一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法，包括以下步驟：步驟一，借助喉鏡使用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白，隔日一次，共三次，使豚鼠致敏；步驟二，在所述步驟一末次致敏后第14和21天，分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化給予卵白蛋白，從而激發(fā)豚鼠產(chǎn)生主動(dòng)全身過敏，即得豚鼠主動(dòng)全身過敏模型；本發(fā)明專利技術(shù)的制備方法使得動(dòng)物處于清醒狀態(tài)，避免手術(shù)創(chuàng)傷，模擬吸入制劑進(jìn)入動(dòng)物氣管內(nèi)給藥，靶器官唯一，針對(duì)性強(qiáng)，重復(fù)性好；而且本發(fā)明專利技術(shù)可以精確定量藥物進(jìn)入呼吸道是否引起過敏，同時(shí)沒有多余藥物浪費(fèi)。

Method for preparing active whole body allergy model of guinea pig by intratracheal atomization

The invention discloses an endotracheal atomization of guinea pigs induced by active systemic anaphylaxis model preparation method comprises the following steps: step one, with the help of laryngoscope endotracheal intubation needle atomization, atomization to ovalbumin, once every other day, a total of three times, the sensitized guinea pig; step two, in the end of a step sensitization after fourteenth and 21 days respectively, intratracheal atomizing given ovalbumin, and thus stimulate active systemic anaphylaxis in guinea pigs, the guinea pig active systemic anaphylaxis model; the preparation method of the invention makes the animal in a sober state, avoid surgical injury and mimic inhalation preparation into animal intratracheal administration, target organ only, strong pertinence and good repeatability; and the invention can accurately quantitative drug into the respiratory tract can cause allergies, and no extra drug waste.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法
本專利技術(shù)涉及一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過敏模型的制備方法，尤其涉及一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法。
技術(shù)介紹
肺部給藥由于藥物直接以較高濃度到達(dá)肺部靶器官，作用直接，起效迅速，且用藥量少，能有效減少全身給藥所產(chǎn)生的不良反應(yīng)，是治療呼吸系統(tǒng)疾病或全身疾病理想的給藥途徑，在臨床上應(yīng)用已久。因此經(jīng)呼吸道給藥或通過呼吸道染毒是針對(duì)吸入制劑藥效及進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)不可或缺的手段。目前，針對(duì)臨床常用的水霧劑或粉霧劑等吸入制劑的安全性研究較為缺乏，多采用口鼻暴露和全身暴露，此種方法雖然無創(chuàng)但無法精確定量給藥劑量，藥物容易沉降于暴露塔內(nèi)損耗較大，另一方面相關(guān)儀器及配套發(fā)生器價(jià)格不菲。傳統(tǒng)暴露式氣管插管方式需手術(shù)暴露氣管，不適于長(zhǎng)期給藥。由此可見針對(duì)吸入制劑的安全性評(píng)價(jià)需要開創(chuàng)一種無創(chuàng)且精確的給藥方式。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題提出的一種精確定量且無浪費(fèi)的氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本專利技術(shù)所采取的技術(shù)措施為：一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法，包括以下步驟：步驟一，借助喉鏡使用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白，隔日一次，共三次，使豚鼠致敏；步驟二，在所述步驟一末次致敏后第14和21天，分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化給予卵白蛋白，從而激發(fā)豚鼠產(chǎn)生主動(dòng)全身過敏，即得豚鼠主動(dòng)全身過敏模型。為了優(yōu)化上述制備方法，本專利技術(shù)所采取的技術(shù)措施還包括：進(jìn)一步地，所述步驟一為采用MicroSprayer霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液；所述步驟一中霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液中卵白蛋白濃度為1～4mg/ml，更優(yōu)選為2mg/ml；霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液的劑量為0.2-0.8ml，更優(yōu)選為0.5ml。進(jìn)一步地，所述步驟二為在步驟一末次致敏后第14和21天，采用MicroSprayer霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液。進(jìn)一步地，所述步驟二中霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液中卵白蛋白濃度為2～6mg/ml，更優(yōu)選為4mg/ml；霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液的劑量為0.2-1.0ml，更優(yōu)選為0.5ml。同時(shí)，本專利技術(shù)還可以采用HRH-MAG6型粉塵霧化針頭實(shí)施，故步驟一為采用HRH-MAG6型粉塵霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白干粉。進(jìn)一步地，所述步驟一中霧化給予卵白蛋白干粉的劑量為1～3mg/只，更優(yōu)選為2mg/只。進(jìn)一步地，所述步驟二為在步驟一末次致敏后第14和21天，采用HRH-MAG6型粉塵霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管霧化給予卵白蛋白干粉；所述步驟二中霧化給予卵白蛋白干粉的劑量為2-6mg/只，更優(yōu)選為4mg/只。本專利技術(shù)中實(shí)施氣管內(nèi)插管給予霧化時(shí)，借助小動(dòng)物喉鏡在視野內(nèi)暴露會(huì)咽部位，將霧化針頭插入氣管中，快速并用力推注注射器針芯，使液體呈霧狀。注意操作時(shí)動(dòng)作輕柔、迅速，所有器械注意及時(shí)消毒。本專利技術(shù)采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：本方法動(dòng)物處于清醒狀態(tài)，避免手術(shù)創(chuàng)傷，模擬吸入制劑進(jìn)入動(dòng)物氣管內(nèi)給藥，靶器官唯一，針對(duì)性強(qiáng)，重復(fù)性好。而且該法可以精確定量藥物進(jìn)入呼吸道是否引起過敏，同時(shí)沒有多余藥物浪費(fèi)。實(shí)驗(yàn)證明效果良好，以氣管內(nèi)霧化OVA生理鹽水溶液進(jìn)行致敏激發(fā)，成功地誘發(fā)了豚鼠主動(dòng)全身過敏癥狀，建立了豚鼠主動(dòng)全身過敏模型。具體實(shí)施方式本專利技術(shù)提供了一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法，包括以下步驟：步驟一，借助喉鏡使用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白，隔日一次，共三次，使豚鼠致敏；步驟二，在所述步驟一末次致敏后第14和21天，分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化給予卵白蛋白，從而激發(fā)豚鼠產(chǎn)生主動(dòng)全身過敏，即得豚鼠主動(dòng)全身過敏模型。下面通過具體實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本專利技術(shù)，但是下述實(shí)施例并不限制本專利技術(shù)范圍。實(shí)施例1氣管內(nèi)霧化制備豚鼠主動(dòng)全身過敏模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：采用豚鼠16只，雌雄各半。Hartley，SPF級(jí)，體重300～350g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)用卵白蛋白(OVA)：購(gòu)買自SIGMA公司，氯化鈉注射液購(gòu)買自華裕(無錫)制藥有限公司。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度：20～25℃；濕度：40～70％。光照：自動(dòng)光照，每12小時(shí)明暗交替。氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型制備方法主要分為致敏期和激發(fā)期兩個(gè)階段。致敏期間：OVA組霧化給予2mg/ml的OVA生理鹽水溶液，0.5ml/只，隔日一次，給藥時(shí)間為D1、D3、D5天，共三次；陰性對(duì)照組(n.s.)以氯化鈉注射液代替OVA生理鹽水溶液。激發(fā)期間：上述動(dòng)物末次致敏后第14天(D19)和第21(D26)天，各取半數(shù)豚鼠氣管內(nèi)霧化激發(fā)：仍借助小動(dòng)物喉鏡采用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，分別霧化給予4mg/ml的OVA生理鹽水溶液或氯化鈉注射液，0.5ml/只進(jìn)行攻擊。致敏和激發(fā)途徑均為氣管內(nèi)霧化：借助小動(dòng)物喉鏡壓住舌頭，在視野內(nèi)可見暴露的會(huì)咽部位，根據(jù)動(dòng)物呼吸頻率觀察到動(dòng)物氣管口有節(jié)律的開合，當(dāng)動(dòng)物吸氣即氣管打開時(shí)，小心并迅速將霧化針頭插入氣管中，快速并用力推注注射器針芯，使液體呈霧狀。給藥成功后，動(dòng)物可見一過性咳嗽，濕羅音。注意操作時(shí)動(dòng)作輕柔、迅速，所有器械注意及時(shí)消毒。所得結(jié)果為：致敏期間每日對(duì)各組豚鼠進(jìn)行大體觀察，均無異常表現(xiàn)。激發(fā)期間：激發(fā)后立即觀察動(dòng)物表現(xiàn)，觀察是否出現(xiàn)顫抖、豎毛、咳嗽、呼吸困難、步態(tài)不穩(wěn)、痙攣、休克以及死亡等反應(yīng)癥狀，按表1記錄每日動(dòng)物的反應(yīng)以及過敏癥狀出現(xiàn)的時(shí)間并按表2的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)過敏反應(yīng)的強(qiáng)度進(jìn)行判斷。表1.主動(dòng)全身過敏反應(yīng)癥狀a正常h呼吸急促o步態(tài)不穩(wěn)b躁動(dòng)i排尿p跳躍c豎毛j排糞q喘息d發(fā)抖k流淚r痙攣e搔鼻l呼吸困難s旋轉(zhuǎn)f噴嚏m嘯鳴音t潮式呼吸g咳嗽n紫癜u死亡表2.全身致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)癥狀程度評(píng)分a過敏反應(yīng)陰性0b-e過敏反應(yīng)弱陽性1f-k過敏反應(yīng)陽性2l-t過敏反應(yīng)強(qiáng)陽性3u過敏反應(yīng)極強(qiáng)陽性4本專利技術(shù)中，u癥狀(死亡)是最嚴(yán)重的現(xiàn)象，故給予4分；a癥狀：0分；b-e癥狀：每一個(gè)癥狀各給予1分；f-k癥狀：每一個(gè)癥狀各給予2分；l-t癥狀：每一個(gè)癥狀各給予3分。豚鼠過敏發(fā)生率結(jié)果見表3。表3豚鼠過敏反應(yīng)發(fā)生率組別劑量(mg/kg)發(fā)生率(％)時(shí)間(s)評(píng)分n.s.0.0000OVA1.010032.2±6.74從上述結(jié)果中可以看出，本專利技術(shù)中陰性對(duì)照組動(dòng)物未出現(xiàn)過敏反應(yīng)癥狀，OVA生理鹽水溶液組動(dòng)物出現(xiàn)過敏反應(yīng)癥狀，本專利技術(shù)的試驗(yàn)系統(tǒng)成立。計(jì)算過敏反應(yīng)率(每組發(fā)生過敏反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)/該組動(dòng)物總數(shù))，根據(jù)過敏反應(yīng)發(fā)生率和發(fā)生程度綜合評(píng)價(jià)過敏反應(yīng)情況，判定OVA生理鹽水溶液組動(dòng)物過敏反應(yīng)率為100％。以氣管內(nèi)霧化形式給予OVA可導(dǎo)致豚鼠過敏。分析豚鼠血清組胺含量，發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)霧化OVA生理鹽水溶液致敏可致組胺含量明顯升高，測(cè)定結(jié)果如表4所示，末次致敏后第14天和21天，OVA組血清組胺含量較n.s.組相比有明顯升高(p＜0.05)。表4末次致敏后第14天和21天OVA對(duì)血清組胺含量的影響(n＝8)組別OVA劑量血清組胺含量(ng/ml)n.s.0.098.56±43.75OVA1.0269.45±137.06*注：與n.s.組相比，*P＜0.05；n＝8。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本專利技術(shù)利用氣本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟一，借助喉鏡使用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白，隔日一次，共三次，使豚鼠致敏；步驟二，在所述步驟一末次致敏后第14和21天，分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化給予卵白蛋白，從而激發(fā)豚鼠產(chǎn)生主動(dòng)全身過敏，即得豚鼠主動(dòng)全身過敏模型。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種氣管內(nèi)霧化致豚鼠主動(dòng)全身過敏模型的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟一，借助喉鏡使用霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白，隔日一次，共三次，使豚鼠致敏；步驟二，在所述步驟一末次致敏后第14和21天，分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化給予卵白蛋白，從而激發(fā)豚鼠產(chǎn)生主動(dòng)全身過敏，即得豚鼠主動(dòng)全身過敏模型。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟一為采用MicroSprayer霧化針頭經(jīng)氣管內(nèi)插管，霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟一中霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液中卵白蛋白濃度為1～4mg/ml，霧化給予卵白蛋白生理鹽水溶液的劑量為0.2-0.8ml。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟二為在步驟一末次致敏后第14和21天，采用MicroSpr...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：谷舒怡，唐黎明，航艾，王巧旭，盛云華，寧煉，周謖，朱鴻雁，嚴(yán)佳捷，王涵，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海市食品藥品檢驗(yàn)所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：上海,31