一種改進的細菌活菌計數方法技術

一種改進的細菌活菌計數方法，包括操作步驟：使用抗生素藥瓶對活菌發酵液或者培養物進行濃度梯度稀釋，振蕩均勻后，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的瓊脂細菌計數平板上，靜置后置于恒溫培養箱中培養后取出直接計數即可。將抗生素藥瓶和瓶蓋經滅菌處理，依次向抗生素藥瓶中加入經過滅菌處理后冷卻至室溫的9Bml無菌生理鹽水，向抗生素藥瓶中加入Bml待稀釋菌液，使用漩渦振蕩器對加有Bml待稀釋菌液、總裝量為10Bml的抗生素藥瓶進行振蕩稀釋；使用安裝上7號金屬針頭的注射器將振蕩后的稀釋菌液垂直滴在相應的細菌計數平板上，每個平板中滴入1?100滴，操作完成后平板靜置的時間為5?360min。

【技術實現步驟摘要】
一種改進的細菌活菌計數方法
本專利技術涉及一種活菌計數法，尤其涉及一種改進的細菌活菌計數方法。
技術介紹
目前常用的活菌計數法是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計，即取一定容量菌懸液，作一系列10倍倍比稀釋，然后選擇合適濃度的稀釋液吸取定量稀釋液，置于瓊脂平板中培養，根據各濃度梯度稀釋液在瓊脂平板中生長繁殖出的細菌菌落的數量，推算出原菌懸液或培養物中的活菌數。該法在實際操作過程中存在以下缺點：1.試管長度較長﹑體積較大，占用滅菌鍋的空間也大。試管具有圓形的底部，因此在超凈臺操作時必須使用試管架，占用了超凈臺的內部空間，如果試管較多而試管架又較少時，則就必須將試管傾斜放置，操作比較麻煩。2.一個平皿只能對樣品一個稀釋濃度進行一次測樣，如果某個樣品具有3種不同的稀釋濃度，每個稀釋濃度需要進行3個重復樣檢測，則必須使用9塊平皿。3.活菌稀釋液取樣量為0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌懸液的含菌量在30-300之間才有計數的意義，也就是說每個重復樣平皿上要有30-300個單菌落，計數速度比較慢。4.菌懸液取樣量為0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌懸液含菌量在30-300之間，在操作過程中細菌難以完全分散，分布不均勻、較易出現連片或連線的情況，給計數帶來不便。
技術實現思路
本專利技術針對以不足，提供一種操作簡單、方便快捷、提高計數效率的改進的細菌活菌計數方法。本專利技術解決上述技術問題的技術方案如下：一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：使用抗生素藥瓶對活菌發酵液或者培養物進行濃度梯度稀釋，振蕩均勻后，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的瓊脂細菌計數平板上，靜置后置于恒溫培養箱中培養后取出直接計數即可。根據所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括分裝抗生素藥瓶無菌液體的操作步驟，抗生素藥瓶和瓶蓋要配套使用，方法是：先將清洗潔凈且干燥后的抗生素藥瓶和瓶蓋經121℃-126℃×30min-60min的滅菌處理，然后40℃-120℃烘干至完全干燥后冷卻至室溫，再用微量移樣器或無菌吸管依次向抗生素藥瓶中加入經過121℃-126℃×30min-60min的滅菌處理后冷卻至室溫的9Bml無菌生理鹽水，無菌操作取出瓶蓋蓋上，放置在超凈工作臺中備用；再向抗生素藥瓶中加入Bml待稀釋菌液，使用漩渦振蕩器對加有Bml待稀釋菌液、總裝量為10Bml的抗生素藥瓶進行振蕩稀釋，振蕩時間為15s-90s；使用安裝上7號金屬針頭的注射器將振蕩后的稀釋菌液垂直滴在相應的細菌計數平板上，每個平板中滴入1-100滴，操作完成后平板靜置的時間為5min-360min。根據所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：清洗抗生素藥瓶和瓶蓋，晾干或烘干后分別裝入無菌布袋扎好口后備用；清洗培養皿晾干或烘干后以5-11個為一組用報紙包好備用；將7號金屬針頭裝入培養皿中和注射器、鑷子、Bml微量移液器、5Bml微量移液器一起用報紙包好備用；用三角燒瓶分別裝入固體瓊脂培養基與食鹽濃度為0.85%的生理鹽水，用報紙扎好瓶口后備用；將以上材料依次放入高壓滅菌鍋中，蓋上蓋后開啟電源升溫，設定滅菌條件為121℃-126℃恒溫30min-90min；取出自然降溫至室溫，將其它滅菌后的材料置烘箱中高溫恒溫置干燥無水分，然后取出放置于無菌室中自然降至室溫。根據所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：配制新潔爾滅消毒液對環境和空間消毒后，開啟紫外燈管進行紫外線消毒。根據所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括細菌計數操作步驟：其中，（1）倒平板將固體瓊脂培養基重新加熱融化后降溫至45-100℃倒平板；（2）分裝9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中并塞好瓶塞點燃超凈工作臺中的酒精燈，用無菌鑷子夾取浸泡在75%酒精中的棉花團擦拭雙手及超凈工作臺臺面，取出5Bml的微量移液器，將移液量設定為4.5Bml，將抗生素瓶取出排放在超凈工作臺臺面，用微量移液器依次吸取兩次共9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中，然后用無菌鑷子夾取瓶塞輕輕蓋上抗生素瓶；點燃超凈工作臺中的酒精燈，用無菌鑷子夾取浸泡在75%酒精中的棉花團擦拭雙手及超凈工作臺臺面，取出無菌吸管，將抗生素瓶取出排放在超凈工作臺臺面，用吸管吸取9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中，然后用無菌鑷子夾取瓶塞輕輕蓋上抗生素瓶；（3）樣品準備粉末樣品：利用百分之一或萬分之一天平準確的稱取樣品X克加入到10Xml無菌生理鹽水的三角燒瓶中，置搖床上0r/min-300r/min振蕩0-120min；半固體樣品、膏狀樣品：將滅過菌的燒杯放在百分之一或萬分之一天平上，清零后，用無菌取樣匙取X1克膏狀樣品于燒杯中，將燒杯移至超凈工作臺中，準確的加入樣品重量10倍的無菌生理鹽水，然后放入經過滅菌的攪拌子，開啟磁力攪拌器進行攪拌，攪拌時間0-120min；液體樣品：用微量移液器定量移取X2ml液體樣品于無菌三角燒瓶中，用微量移液器或無菌吸管準確的加入液體樣品體積9倍的無菌生理鹽水，然后放入經過滅菌的攪拌子，開啟磁力攪拌器進行攪拌，攪拌時間0-120min；以上樣品攪拌或振蕩均勻后記為10-1；（4）10倍濃度梯度稀釋取微量移液器吸取Bml10-1稀釋液于含9Bml生理鹽水的抗生素瓶中，置漩渦振蕩器中振蕩25秒，記為10-2；用微量移液器吸取Bml10-2的菌懸液放入含9Bml生理鹽水的抗生素瓶中，置漩渦振蕩器中振蕩25秒，記為10-3；用微量移液器吸取Bml10-3的菌懸液放入含9Bml生理鹽水的抗生素瓶中，置漩渦振蕩器中振蕩25秒，記為10-4；用微量移液器吸取Bml10-4的菌懸液放入含9Bml生理鹽水的抗生素瓶中，置漩渦振蕩器中振蕩25秒，記為10-5；依次類推，分別得到10-6、10-7、10-8、10-9、10-10的活菌稀釋液；（5）細菌計數滴定選取合適梯度的菌懸液，如10-A、10-(A+1)、10-(A+2)，取一塊固體瓊脂平板，在底部用記號筆將平皿平均分成120度的三個扇形區域，并依次標記10-A、10-(A+1)、10-(A+2)；用安裝有7號金屬針頭的注射器吸取1ml10-(A+2)菌懸液，往超凈工作臺中的廢液缸中排出0.2ml菌懸液清洗金屬針頭，然后將注射器垂直放置于固體瓊脂平板正上方，輕壓注射器活塞將10-(A+2)菌懸液0.01ml滴入固體瓊脂平板10-(A+2)區域，依次滴三滴，完成10-(A+2)菌懸液三個重復樣測定；滴定完后，將注射器內殘留的10-(A+2)菌懸液排入超凈工作臺中的廢液缸中，然后用此注射器吸取1ml10-(A+1)菌懸液全部排入到超凈工作臺中的廢液缸中清洗注射器及針頭，然后吸取1ml10-(A+1)菌懸液，將注射器垂直放置于固體瓊脂平板正上方，輕壓注射器活塞將10-(A+1)菌懸液0.01ml滴入固體瓊脂平板10-(A+1)區域，依次滴三滴，完成10-(A+1)菌懸液三個重復樣測定；滴定完后，將注射器內殘留的10-(A+1)菌懸液排入超凈工作臺中的廢液缸中，然后用此注射器吸取1ml10-A菌懸液全部排入到超凈工作臺中的廢液缸中清洗注射器及針頭，然后吸取1ml10-A菌懸液，將注射器垂直放置于固體瓊脂平板正上方，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：使用抗生素藥瓶對活菌發酵液或者培養物進行濃度梯度稀釋，振蕩均勻后，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的瓊脂細菌計數平板上，靜置后置于恒溫培養箱中培養后取出直接計數即可。

【技術特征摘要】
1.一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：使用抗生素藥瓶對活菌發酵液或者培養物進行濃度梯度稀釋，振蕩均勻后，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的瓊脂細菌計數平板上，靜置后置于恒溫培養箱中培養后取出直接計數即可。2.根據權利要求1所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括分裝抗生素藥瓶無菌液體的操作步驟，抗生素藥瓶和瓶蓋要配套使用，方法是：先將清洗潔凈且干燥后的抗生素藥瓶和瓶蓋經121℃-126℃×30min-60min的滅菌處理，然后40℃-120℃烘干至完全干燥后冷卻至室溫，再用微量移樣器或無菌吸管依次向抗生素藥瓶中加入經過121℃-126℃×30min-60min的滅菌處理后冷卻至室溫的9Bml無菌生理鹽水，無菌操作取出瓶蓋蓋上，放置在超凈工作臺中備用；再向抗生素藥瓶中加入Bml待稀釋菌液，使用漩渦振蕩器對加有Bml待稀釋菌液、總裝量為10Bml的抗生素藥瓶進行振蕩稀釋，振蕩時間為15s-90s；使用安裝上7號金屬針頭的注射器將振蕩后的稀釋菌液垂直滴在相應的細菌計數平板上，每個平板中滴入1-100滴，操作完成后平板靜置的時間為5min-360min。3.根據權利要求2所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：清洗抗生素藥瓶和瓶蓋，晾干或烘干后分別裝入無菌布袋扎好口后備用；清洗培養皿晾干或烘干后以5-11個為一組用報紙包好備用；將7號金屬針頭裝入培養皿中和注射器、鑷子、Bml微量移液器、5Bml微量移液器一起用報紙包好備用；用三角燒瓶分別裝入固體瓊脂培養基與食鹽濃度為0.85%的生理鹽水，用報紙扎好瓶口后備用；將以上材料依次放入高壓滅菌鍋中，蓋上蓋后開啟電源升溫，設定滅菌條件為121℃-126℃恒溫30min-90min；取出自然降溫至室溫，將其它滅菌后的材料置烘箱中高溫恒溫置干燥無水分，然后取出放置于無菌室中自然降至室溫。4.根據權利要求3所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括操作步驟：配制新潔爾滅消毒液對環境和空間消毒后，開啟紫外燈管進行紫外線消毒。5.根據權利要求4所述的一種改進的細菌活菌計數方法，其特征在于，包括細菌計數操作步驟：其中，（1）倒平板將固體瓊脂培養基重新加熱融化后降溫至45-100℃倒平板；（2）分裝9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中并塞好瓶塞點燃超凈工作臺中的酒精燈，用無菌鑷子夾取浸泡在75%酒精中的棉花團擦拭雙手及超凈工作臺臺面，取出5Bml的微量移液器，將移液量設定為4.5Bml，將抗生素瓶取出排放在超凈工作臺臺面，用微量移液器依次吸取兩次共9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中，然后用無菌鑷子夾取瓶塞輕輕蓋上抗生素瓶；點燃超凈工作臺中的酒精燈，用無菌鑷子夾取浸泡在75%酒精中的棉花團擦拭雙手及超凈工作臺臺面，取出無菌吸管，將抗生素瓶取出排放在超凈工作臺臺面，用吸管吸取9Bml無菌生理鹽水于抗生素瓶中，然后用無菌鑷子夾取瓶塞輕輕蓋上抗生素瓶；（3）樣品準備粉末樣品：利用百分之一或萬分之一天平準確的稱取樣品X克加入到10Xml無菌生理鹽水的三角燒瓶中，置搖床上0r/min-300r/min振蕩0-120min；半固體樣品、膏狀樣品：將滅過菌的燒杯放在百分之一或萬分之一天平上，清零后，用無菌取樣...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王滿磊，張開臣，孔令華，
申請(專利權)人：滕州合易食品有限公司，
類型：發明
國別省市：山東,37