中任一項之抗體，其為人、人源化或嵌合抗體。13.如前述權利要求中任一項之抗體，其為結合B7-H4之抗體片段。14.如前述權利要求中任一項之抗體，其為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。15.如前述權利要求中任一項之抗體，其中該抗體包含一或多個工程改造半胱氨酸氨基酸殘基。16.如權利要求15之抗體，其中該一或多個工程改造半胱氨酸氨基酸殘基位于輕鏈中。17.如權利要求15之抗體，其中該一或多個工程改造半胱氨酸氨基酸殘基位于重鏈中。18.如權利要求17之抗體，其中該抗體在重鏈恒定區中包含至少一個選自A118C及S400C之突變。19.如權利要求16之抗體，其中該抗體在輕鏈恒定區中包含至少一個選自K149C及V205C之突變。20.一種結合B7-H4之分離抗體，其中該抗體包含(a)SEQIDNO:132之重鏈序列及SEQIDNO:134之輕鏈序列；或(b)SEQIDNO:133之重鏈序列及SEQIDNO:134之輕鏈序列；或(c)SEQIDNO:130之重鏈序列及SEQIDNO:140之輕鏈序列；或(d)SEQIDNO:130之重鏈序列及SEQIDNO:141之輕鏈序列；或(e)SEQIDNO:131之重鏈序列及SEQIDNO:140之輕鏈序列；或(f)SEQIDNO:131之重鏈序列及141之輕鏈序列；或(g)SEQIDNO:144之重鏈序列及SEQIDNO:142之輕鏈序列；或(h)SEQIDNO:144之重鏈序列及SEQIDNO:143之輕鏈序列；或(i)SEQIDNO:137之重鏈序列及SEQIDNO:138之輕鏈序列；或(j)SEQIDNO:130之重鏈序列及SEQIDNO:145之輕鏈序列；或(d)SEQIDNO:130之重鏈序列及SEQIDNO:146之輕鏈序列；或(e)SEQIDNO:131之重鏈序列及SEQIDNO:145之輕鏈序列；或(f)SEQIDNO:131之重鏈序列及146之輕鏈序列；或(g)SEQIDNO:144之重鏈序列及SEQIDNO:147之輕鏈序列；或(h)SEQIDNO:144之重鏈序列及SEQIDNO:148之輕鏈序列。21.一種雙表位抗體，其包含第一半抗體及第二半抗體，其中該第一半抗體包含結合B7-H4之第一表位之第一VH/VL單元，且其中該第二半抗體包含結合B7-H4之第二表位之第二VH/VL單元。22.如權利要求21之雙表位抗體，其中該第一表位或該第二表位為整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位。23.如權利要求21或權利要求22之雙表位抗體，其中該第一表位或該第二表位不在B7-H4Ig-V結構域內或不完全在含有B7-H4Ig-V之結構域內。24.如權利要求23之雙表位抗體，其中該第一表位在整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內且該第二表位不在B7-H4Ig-V結構域內或不完全在含有B7-H4Ig-V之結構域內；或其中該第一表位不在B7-H4Ig-V結構域內或不完全在含有B7-H4Ig-V之結構域內，且該第二表位在整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內。25.如權利要求21至24中任一項之雙表位抗體，其中該第一表位及該第二表位各獨立地選自：a)在整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位；b)在整個或一部分含有B7-H4Ig-C之結構域內的表位；以及c)在整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位。26.如權利要求25之雙表位抗體，其中該含有B7-H4Ig-V之結構域具有SEQIDNO:73之氨基酸29-157之序列。27.如權利要求25或權利要求26之雙表位抗體，其中含有B7-H4Ig-C之結構域具有SEQIDNO:73之氨基酸158-250之序列。28.如權利要求21至27中任一項之雙表位抗體，其中：a)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-C之結構域內的表位；或b)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位；或c)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-C之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位；或d)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-C之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位；或e)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位；或f)該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-C之結構域內的表位。29.如權利要求28之雙表位抗體，其中該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位；或其中該第一半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V及Ig-C之結構域內的表位，且該第二半抗體結合整個或一部分含有B7-H4Ig-V之結構域內的表位。30.如權利要求21至24中任一項之雙表位抗體，其中該第一半抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；(c)SEQIDNO:38之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列；或(d)SEQIDNO:127之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列。31.如權利要求21至24中任一項之雙表位抗體，其中該第二半抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:128之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；(b)(i)包含SEQIDNO:39之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:40之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:41之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:42之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:43之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:129之氨基酸序列之HVR-L3；(c)SEQIDNO:38之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列；或(d)SEQIDNO:127之VH序列及SEQIDNO:126之VL序列。32.如權利要求21至24及31中任一項之雙表位抗體，其中該第一半抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:58之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:59之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:60之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:61之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:62之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:63之氨基酸序列之HVR-L3；或(b)SEQIDNO:56之VH序列及SEQIDNO:55之VL序列。33.如權利要求21至24及30中任一項之雙表位抗體，其中該第二半抗體包含：(a)(i)包含SEQIDNO:58之氨基酸序列之HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:59之氨基酸序列之HVR-H2，(iii)包含SEQIDNO:60之氨基酸序列之HVR-H3，(iv)包含SEQIDNO:61之氨基酸序列之HVR-L1，(v)包含SEQIDNO:62之氨基酸序列之HVR-L2，及(vi)包含SEQIDNO:63之氨基酸序列之HVR-L3；或(b)SEQIDNO:56之VH序列及SEQIDNO:55之VL序列。34.如權利要求21至33中任一項之雙表位抗體，其中該抗體為IgG1或IgG4抗體。35.如權利要求21至34中任一項之雙表位抗體，其中該第一半抗體含有包含節突變之第一重鏈恒定區且第二重鏈含有包含穴突變之第二重鏈恒定區；或其中該第一半抗體含有包含穴突變之第一重鏈恒定區且第二重鏈含有包含節突變之第二重鏈恒定區。36.如權利要求21至35中任一項之雙表位抗體，其中該抗體為IgG1抗體且其中該節突變包含T366W突變。37.如權利要求21至36中任一項之雙表位抗體，其中該抗體為IgG1抗體且其中該穴突變包含至少一個、至少兩個或三個選自T366S、L368A及Y407V之突變。38.如權利要求21至35中任一項之雙表位抗體，其中該抗體為IgG4抗體且其中該節突變包含T366W突變。39.如權利要求21至35中任一項之雙表位抗體，其中該抗體為IgG4抗體且其中該穴突變包含至少一個、至少兩個或三個選自T366S、L368A及Y407V突變之突變。40.如權利要求21至35中任一項之雙表位抗體，其中：a)該第一半抗體包含SEQIDNO:159或163之重鏈序列及SEQIDNO:145或146之輕鏈序列；b)該第一半抗體包含SEQIDNO:160或164之重鏈序列及SEQIDNO:145或146之輕鏈序列；c)該第一半抗體包含SEQIDNO:161或165之重鏈序列及SEQIDNO:147或148之輕鏈序列；d)該第一半抗體包含SEQIDNO:162或166之重鏈序列及SEQIDNO:147或148之輕鏈序列；e)該第二半抗體包含SEQIDNO:159或163之重鏈序列及SEQIDNO:145或146之輕鏈序列；f)該第二半抗體包含SEQIDNO:...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S·R·利翁，A·波爾森，P·波拉基斯，Y·吳，WC·梁，R·法爾斯坦，
申請(專利權)人：基因泰克公司，
類型：發明
國別省市：美國;US