DEF8蛋白及其多肽在治療與預(yù)防癌癥中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種DEF8蛋白及其多肽的用途，屬于蛋白質(zhì)工程與生物醫(yī)藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)的DEF8蛋白的氨基酸序列為如SEQ?ID?NO.2所示或其特異性片段，本發(fā)明專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)DEF8蛋白及其多肽，以及它們與熱休蛋白gp96通過熱擊或自然吸附的方式形成的復(fù)合物能夠預(yù)防和治療包括乳腺癌、肝癌在內(nèi)的腫瘤性疾病，可用于制備用于預(yù)防和治療癌癥的藥物，具有廣闊的應(yīng)用前景。

The use of DEF8 protein and its polypeptide in the treatment and prevention of cancer

The invention provides a DEF8 protein and the use of the polypeptide, belonging to the technical field of protein engineering and biological medicine application. The amino acid sequence of the invention of DEF8 protein such as SEQ ID NO.2 shown or its specific fragments, the invention found DEF8 protein and polypeptide, and the complexes formed with heat shock protein gp96 on adsorption by heat or natural way to prevention and treatment of tumor diseases including breast cancer, liver cancer that can be used for preparing drugs for the prevention and treatment of cancer, and has broad application prospects.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
DEF8蛋白及其多肽在治療與預(yù)防癌癥中的應(yīng)用
本專利技術(shù)涉及蛋白質(zhì)工程與生物醫(yī)藥應(yīng)用
，具體地說，涉及DEF8蛋白及其多肽在治療與預(yù)防癌癥中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)資料統(tǒng)計，乳腺癌發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7-10％，在很多地區(qū)已經(jīng)超過子宮癌，成為嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的腫瘤之一。乳腺癌的發(fā)病與患者的遺傳基因、生活習(xí)慣、常用食物、生育狀況等緊密相關(guān)，不同人種、地域的乳腺癌發(fā)病率有著明顯的區(qū)別。乳腺癌的高發(fā)地區(qū)，主要集中在北美、北歐和大洋洲，尤其白種女性居多。乳腺癌的中發(fā)地區(qū)，集中在南美、南歐和以色列。亞洲則是乳腺癌的低發(fā)地區(qū)。舉例來說，美國白種女性一生乳腺癌發(fā)病率為13.1％，即平均每8-9人就有1人可能會患上乳腺癌，而亞洲女性的乳腺癌發(fā)病率為4-7％。WHO統(tǒng)計，全球每年新發(fā)乳腺癌達(dá)130萬人左右，死亡50萬人左右。在我國北京、上海、天津等大城市的乳腺癌發(fā)病已躍居女性各種癌瘤首位,而且有明顯上升的趨勢。肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌兩種。原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一。在世界范圍內(nèi)男性癌癥患者中，肝癌比例排第六，死亡率排在第二；在女性癌癥患者中，肝癌比例排第七，死亡率排第六。2008年，全世界共有748,300個新增肝癌病例，有695,900例肝癌患者死亡。而這些新增肝癌病例和死亡病例中有一半在中國。肝癌發(fā)生率最高的區(qū)域主要在東亞，東南亞，中非和西非國家。亞洲部分地區(qū)和非洲撒哈拉以南地區(qū)之所以肝癌發(fā)生率較高，可能是因?yàn)檫@些地區(qū)HBV盛行，因?yàn)檫@些地區(qū)8％的居民慢性感染HBV，在發(fā)展中國家60％的肝癌患者感染過HBV。骨髓祖代細(xì)胞差異表達(dá)蛋白8(DifferentiallyexpressedinFDCP8)最早發(fā)現(xiàn)其在造血系統(tǒng)中有差異性的表達(dá)。DEF8蛋白有著廣泛的分布，尤其是在外周血白細(xì)胞中的表達(dá)極高，但是在胸腺和胎肝中幾乎檢測不到其表達(dá)，并且DEF8蛋白巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞分化時表達(dá)顯著下調(diào)。但是關(guān)于DEF8蛋白的功能到目前為止依然不清楚。熱休克蛋白(Heatshockprotein，HSP)是一類在生物進(jìn)化中高度保守且廣泛存在于原核及真核生物中的蛋白質(zhì)。HSP根據(jù)同源程度和分子量大小可分為HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、小分子HSP和泛素等多個亞家族。熱休克蛋白(Heatshockprotein，HSP)gp96屬于HSP90亞家族的成員，該蛋白是細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上含量最豐富的熱休克蛋白。熱休克蛋白gp96蛋白具有多肽結(jié)合特性，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)其能接受來自TAP復(fù)合體的多肽片段，協(xié)助將其組裝至MHCI類分子，遞呈于細(xì)胞膜上。不同組織來源的熱休克蛋白gp96能攜帶有其來源組織內(nèi)特異性表達(dá)的多肽片段。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種能預(yù)防及治療癌癥的靶標(biāo)蛋白及其多肽的應(yīng)用方法。本專利技術(shù)首先提供了一種DEF8蛋白，所述DEF8蛋白的氨基酸序列含有如下：i)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列；或ii)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列自N端起第2位至最后一位氨基酸序列；或iii)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸且具有相同功能的氨基酸序列。本專利技術(shù)提供了上述DEF8蛋白在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)提供了編碼DEF8蛋白的基因，該基因的核苷酸序列含有如下：i)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；或ii)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列；或iii)與SEQIDNO.1所示的核苷酸具有75％及以上同源性的核苷酸序列；或iv)在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO.1所示序列雜交的核苷酸序列；所述嚴(yán)格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。本專利技術(shù)提供了編碼DEF8蛋白的基因在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)提供了含有編碼DEF8蛋白的基因的生物材料，所述生物材料為載體、宿主細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、工程菌、昆蟲或酵母。進(jìn)一步地，本專利技術(shù)提供了上述生物材料在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用。所述藥物為治療或預(yù)防乳腺癌或肝癌的藥物，具有以下至少一種的功能：(1)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的乳腺癌的發(fā)生率；(2)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的肝癌發(fā)生率；(3)減緩或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的生長；(4)減緩或停止已建立的肝癌腫瘤灶的生長；(5)減少或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(6)減少或停止已建立的肝癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(7)誘導(dǎo)產(chǎn)生乳腺癌特異性的CTL細(xì)胞并對乳腺癌細(xì)胞殺傷；(8)誘導(dǎo)產(chǎn)生肝癌特異性的CTL細(xì)胞并對肝癌細(xì)胞殺傷。本專利技術(shù)提供了含有DEF8蛋白或其多肽的藥物。本專利技術(shù)提供了含有DEF8蛋白與熱休克蛋白gp96組成的復(fù)合物或含有DEF8蛋白的多肽與熱休克蛋白gp96組成的復(fù)合物的藥物。所述熱休克蛋白gp96的氨基酸序列含有SEQIDNO.4所述的序列或SEQIDNO.4所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸且具有相同功能的氨基酸序列。所述熱休克蛋白gp96的獲得方式為以下任一：(1)從離體哺乳動物的胎盤組織中提??；(2)將編碼所述熱休克蛋白gp96的核酸分子導(dǎo)入受體中，培養(yǎng)，包括利用酵母、哺乳動物細(xì)胞表達(dá)體系表達(dá)，純化得到。所述離體哺乳動物可為人、鼠來源。所述鼠包括但不限于C57BL/6及BALB/c小鼠。所述復(fù)合物是通過以下方式獲得：(1)將DEF8蛋白或其多肽與熱休克蛋白gp96在體外以自然吸附或熱擊方式形成復(fù)合物；或(2)將編碼DEF8蛋白或其多肽與編碼熱休克蛋白gp96的核酸分子導(dǎo)入受體中，培養(yǎng)、純化獲得復(fù)合物。所述“將編碼DEF8蛋白或其多肽與編碼熱休克蛋白gp96的核酸分子導(dǎo)入受體中”可通過漢遜酵母表達(dá)。所述“將編碼所述熱休克蛋白gp96的核酸分子導(dǎo)入受體中”可通過向受體中導(dǎo)入重組載體實(shí)現(xiàn)；所述重組載體可為將所述熱休克蛋白gp96的編碼基因插入出發(fā)質(zhì)粒得到的重組質(zhì)粒。所述重組載體具體可為重組質(zhì)粒pFastBac1-gp96。所述重組質(zhì)粒pFastBac1-gp96具體可為在質(zhì)粒pFastBac1的多克隆位點(diǎn)插入序列表中SEQIDNO.3所示的DNA分子得到的重組質(zhì)粒。所述重組質(zhì)粒pFastBac1-gp96具體可為將質(zhì)粒pFastBac1的EcoRⅠ和XbaⅠ識別序列間的片段(質(zhì)粒pFastBac1被限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和XbaⅠ切成一個大片段和一個小片段，該DNA為該小片段)替換為SEQIDNO.1所示的DNA分子得到的重組質(zhì)粒。所述受體可為Sf9細(xì)胞。本專利技術(shù)提供了上述DEF8蛋白及其多肽與熱休克蛋白gp96組成的復(fù)合物在制備治療和/或預(yù)防癌癥藥物中的應(yīng)用。所述藥物為治療或預(yù)防乳腺癌或肝癌的藥物，具有以下至少一種的功能：(1)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的乳腺癌的發(fā)生率；(2)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的肝癌發(fā)生率；(3)減緩或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的生長；(4)減緩或停止已建立的肝癌腫瘤灶的生長；(5)減少或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(6)減少或停止已建立的肝癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(7)誘導(dǎo)產(chǎn)生乳腺癌特異性的CTL本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
DEF8蛋白在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用，所述DEF8蛋白其氨基酸序列含有如下：i)SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列；或ii)SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列自N端起第2位至最后一位氨基酸序列；或iii)SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸且具有相同功能的氨基酸序列。

【技術(shù)特征摘要】
1.DEF8蛋白在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用，所述DEF8蛋白其氨基酸序列含有如下：i)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列；或ii)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列自N端起第2位至最后一位氨基酸序列；或iii)SEQIDNO.2所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個氨基酸且具有相同功能的氨基酸序列。2.編碼DEF8蛋白的基因在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用，所述編碼DEF8蛋白的基因的核苷酸序列含有如下：i)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；或ii)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列；或iii)與SEQIDNO.1所示的核苷酸具有75％及以上同源性的核苷酸序列；或iv)在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO.1所示序列雜交的核苷酸序列；所述嚴(yán)格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。3.含有編碼DEF8蛋白的基因的生物材料在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用，所述生物材料為載體、宿主細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、工程菌、昆蟲或酵母；所述編碼DEF8蛋白的基因的核苷酸序列含有如下：i)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；或ii)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列；或iii)與SEQIDNO.1所示的核苷酸具有75％及以上同源性的核苷酸序列；或iv)在嚴(yán)格條件下與SeqIDNO.1所示序列雜交的核苷酸序列；所述嚴(yán)格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。4.如權(quán)利要求1-3任一所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物具有以下至少一種的功能：(1)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的乳腺癌的發(fā)生率；(2)降低化學(xué)物誘導(dǎo)的肝癌發(fā)生率；(3)減緩或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的生長；(4)減緩或停止已建立的肝癌腫瘤灶的生長；(5)減少或停止已建立的乳腺癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(6)減少或停止已建立的肝癌腫瘤灶的轉(zhuǎn)移；(7)誘導(dǎo)產(chǎn)生乳腺癌特異性的CTL細(xì)胞并對乳腺癌細(xì)胞殺傷；(8)誘導(dǎo)產(chǎn)生肝癌特異性的CTL細(xì)胞并對肝癌細(xì)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孟頌東，鄭華國，李楊，
申請(專利權(quán))人：北京熱休生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：北京,11