一種制備麥角硫因的方法技術

本發明專利技術提供一種制備麥角硫因的方法，該方法以蘑菇或其下腳料為原料，經水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液在70～95℃的溫度下提取，得到的提取產物依次經過大孔樹脂和聚酰胺樹脂分離純化，收集洗脫液，濃縮得到麥角硫因提取物。與現有技術相比，本發明專利技術的方法可以制備麥角硫因含量為20～98％的提取物，含量遠高于現有技術中的1～5％。本發明專利技術的方法制備得到的麥角硫因能夠達到產業化生產的要求，為麥角硫因提取物的進一步開發利用奠定了基礎。

【技術實現步驟摘要】
一種制備麥角硫因的方法
本專利技術涉及活性成分制備的
，具體地涉及一種由蘑菇或其下腳料制備麥角硫因的方法。
技術介紹
麥角硫因(巰基組氨酸三甲基內鹽，ergothioneine，簡稱為EGT)是1909年在麥角中發現的一種稀有氨基酸，其分子結構如下所示。麥角硫因是機體內的重要活性物質，但不能由動物機體自身合成，只能從食物中攝取。國外研究表明它在生物體內可起到抗氧化劑作用，具有清除自由基、維持DNA的生物合成、細胞的正常生長及細胞免疫等多種生理功能，可用于戶外護膚產品、防護性的化妝品以及眼科產品的開發，也可作為谷胱甘肽理想的替代品，現在已漸漸得到更多人的關注。已有實驗證明，人和動物攝入麥角硫因是安全的，且美國已有將麥角硫因作為原料開發的緩解關節疼痛，緩解炎癥的膳食補充劑上市銷售。麥角硫因最早在1909年從一種真菌Clavicepspurpurea中被發現，后來發現在牛肝菌、蘑菇、毛頭鬼傘等食用菌中能產生麥角硫因。目前麥角硫因的獲得方式主要有化學合成和從天然原料的分離兩類。但是化學合成的麥角硫因由于存在副產物等其他雜質而限制了其在食品、藥品與保健品領域中的應用。對于采用天然來源提取的方法，專利文獻報道的方法大都是利用氧化鋁柱進行分離，然后通過高效液相制備分離。專利申請CN104774182A報道一種從蕈菌菌絲體發酵液中分離麥角硫因的方法，該專利申請中的方法利用超濾膜進行超濾，然后通過HILIC色譜填料進行純化。采用現有的天然原料提取的方法存在的問題是通過現有的提取方法得到的麥角硫因提取物含量很低，一般只有1～5％左右，很難獲得高含量的產品，也很難實現大規模生產。另外，蘑菇生產過程中產生的大量下腳料無法利用，造成了極大的浪費。因此，由天然原料制備麥角硫因已成為研究的新熱點，提出一種高效的麥角硫因制備方法具有重要的經濟和社會意義。
技術實現思路
針對現有技術存在的問題，本專利技術提供了一種制備麥角硫因的方法，所述方法包括以下步驟：(1)以蘑菇為原料，向所述原料中加入水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液，加熱提取，過濾，將濾液合并，降溫至50℃以下，除去沉淀，保留水提取液的上清液或將乙醇水溶液提取得到的上清液減壓濃縮，得到提取產物；(2)將步驟(1)得到的提取產物采用大孔樹脂分離吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到大孔吸附樹脂分離產物；(3)將步驟(2)得到的大孔吸附樹脂分離產物采用聚酰胺樹脂吸附，先后用水和5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到麥角硫因提取物。在本專利技術步驟(1)中，如果采用乙醇水溶液提取，則乙醇水溶液的濃度以5～30％為宜。由于麥角硫因易溶于水，不易溶于乙醇，濃度過高會導致麥角硫因在高醇溶液中的溶解效果不佳，麥角硫因難以從原料中提取出來。除去沉淀時的溫度如果高于50℃，許多雜質無法完全沉淀下來，導致提取效果不佳。另外，為了便于后續的大孔樹脂分離操作，采用乙醇水溶液提取時，需要將乙醇除去后再作大孔樹脂分離。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)中，所述蘑菇為榛蘑、金針菇、口蘑、雞腿菇、海鮮菇、白玉菇柄、杏鮑菇、白蘑、猴頭菇、平菇、靈芝、硫磺菌或薄皮纖孔菌中的一種或多種；更優選地，所述蘑菇為蘑菇的菌柄或菌傘、或蘑菇采摘后的下腳料。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)中，向所述原料中加入按原料質量計2～5倍質量的水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)中，所述加熱提取的溫度為70～95℃；更優選地，所述加熱提取進行1～3次，每次1～5小時。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)中，所述過濾采用80～120目的濾網進行。優選地，在本專利技術方法的步驟(2)中，所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD300型、X-5型、NKA-Ⅱ型、D101型或816型。優選地，在本專利技術方法的步驟(2)中，所述梯度洗脫采用以下任一組乙醇水溶液進行：(a)5％、15％、25％、35％和50％；(b)10％、30％和50％；(c)5％、15％、30％和50％。優選地，在本專利技術方法的步驟(3)中，所述梯度洗脫采用體積比百分比濃度為(a)5％、15％、35％和50％或(b)10％、20％、30％和50％的乙醇水溶液進行。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)、(2)或(3)中，所述減壓濃縮的條件為：溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa。減壓濃縮時，溫度過高易導致產品被破壞，不利于保證產品品質的穩定。優選地，在本專利技術方法的步驟(1)中，得到的提取產物的糖度為2～40。優選地，在本專利技術方法的步驟(2)中，得到的大孔吸附樹脂分離產物的糖度為10～40。優選地，在本專利技術方法的步驟(3)中，得到的麥角硫因提取物的糖度為10～20。各個步驟中的糖度需要適當控制，因為糖度太低會影響后面的分離操作。優選地，本專利技術所述的方法還包括步驟(4)：將所述步驟(3)制備的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱吸附，然后用水和體積百分比濃度為5～35％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，得到糖度為10～20的麥角硫因濃縮產物。優選地，在該步驟中，所述梯度洗脫采用以下任一組乙醇水溶液進行：(a)5％、10％、20％和35％；(b)5％、10％、15％、20％和35％；(c)5％、10％、15％、20％、25％和35％；(d)10％、15％、20％、25％和35％；(e)10％、15％、20％和25％；(f)10％、15％、25％和35％。更優選地，所述減壓濃縮在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下進行。優選地，本專利技術的方法還包括步驟(5)：將步驟(4)制備的麥角硫因濃縮產物采用SephadexLH-20柱進行層析純化，用體積百分比濃度為5～25％的甲醇水溶液進行等濃度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液減壓濃縮、冷凍干燥，得到麥角硫因。優選地，在該步驟中，所述等濃度洗脫采用體積百分比濃度為5％、10％、15％、20％或25％的甲醇水溶液進行；更優選地，所述減壓濃縮在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下進行。與現有技術相比，本專利技術提供的方法可以制備麥角硫因含量為20～98％的提取物，所得提取物能夠達到工業化生產的要求，為麥角硫因提取物的進一步開發利用奠定了基礎。同時，本專利技術的方法中使用的原料來源于多種真菌蘑菇品種以及蘑菇的多個部位，例如榛蘑、金針菇、口蘑、雞腿菇、海鮮菇、白玉菇柄、杏鮑菇、白蘑、猴頭菇、平菇、靈芝、硫磺菌、薄皮纖孔菌等菌種的菌柄、菌傘以及這些蘑菇采摘后的下腳料等，都可以作為提取麥角硫因的原料；其中，榛蘑、白蘑、杏鮑菇、雞腿菇、口蘑、海鮮菇和金針菇是提供麥角硫因成分較好的植物原料。通過本專利技術的方法可以大大降低生產成本，減少資源浪費和環境污染，具有巨大的經濟效益。附圖說明以下，結合附圖來詳細說明本專利技術的實施方案，其中：圖1是根據本專利技術實施例4的方法制備得到的麥角硫因的HPLC圖譜；圖2是根據本專利技術實施例4的方法制備得到的麥角硫因的ESI-MS圖譜。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步的說明。實施例1麥角本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種制備麥角硫因提取物的方法，所述方法包括以下步驟：(1)以蘑菇原料，向所述原料中加入水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液，加熱提取，過濾，將濾液降溫至50℃以下，除去沉淀，保留水提取液的上清液或將乙醇水溶液提取得到的上清液減壓濃縮，得到麥角硫因提取產物；(2)將步驟(1)得到的麥角硫因提取產物采用大孔樹脂吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因洗脫液，減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物；優選地，所述梯度洗脫采用以下任一組體積百分比濃度的乙醇水溶液進行：(a)5％、15％、25％、35％和50％；(b)10％、30％和50％；(c)5％、15％、30％和50％；(3)將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物采用聚酰胺樹脂吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到麥角硫因提取物；優選地，所述梯度洗脫采用體積比百分比濃度為(a)5％、15％、35％和50％或(b)10％、20％、30％和50％的乙醇水溶液進行。

【技術特征摘要】
1.一種制備麥角硫因提取物的方法，所述方法包括以下步驟：(1)以蘑菇原料，向所述原料中加入水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液，加熱提取，過濾，將濾液降溫至50℃以下，除去沉淀，保留水提取液的上清液或將乙醇水溶液提取得到的上清液減壓濃縮，得到麥角硫因提取產物；(2)將步驟(1)得到的麥角硫因提取產物采用大孔樹脂吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因洗脫液，減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物；優選地，所述梯度洗脫采用以下任一組體積百分比濃度的乙醇水溶液進行：(a)5％、15％、25％、35％和50％；(b)10％、30％和50％；(c)5％、15％、30％和50％；(3)將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物采用聚酰胺樹脂吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到麥角硫因提取物；優選地，所述梯度洗脫采用體積比百分比濃度為(a)5％、15％、35％和50％或(b)10％、20％、30％和50％的乙醇水溶液進行。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述蘑菇為榛蘑、金針菇、口蘑、雞腿菇、海鮮菇、白玉菇柄、杏鮑菇、白蘑、猴頭菇、平菇、靈芝、硫磺菌或薄皮纖孔菌中的一種或多種；優選地，所述蘑菇為蘑菇的菌柄或菌傘、或蘑菇采摘后的下腳料。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，向所述原料中加入按原料質量計2～5倍質量的水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述加熱提取的溫度為70～95℃；更優選地，所述加熱提取進行1～3次，每次1～5小時。5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述過濾采用80～120目的濾網進行。6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述大孔樹脂的型號...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉成航，劉岱琳，趙艷敏，李長惠，
申請(專利權)人：天津市科曼思特醫藥科技發展有限公司，
類型：發明
國別省市：天津,12