麥冬多糖MDG－1及其分離方法和應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及具有抗心肌缺血作用的麥冬多糖ＭＤＧ－１及其方法和應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)公開的經(jīng)分離純化獲得的麥冬多糖ＭＤＧ－１是分子量為５０００的β－Ｄ－果聚糖，以２→１連接的呋喃型果糖為主，平均每２．８?jìng)€(gè)主鏈基上有一個(gè)Ｆｒｕｆ（２→６）Ｆｒｕｆ（２→分支），該多糖的還原端與α－Ｄ－Ｇｌｃ相連。本發(fā)明專利技術(shù)公開的麥冬多糖ＭＤＧ－１，抗心肌缺血作用顯著，是一種具有藥用價(jià)值的活性多糖。（*該技術(shù)在2023年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及中藥活性成分及提取分離方法，具體涉及具有抗心肌缺血作用的麥冬多糖MDG-1及其分離方法和應(yīng)用。但目前對(duì)麥冬多糖僅停留在有效部位的提取，尚未有分離到均一分子量的活性多糖。本專利技術(shù)公開的經(jīng)分離純化獲得的麥冬多糖MDG-1是分子量為5000的β-D-果聚糖，以2→1連接的呋喃型果糖為主，平均每2.8個(gè)主鏈基上有一個(gè)Fruf(2→6)Fruf(2→分支)，該多糖的還原端與α-D-Glc相連。本專利技術(shù)所要解決的另一技術(shù)問題是公開上述麥冬多糖MDG-1的提取分離方法。本專利技術(shù)公開的麥冬多糖MDG-1的提取分離方法包括下列步驟1.麥冬多糖的提取取干燥麥冬塊根，壓扁用5-6倍量70％-95％乙醇回流3次，棄之，藥渣水提2-3次，水提液減壓濃縮至0.5-1g/ml，加入75％-95％乙醇至含醇量達(dá)60％-80％，靜置過夜，傾去上清液，沉淀重復(fù)醇沉1次，冷凍干燥，得淡黃色麥冬多糖粉末，得率20％左右；2.麥冬多糖的超濾分離麥冬總多糖，用水稀釋15倍，10000分子量膜超濾，壓力為3.5大氣壓，超濾液70℃濃縮后，冷凍干燥。3.麥冬多糖的純化取麥冬多糖2g，少量水溶解，上DEAE SepharoseFF柱，水、0.1-4mol Nacl梯度洗脫，蒽酮-硫酸法在線檢測(cè)，收集水洗部分峰位，冷凍干燥后，水溶解上SephadexG50柱，水洗脫，合并峰位，冷凍干燥，再上SephadexG25柱，水洗脫，合并峰位，冷凍干燥，得到白色粉末，即為麥冬多糖MDG-1。對(duì)用本專利技術(shù)提取方法獲得的麥冬多糖MDG-1采用高效液相法進(jìn)行純度鑒定色譜條件SHODEX KS802色譜柱，流動(dòng)相為水，流速1ml/min，柱溫80℃，檢測(cè)器為ELSD。多糖用適量水溶解，進(jìn)樣，呈單一對(duì)稱峰，說明該組分為分子量均一的多糖。見圖1。對(duì)用本專利技術(shù)提取方法獲得的麥冬多糖MDG-1進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定MDG-1經(jīng)純度鑒別，證明已是單一組成，可以進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。MDG-1經(jīng)全水解，樣品只含一種單糖，即果糖。IR中933-1及820-1兩個(gè)果聚糖特有的吸收峰，也證明該多糖為一果聚糖。從13CMNR中103-104ppm異頭碳信號(hào)證明該多糖為β構(gòu)型，從甲基化分析中可得知該多糖是2→1及2→6連接的果聚糖，這種呋喃型的連接方式有13C及1HNMR及過碘酸鹽氧化反應(yīng)及Smith降解中得到進(jìn)一步證實(shí)。上述分析證明MDG-1為β-D-果聚糖，以2→1連接的呋喃型果糖為主，平均每2.8個(gè)主鏈基上有一個(gè)Fruf(2→6)Fruf(2→分支)。該多糖的還原端可能與α-D-Glc相連。本專利技術(shù)所要解決的再一技術(shù)問題是公開上述麥冬多糖MDG-1在制備治療抗心肌缺血藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)MDG-1多糖可作為活性成分與藥用輔料制得抗心肌缺血的藥物，其劑型可包括各類醫(yī)學(xué)上可接受的藥物劑型。用含本專利技術(shù)方法制得的MDG-1多糖62％的注射劑進(jìn)行有關(guān)藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用心電圖ST段位移值作為指標(biāo)，觀察麥冬多糖注射液對(duì)垂體后葉素誘發(fā)大鼠冠狀動(dòng)脈痙攣的作用；通過應(yīng)用心功能(LVSP、LVDP、LVEDP、±LVdp/dt)，血壓和心率參數(shù)(SAP、DAP、MAP、HR)，血清酶肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)和氧自由基如超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，心臟NBT染色所測(cè)定心肌梗死面積，HE染色的心臟形態(tài)學(xué)等作為指標(biāo)，觀察麥冬多糖注射液對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致大鼠急性心肌缺血(梗塞)的作用。1材料與方法1.1垂體后葉素誘發(fā)大鼠冠狀動(dòng)脈痙攣實(shí)驗(yàn)健康、雄性的SD種大鼠78只(體重243±19g)預(yù)先給藥，給藥分為以下各組空白對(duì)照組腹腔注射生理鹽水8ml/kg，15min后麻醉，檢測(cè)心電圖。陽性對(duì)照組腹腔注射硝酸甘油(廣州明興制藥廠，批號(hào)000601)10mg/kg，15min后麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(po)大劑量組預(yù)先灌胃麥冬多糖注射液3天，1g/kg，每天1次，末次給藥后1h麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(po)中劑量組預(yù)先灌胃麥冬多糖注射液3天，0.3g/kg，每天1次，末次給藥后1h麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(po)小劑量組預(yù)先灌胃麥冬多糖注射液3天，0.1g/kg，每天1次，末次給藥后1h麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(iv)大劑量組尾靜脈注射麥冬多糖注射液50mg/kg，給藥后10min麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(iv)中劑量組尾靜脈注射麥冬多糖注射液15mg/kg，給藥后10min麻醉，檢測(cè)心電圖。麥冬多糖注射液(iv)小劑量組尾靜脈注射麥冬多糖注射液5mg/kg，給藥后10min麻醉，檢測(cè)心電圖。動(dòng)物腹腔注射25％烏拉坦(上海曹楊第二化工廠，批號(hào)1998422)1.6g/kg麻醉，接肢體二導(dǎo)聯(lián)，穩(wěn)定15mim，應(yīng)用Power/Lab4S型生物信號(hào)處理和分析系統(tǒng)記錄大鼠心電圖，選心電圖無異常者舌下靜脈注射垂體后葉素(上海生化制藥廠，批號(hào)000627)0.5u/kg，記錄注射垂體后葉素后5sec、15sec、30sec、1min、2min、5min、10min時(shí)的心電圖變化，計(jì)算0sec～30sec、30sec～10min時(shí)間段的ST段位移值。1.2冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血(梗塞)實(shí)驗(yàn)1)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)健康、雄性的Wistar種大鼠180只(體重241±20g)，腹腔注射氯胺酮(上海中西藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)010701)80mg/kg麻醉，仰臥位固定，接肢體二導(dǎo)聯(lián)，通過Power/Lab4S型生物信號(hào)處理和分析系統(tǒng)監(jiān)測(cè)心電圖，由口腔插入氣管插管，接通動(dòng)物人工呼吸機(jī)(DH-140B型，浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠)做正壓呼吸(潮氣量10ml/kg，呼吸時(shí)比1∶1，呼吸頻率60次/分)。常規(guī)消毒，折斷第3肋骨，用開胸器撐開胸腔，暴露心臟，剪開心包膜，暴露心臟，迅速將心臟擠出，用5/0號(hào)無創(chuàng)傷性絲線，于肺動(dòng)脈圓錐和左心耳之間，距主動(dòng)脈根部約2mm處結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(假手術(shù)組只穿線，不結(jié)扎)，抽出胸腔內(nèi)空氣，迅速縫合閉胸，恢復(fù)自主呼吸后關(guān)閉動(dòng)物呼吸機(jī)。心電圖ST段顯著抬高表示造模成功。2)實(shí)驗(yàn)分組健康、雄性的Wistar種大鼠隨機(jī)分成以下各組假手術(shù)(sham)組預(yù)先灌胃生理鹽水3天，8ml/kg，每天1次。缺血(AMI)組預(yù)先灌胃生理鹽水3天，8ml/kg，每天1次。普奈洛爾(Pro)組預(yù)先灌胃普奈洛爾(Propranolol，上海辛帕斯制藥有限公司，批號(hào)010221)3天，15mg/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(po)大劑量組預(yù)先灌胃3天麥冬多糖注射液，1g/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(po)中劑量組預(yù)先灌胃3天麥冬多糖注射液，0.3mg/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(po)小劑量組預(yù)先灌胃3天麥冬多糖注射液，0.1mg/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(ip)大劑量組預(yù)先腹腔注射3天麥冬多糖注射液，0.2g/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(ip)中劑量組預(yù)先腹腔注射3天麥冬多糖注射液，0.06g/kg，每天1次。麥冬多糖注射液(ip)小劑量組預(yù)先腹腔注射3天麥冬多糖注射液，0.02g/kg，每天1次。第3天給藥后1h進(jìn)行冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎手術(shù)，造模成功者繼續(xù)給藥3天。第6天給藥后1h通過Power/Lab4S型生物信號(hào)處理和分析系統(tǒng)測(cè)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種麥冬多糖，其特征在于該多糖是分子量為５０００的β－Ｄ－果聚糖，以２→１連接的呋喃型果糖為主，平均每２．８?jìng)€(gè)主鏈基上有一個(gè)Ｆｒｕｆ（２→６）Ｆｒｕｆ（２→分支），該多糖的還原端與α－Ｄ－Ｇｌｃ相連。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐德生，馮怡，沈嵐，林曉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：31[中國|上海]