一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法技術

本發明專利技術提供一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法，具體操作步驟為：在玻璃輸液瓶中進行制作培養液體蛹蟲草菌種，然后在超凈工作臺下將裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；將醫用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫用連續可調注射器密閉連接，使玻璃輸液瓶內的液體蛹蟲草菌種通過無菌輸液管流到獸醫用連續可調注射器內，最后通過調整注射器并將針頭扎進蛹體內來實現定量注射接種。該方法不僅能夠提高蛹蟲草生產效率，大大降低生產成本，而且還能夠提高僵化出草率。

Closed and continuous quantitative inoculation method for producing cordyceps militaris

The invention provides a production of Cordyceps militaris closed continuous quantitative inoculation method, the specific steps: making culture liquid of Cordyceps militaris in glass infusion bottle, the bottle and glass infusion bottle filled with liquid of Cordyceps militaris in super clean bench under the open, sealing rubber plug; the medical disposable sterile infusion tube is inserted the rubber plug, the other end is connected with the closed adjustable syringe for veterinary use continuously, so that the glass infusion bottle liquid of Cordyceps militaris by sterile infusion pipe to a veterinary syringe can be adjusted continuously, and finally by adjusting the syringe needle into pupae to achieve quantitative inoculation. The method can not only improve the production efficiency of Cordyceps militaris, greatly reduce the production cost, but also can improve the rigidity and make hasty.

【技術實現步驟摘要】
一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法
本專利技術涉及蛹蟲草生產領域，具體的說是一種蛹蟲草生產注射接種過程的封閉連續定量注射接種方法。
技術介紹
蛹蟲草是1958年在吉林省首次被發現，通過鑒定，認為它與冬蟲夏草是同一個屬，定名為蛹蟲草。1986年在我國被人工馴化培養成功。蛹蟲草源自野生蟲草，卻在品質上優于野生冬蟲夏草。經權威部門檢測分析表明：蛹蟲草（北冬蟲夏草）所含蟲草素（3’-脫氧腺苷）、蟲草酸、蟲草多糖、甘露醇、SOD（超氧化物歧化酶）及磷、鉀、鋅、硒等礦質元素均達到或超過天然冬蟲夏草，其中主要功效成分--蟲草素含量是天然冬蟲夏草的30多倍，蟲草多糖含量是天然冬蟲夏草的1.5倍，SOD(超氧化物歧化酶)活性是天然冬蟲夏草的5.2倍，具有抗癌作用的硒含量是天然冬蟲夏草的12.8倍，鋅含量是天然冬蟲夏草的9倍。具有很高的藥用和食用保健價值。蛹蟲草中含有豐富的生物活性物質，經藥理、藥化、“三致”(致畸、致癌、致突變)試驗及臨床應用顯示蛹蟲草（北冬蟲夏草）對人體有以下幾種功能。（1）能平喘止咳，對肺氣腫、氣管炎有較好療效；（2）具有補腎壯陽，治療慢性腎炎和腎功能衰竭；（3）能明顯降低血糖、尿糖；對糖尿病患者有明顯療效；（4）能降低血壓、調節血脂，治療腦血栓、冠心病、手足麻木等病癥；（5）具有保肝護肝作用；（6）具有抗菌、抗炎、抗癌、抑癌，明顯增強機體免疫功能，增強體力、提高大腦記憶力的功效；（7）潤肌美容，尤其可快速消除“蝴蝶”斑。蛹蟲草現已廣泛用于制藥、保健食品、飲料、制酒等多種行業，已成為替代天然冬蟲夏草的理想代用品。可長期食用，無毒副作用。為了滿足市場的需求，現在通過對野生蛹蟲草菌種分離馴化培養，以柞蠶蛹為寄主，已經能夠批量規模生產出人工栽培的蛹蟲草，但目前常采用的接種方法是自然感染法和微量注射器注射法。自然感染法是先用大米等做成培養基，將液體蛹蟲草菌種接種于大米培養基上，待蛹蟲草菌生長發育到一定程度時，將蠶蛹投入，在合適的溫度濕度條件下菌絲可自然感染蛹體。這種方法的缺點是多了一個制作培養基環節，增加了培養時間，增加了勞動力成本，增加了原料成本。且感染成活率低，使得生產成本大大增加。微量注射器注射法是采用化驗用三角瓶制作液體蛹蟲草菌種，采用5ml微量注射器注射接種。此法的缺點一是費工費時，每次只能注射25個蛹，無法連續操作；二是注射劑量不均，每蛹注射劑量不易控制，多少不均，對僵化出草率有很大的負面影響；三是使用化驗用三角瓶制菌生產成本高；四是非封閉定量接種，污染率高，出草率低，使得生產成本大大增加。
技術實現思路
本專利技術的目的是解決上述技術問題，提供一種蛹蟲草生產過程中封閉連續定量接種方法，該方法不僅能夠提高生產效率，大大降低生產成本，而且還能夠提高僵化出草率。為實現上述目的，本專利技術的蛹蟲草生產過程中的封閉連續定量注射接種方法包括以下步驟：步驟（1）液體蛹蟲草菌種獲取：參照現有液體蛹蟲草菌種的制作方法在玻璃輸液瓶中進行制作、培養；步驟（2）蛹體封閉連續定量注射接種：在超凈工作臺下將步驟（1）中裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；然后將醫用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫用連續可調注射器密閉連接，使玻璃輸液瓶內的液體蛹蟲草菌種通過無菌輸液管流到獸醫用連續可調注射器內，最后通過調整注射器并將針頭扎進蛹體內來實現定量注射接種。其中，所述的液體蛹蟲草菌種獲取在實際過程中可以采用以下步驟：（a）蛹蟲草斜面培養基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、瓊脂18g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，分裝于Φ15×150試管中，每只試管分裝培養基15ml，擺成斜面待用；（b）野生蛹蟲草菌種分離培養：野生蛹蟲草在長白山余脈采集所得；將野生蛹蟲草用75%酒精消毒處理，切成0.5cm×0.5cm小塊，接種到步驟（a）蛹蟲草斜面培養基試管中，在23℃條件下培養10天，得固體菌種，保存備用；（c）蛹蟲草液體培養基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀0.5g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，分裝于500ml玻璃輸液瓶中，每瓶分裝300ml，瓶口用脫脂棉塞上，用牛皮紙封口，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，晾至30℃以下進行接種；（d）液體蛹蟲草菌種制作：在步驟（c）裝有液體培養基的玻璃輸液瓶中接入步驟（b）培養的固體菌種，每瓶接入5mm×5mm菌塊4塊，在23℃條件下旋轉式搖床振蕩培養5-7天,待菌絲充滿液體培養基后即可使用；所述的振蕩培養參數為80-120r/min。本專利技術的優點和積極效果：1、本專利技術采用500ml玻璃輸液瓶替代化驗用三角瓶制作液體蛹蟲草菌種，可節省成本7倍多，而且使用玻璃輸液瓶方便后續對蛹體進行連續注射接種。2、本專利技術采用獸醫用連續可調注射器替代普通微量注射器，同時采用醫用一次性無菌輸液管將獸醫用連續可調注射器和500ml玻璃輸液瓶連接，實現封閉連續定量注射接種，該方法可提高工作效率2倍以上，提高僵化出草率20個百分點以上，即可節約勞動力成本50%，節約原材料成本25%以上。附圖說明圖1為本專利技術封閉連續定量注射時輸液瓶與注射器連接示意圖。具體實施方式實施例1一、液體蛹蟲草菌種獲?。?）蛹蟲草斜面培養基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、瓊脂18g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，分裝于Φ15×150試管中，每只試管分裝培養基15ml，擺成斜面待用。（2）野生蛹蟲草菌種分離培養：野生蛹蟲草在長白山余脈采集所得；將野生蛹蟲草用75%酒精消毒處理，切成0.5cm×0.5cm小塊，接種到蛹蟲草斜面培養基試管中，在23℃條件下培養10天，得固體菌種，保存備用；斜面試管固體菌種保存時可采用定期移植法保藏，即將生長發育成熟的斜面試管固體菌種放在4℃條件下保藏，每隔3個月移植轉管一次。（3）蛹蟲草液體培養基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀0.5g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，分裝于500ml玻璃輸液瓶中，每瓶分裝300ml，瓶口用脫脂棉塞上，用牛皮紙封口，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，晾至30℃以下進行接種。（4）液體蛹蟲草菌種制作：在步驟（3）裝有液體培養基的玻璃輸液瓶中接入步驟（2）培養的固體菌種，每瓶接入5mm×5mm菌塊4塊，在23℃條件下旋轉式搖床振蕩培養5-7天,菌絲充滿液體培養基后備用；所述的振蕩培養參數為80-120r/min。二、蛹體封閉連續定量注射接種：在超凈（無菌）工作臺下將裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；然后將醫用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫用連續可調注射器密閉連接（連接方式如圖本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：步驟（1）液體蛹蟲草菌種獲?。簠⒄宅F有液體蛹蟲草菌種的制作方法在玻璃輸液瓶中進行制作、培養；步驟（2）蛹體封閉連續定量注射接種：在超凈工作臺下將步驟（1）中裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；然后將醫用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫用連續可調注射器密閉連接，使玻璃輸液瓶內的液體蛹蟲草菌種通過無菌輸液管流到獸醫用連續可調注射器內，最后通過調整注射器并將針頭扎進蛹體內來實現定量注射接種。

【技術特征摘要】
1.一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：步驟（1）液體蛹蟲草菌種獲取：參照現有液體蛹蟲草菌種的制作方法在玻璃輸液瓶中進行制作、培養；步驟（2）蛹體封閉連續定量注射接種：在超凈工作臺下將步驟（1）中裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；然后將醫用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫用連續可調注射器密閉連接，使玻璃輸液瓶內的液體蛹蟲草菌種通過無菌輸液管流到獸醫用連續可調注射器內，最后通過調整注射器并將針頭扎進蛹體內來實現定量注射接種。2.根據權利要求1所述的一種蛹蟲草生產封閉連續定量接種方法，其特征在于：所述液體蛹蟲草菌種獲取包括以下步驟：（a）蛹蟲草斜面培養基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、瓊脂18g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，121℃高壓滅菌30分鐘，分裝于Φ15×150試管中，每只試管分裝培養基15ml，擺成斜面待用；...

【專利技術屬性】
技術研發人員：于春天，
申請(專利權)人：吉林省天祺蛹蟲草繁育研究有限公司，
類型：發明
國別省市：吉林,22