一種治療前列腺癌的CAR?T細胞制劑的制備方法技術

本發明專利技術公開了一種治療前列腺癌的CAR?T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入100?500mg/L的L?谷氨酰胺、15?150mg/L的維生素C、10?20mU/L的胰島素和5?255μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4?6min，離心力為150?250g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為35?39℃，含有4?8％的CO

【技術實現步驟摘要】
一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法
本專利技術涉及生物
，尤其涉及一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法。
技術介紹
嵌合抗原受體是模擬T細胞受體功能的人工受體，由抗原識別結構域(配體或單鏈抗體)和T細胞的一系列信號結構域依次連接而成。利用嵌合抗原受體修飾T細胞能夠將配體或抗體的特異識別作用與T細胞的效應功能聯合起來，進行腫瘤靶向免疫治療。此療法是對人體自身T細胞加以改造后用于治療，相對于放和化療，其毒副作用較弱。由于嵌合抗原受體修的T細胞通過其抗原識別結構域識別腫瘤細胞表面抗原，然后啟動殺傷作用，因此其治療具有靶向性。由于該種T細胞通過其嵌合抗原受體直接識別腫瘤細胞表面抗原，然后通過其信號結構域直接將識別信號傳速至胞內，激活T細胞的殺傷活性，因此可以繞開常規細胞免疫的主要組織相容復合體(MHC)限制性，從而有效克服腫瘤細胞MHC表達量低造成的免疫逃逸，并可以靶向非蛋白質腫瘤抗原。前列腺癌(ProstateCancer，PCa)是常見男性泌尿系統惡性腫瘤，其死亡率已超過肺癌，成為嚴重威脅男性健康第二大惡性腫瘤。雖然早期PCa易治療，生產率高，但是三期、四期PCa死亡率高，且易出現骨轉移。PCa目前的治療方式主要有手術，放療和化療。PCa切除術手術創傷大、術后尿失禁和勃起功能障礙的發生率極高，且手術死亡率亦高；而放療和化療帶來的副作用大，會嚴重影響患者的生活質量，為此我們提出了一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法。
技術實現思路
基于
技術介紹
存在的技術問題，本專利技術提出了一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法。本專利技術提出的一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入100-500mg/L的L-谷氨酰胺、15-150mg/L的維生素C、10-20mU/L的胰島素和5-255μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4-6min，離心力為150-250g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為35-39℃，含有4-8％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1-3的比例混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可制得治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑。優選地，所述S1中，向培養皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、75mg/L的維生素C、15mU/L的胰島素和150μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基。優選地，所述S1中，培養基的PH值7-7.4。優選地，所述S3中，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心5min，離心力為200g，離心后待細胞沉淀后洗滌2次。優選地，所述S4中，擴增培養的天數為7-15天。優選地，所述S3中，離心速率為2000r/min。本專利技術先配置專用的培養基，再采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中，將生理鹽水加入離心管中，將離心管內的溶液離心，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱擴增培養，將慢病毒對T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞，再將人血白蛋白、胰蛋白酶混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可，本專利技術制作簡便，通過CAR-T細胞制劑治療前列腺癌，治療效果顯著，人血白蛋白可以維持CAR-T細胞的活性。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步解說。實施例一本專利技術提出的一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入100mg/L的L-谷氨酰胺、15mg/L的維生素C、10mU/L的胰島素和5μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4min，離心力為150g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為35℃，含有4％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1的比例混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可制得治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑。實施例二本專利技術提出的一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入200mg/L的L-谷氨酰胺、40mg/L的維生素C、12mU/L的胰島素和50μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4.5min，離心力為175g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為36℃，含有5％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1.5的比例混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可制得治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑。實施例三本專利技術提出的一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、70mg/L的維生素C、17mU/L的胰島素和100μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心5min，離心力為200g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為37℃，含有6％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶以1：2的比例混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可制得治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑。實施例四本專利技術提出的一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入300mg/L的L-谷氨酰胺、120mg/L的維生素C、19mU/L的胰島素和200μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心5.5min，離心力為225g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為38℃，含有7％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種治療前列腺癌的CAR?T細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入100?500mg/L的L?谷氨酰胺、15?150mg/L的維生素C、10?20mU/L的胰島素和5?255μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4?6min，離心力為150?250g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為35?39℃，含有4?8％的CO

【技術特征摘要】
1.一種治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1，向培養皿中并依次加入100-500mg/L的L-谷氨酰胺、15-150mg/L的維生素C、10-20mU/L的胰島素和5-255μg/L的血管內皮生長因子，通過氫氧化鈉調節PH值，并加入胎牛血清并過濾除菌，得到新的培養基；S2，采集患者自身的血液，從中分離出T細胞，并將T細胞放入離心管中；S3，將生理鹽水加入S2中的離心管中，將離心管內的溶液離心4-6min，離心力為150-250g；S4，將離心后的T細胞轉移至培養基上，并將培養基放入培養箱，培養箱內的溫度為35-39℃，含有4-8％的CO2，擴增培養；S5，將慢病毒對S4的T細胞進行轉染并擴增培養，獲得CAR-T細胞；S6，將人血白蛋白、胰蛋白酶以1：1-3的比例混合在一起，再加入CAR-T細胞，混勻，即可制得治療前列腺癌的CAR-T細胞制劑。2.根據權利要求1所述的一種治療前列腺...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張同存，胡廣，顧潮江，柳浥時，
申請(專利權)人：武漢波睿達生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：湖北,42