一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒制造技術

本發明專利技術屬于醫藥生物技術領域，具體涉及一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒。本發明專利技術試劑盒由幽門螺旋桿菌抗原包被板、樣品稀釋液、酶標記液、洗滌液、顯色液、陰性對照品、陽性對照品和終止液組成，其靈敏度高、特異性強、準確度高，且具有良好的穩定性，在室溫條件下有效期為1年，在4℃條件下有效期可達3年，顯著提高了試劑盒的保存期。

Helicobacter pylori IgG antibody enzyme linked immunity diagnostic reagent kit

The invention belongs to the technical field of medicine and biology, in particular to an enzyme-linked immunosorbent diagnostic kit for Helicobacter pylori IgG antibody. The kit of the invention by Helicobacter pylori antigen coated plate, sample dilution, enzyme labeled liquid, washing liquid, color liquid, negative control, positive control and terminating liquid, which has high sensitivity and strong specificity, high accuracy, and has good stability and validity in the room temperature for 1 years, in the period 4 deg.c for up to 3 years, significantly increased the retention period of the box.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥生物
，具體涉及一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒。
技術介紹
幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylor,Hp)是一種革蘭氏陰性螺旋狀桿菌，在胃上皮細胞定居繁殖。感染幽門螺旋桿菌后不僅是慢性胃炎、消化道潰瘍的主要病原菌，也是引起胃癌的危險因子，而且還與胃外許多疾病相關。因此，幽門螺旋桿菌感染的診斷日益引起許多國家和地區的重視。實驗室診斷檢測幽門螺旋桿菌感染的方法很多，包括傳統的用病理標本的直接鏡檢、活體組織細菌培養和尿素酶試驗等，但是這些方法均屬于侵入性創傷性檢查，給患者造成的痛苦大，不易被患者和家屬接受。而近年來的研究熱點多集中在應用免疫學、基因學和蛋白質組學方法等。幽門螺旋桿菌感染后誘發全身細胞免疫和體液免疫反應。幽門螺旋桿菌菌體表面存在的鞭毛以及分泌的多種抗原組分均可激發宿主的免疫答應誘導抗體產生，檢測血清中特異性抗體同樣可以反映病原體的感染情況。幽門螺旋桿菌全身性抗體(即血清抗體)主要為IgG和IgA，而IgM極為少見。IgG常在感染后21d出現，持續時間較長；IgA在不同患者以及同一患者不同感染時期均有很大差異。這些免疫反應對機體無保護作用，但對幽門螺旋桿菌檢測提供了方便，臨床上常將IgG作為血清學檢測幽門螺旋桿菌的主要測定指標。酶聯免疫診斷方法是幽門螺旋桿菌血清學抗體常用的檢測方法，其在幽門螺旋桿菌抗體診斷中表現出了快速、操作簡便、易于標準化合高通量檢驗的優勢。國內外研究者開發了多種幽門螺旋桿菌抗體酶聯免疫診斷試劑盒，在試劑臨床中得到了廣泛的應用。在酶聯免疫診斷試劑盒使用中，試劑盒的穩定性是制約產品市場化的關鍵。現在市場不同廠家生產的幽門螺旋桿菌抗體酶聯免疫診斷試劑盒普遍存在著保存期短、穩定性差等問題，極大限制了幽門螺旋桿菌抗體酶聯免疫診斷試劑盒在臨床上推廣和應用。國外已有多項的有關穩定劑的專利和產品問世，而國內在診斷試盒穩定劑方面尚在探索階段，穩定劑研究成為我國酶聯免疫診斷試劑盒研發必須克服的技術瓶頸。目前，已有針對蔗糖、海藻糖、乳糖、明膠、甘油、山梨醇、谷氨酸鈉、聚乙二醇等穩定劑的研究。
技術實現思路
為了解決現有幽門螺旋桿菌抗體酶聯免疫診斷試劑盒中普遍存在的保存期短、穩定性差等問題，本專利技術提供了一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒，該試劑盒具有良好的穩定性，在室溫條件下有效期為1年，在4℃條件下有效期可達3年，顯著提高了試劑盒的保存期。本專利技術提供的幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒，由幽門螺旋桿菌抗原包被板、樣品稀釋液、酶標記液、洗滌液、顯色液、陰性對照品、陽性對照品和終止液組成；其中，所述幽門螺旋桿菌抗原包被板的制備過程為：將包被用的幽門螺旋桿菌抗原用0.05mol/LpH9.5的碳酸鹽緩沖液液稀釋后，按0.1mL/孔包被到微孔板內，在4～8℃吸附24～26小時后，用0.05mol/LpH9.5的磷酸鹽緩沖液洗板，再用封閉液在4～8℃封閉18～20小時，棄除多余的封閉液，經真空干燥處理后制得幽門螺旋桿菌抗原包被板；所述樣品稀釋液為含0.2g/L的吐溫-20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述酶標記液為含0.5mg/L的辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體、0.1～0.6mg/L的聚乙二醇-200和0.5～1mg/L的殼聚糖的15mmol/LpH8.5磷酸鹽緩沖液；所述陰性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陰性的血清溶液；所述陽性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陽性的血清溶液。進一步的，所述洗滌液為含0.5g/L的吐溫-20的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液。進一步的，所述顯色液為四甲基聯苯胺的甲醇溶液，濃度為0.1mg/mL。進一步的，所述終止液為3mol/LH2SO4溶液。進一步的，所述封閉液為含4～6g/L的甘油、0.5～2g/L的烷基糖苷和1.5g/L的蛋清白蛋白的20mmol/LpH9.0的磷酸鹽緩沖液。所述烷基糖苷具體為碳鏈長度為C8～C10的烷基糖苷。進一步的，所述陰性對照品為在含0.2g/L的吐溫-20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液中，按5％的比例加入陰性血清制成，陰性對照的OD值應小于0.15。進一步的，所述陽性對照品為在含0.2g/L的吐溫-20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液中，加入陽性血清制成，陽性對照的OD值應大于0.80。本專利技術幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒的檢測原理：本試劑盒在微孔板內包被幽門螺旋桿菌抗原，若待測樣本中有幽門螺旋桿菌抗體即可與之結合，再與酶標記的羊抗人IgG抗體反應，形成“抗原-抗體-酶復合物”，酶催化顯色劑顯色，根據顯色程度可判斷幽門螺旋桿菌IgG抗體的有無。另外，本專利技術試劑盒在包被抗原的過程中使用了含有甘油和烷基糖苷的封閉液，在酶標記液中添加了聚乙二醇-200和殼聚糖。甘油和烷基糖苷的組合，以及聚乙二醇-200和殼聚糖的組合作為穩定劑，對包被抗原、酶標抗體起到了很好的保護作用，使包被抗原、酶標抗體的親和力、免疫活性、靈敏度等不降低，從而顯著提高本專利技術試劑盒的保存期。因此，與現有技術相比，本專利技術的優勢在于：本專利技術幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒的靈敏度高、特異性強、準確度高，且具有良好的穩定性，在室溫條件下有效期為1年，在4℃條件下有效期可達3年，顯著提高了試劑盒的保存期，有利于幽門螺旋桿菌抗體酶聯免疫診斷試劑盒在臨床上的推廣和應用。具體實施方式下面將進一步的詳細說明本專利技術。需要指出的是，以下說明僅僅是對本專利技術要求保護的技術方案的舉例說明，并非對這些技術方案的任何限制。本專利技術的保護范圍以所附權利要求書記載的內容為準。在本專利技術中，幽門螺旋桿菌抗原和辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體均可通過商業渠道獲得。C8～C10烷基糖苷(活性物52.0wt％)購自廣州市西陸化工有限公司。殼聚糖(有效物質含量99％)購自西安南斯生物科技有限公司。另外，下列實施例中未注明具體實驗條件和操作的方法，均按照常規方法進行。實施例1、本專利技術幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒本實施例試劑盒由幽門螺旋桿菌抗原包被板(96孔)、樣品稀釋液1瓶、酶標記液1瓶、洗滌液1瓶、顯色液1瓶、陰性對照品1瓶、陽性對照品1瓶和終止液1瓶組成。其中，所述幽門螺旋桿菌抗原包被板的制備過程為：將包被用的幽門螺旋桿菌抗原用0.05mol/LpH9.5的碳酸鹽緩沖液液稀釋后，按0.1mL/孔包被到微孔板內，在4℃吸附24小時后，用0.05mol/LpH9.5的磷酸鹽緩沖液洗板，再用封閉液在4℃封閉18小時，棄除多余的封閉液，經真空干燥處理后制得幽門螺旋桿菌抗原包被板。所述樣品稀釋液為含0.2g/L的吐溫-20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液。所述酶標記液為含0.5mg/L的辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體、0.1mg/L的聚乙二醇-200和0.5mg/L的殼聚糖的15mmol/LpH8.5磷酸鹽緩沖液。所述洗滌液為含0.5g/L的吐溫-20的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液。所述顯色液為四甲基聯本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒，其特征在于，由幽門螺旋桿菌抗原包被板、樣品稀釋液、酶標記液、洗滌液、顯色液、陰性對照品、陽性對照品和終止液組成；其中，所述幽門螺旋桿菌抗原包被板的制備過程為：將包被用的幽門螺旋桿菌抗原用0.05mol/L?pH9.5的碳酸鹽緩沖液液稀釋后，按0.1mL/孔包被到微孔板內，在4～8℃吸附24～26小時后，用0.05mol/L?pH9.5的磷酸鹽緩沖液洗板，再用封閉液在4～8℃封閉18～20小時，棄除多余的封閉液，經真空干燥處理后制得幽門螺旋桿菌抗原包被板；所述樣品稀釋液為含0.2g/L的吐溫?20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/L?pH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述酶標記液為含0.5mg/L的辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體、0.1～0.6mg/L的聚乙二醇?200和0.5～1mg/L的殼聚糖的15mmol/L?pH8.5磷酸鹽緩沖液；所述陰性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陰性的血清溶液；所述陽性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陽性的血清溶液。

【技術特征摘要】
1.一種幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒，其特征在于，由幽門螺旋桿菌抗原包被板、樣品稀釋液、酶標記液、洗滌液、顯色液、陰性對照品、陽性對照品和終止液組成；其中，所述幽門螺旋桿菌抗原包被板的制備過程為：將包被用的幽門螺旋桿菌抗原用0.05mol/LpH9.5的碳酸鹽緩沖液液稀釋后，按0.1mL/孔包被到微孔板內，在4～8℃吸附24～26小時后，用0.05mol/LpH9.5的磷酸鹽緩沖液洗板，再用封閉液在4～8℃封閉18～20小時，棄除多余的封閉液，經真空干燥處理后制得幽門螺旋桿菌抗原包被板；所述樣品稀釋液為含0.2g/L的吐溫-20和0.5g/L酪蛋白的15mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述酶標記液為含0.5mg/L的辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體、0.1～0.6mg/L的聚乙二醇-200和0.5～1mg/L的殼聚糖的15mmol/LpH8.5磷酸鹽緩沖液；所述陰性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陰性的血清溶液；所述陽性對照品為含幽門螺旋桿菌IgG抗體陽性的血清溶液。2.如權利要求1所述的幽門螺旋桿菌IgG抗體酶聯免疫診斷試劑盒，其特征在于，所述洗滌液為含0.5g/...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳立國，鄒偉權，張亞麗，李慶祥，母潤紅，王濤，蘇焱，
申請(專利權)人：廣州華弘生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44