一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法技術

本發明專利技術公開了一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法。該方法包括如下步驟：吸取未經處理的農村飲用水樣品，滴入采用冷水凝固劑混合粉末和液體培養基制備的檢測凝膠中，密封培養后，觀察并計數檢測凝膠中的菌落個數。本發明專利技術檢測方法用的檢測凝膠易溶于冷水、吸水性能良好，保水能力強，無毒、透明，凝膠強度高，對微生物生長無明顯抑制作用；且檢測工具攜帶方便，操作簡單，成本低廉，能縮短檢測時間，與國標方法檢驗結果無顯著性差異。

【技術實現步驟摘要】
一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法
本專利技術屬于環境微生物檢測
，尤其涉及一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法。
技術介紹
農村飲用水由于地形、投資等條件限制，很少像大型集中式供水那樣對生活飲用水進行專業消毒，若有微生物污染，將會使人患上腸道傳染病及其他疾病，嚴重影響人們的生活及環境衛生質量。我國的生活飲用水相關標準中對微生物指標都做了限值要求并提供了檢驗方法，傳統的微生物檢驗方法所用的瓊脂不能在冷水中凝固，配制微生物培養基時，需先加熱溶解、滅菌、再冷卻后才能使用，操作繁瑣，準備和收尾工作繁重，大大影響了檢驗效率。另外，我國部分農村由于農村道路不暢、距離遠等限制，從現場取水樣到運送至實驗室耗時長，并且取樣、運輸等過程可能存在的染菌對檢驗結果也有重大的影響。冷水培養基凝固劑作培養基載體，在農村飲用水微生物檢驗時，無需加熱預處理，攜帶方便，可在戶外現場直接滴加水樣開始進行檢測。因此，研發一種無毒、透明、穩定、保水效果好、凝膠強度高的凝膠材料并用于農村飲用水微生物現場快速檢測上，對縮短檢驗時間，提高檢驗效率與時效有著重要意義。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法。本專利技術方法現場檢測農村飲用水微生物指標，檢測工具攜帶方便，操作簡單，成本低廉，能縮短檢測時間、提高檢驗時效，且與國標方法檢驗結果無顯著性差異。本專利技術通過如下技術方案實現。一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，包括如下步驟：吸取未經處理的農村飲用水樣品，現場直接加入到采用冷水凝固劑混合粉末和液體培養基制備的檢測凝膠中，密封培養后，觀察并計數檢測凝膠中的菌落數。進一步地，檢測的微生物包括細菌、真菌。進一步地，檢測指標包括菌落總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌。進一步地，所述檢測凝膠通過如下步驟制備得到：將冷水凝固劑混合粉末添加到液體培養基中，煮沸溶解，再冷卻，倒入培養皿中，烘干，殺菌，無菌密封保存，備用。更進一步地，所述冷水凝固劑混合粉末由黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素組成；所述黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素均為食品級原料，并經過粉碎、過60-100目篩，顆粒大小均勻，形成凝膠反應時間短，凝膠性能良好；所述黃原膠和卡拉膠的質量比為1：1.5～2，優選為1:1.5；所述海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素的質量比為1：4～7：6～10，優選為1:5:8；黃原膠和卡拉膠的混合物與海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素的混合物的質量比為6～9：1，優選為7:1。更進一步地，所述液體培養基包括微生物檢測領域常見的液體培養基，包括營養肉湯培養基、孟加拉紅液體培養基、乳糖膽鹽液體培養基、紫紅膽鹽葡萄糖液體培養基、EC-MUG液體培養基、伊紅美藍液體培養基或VRBA液體培養基。更進一步地，所述冷水凝固劑混合粉末與液體培養基的料液比為1.0～2.5：100g/ml。更進一步地，所述煮沸溶解的時間為5-15min。更進一步地，所述冷卻是冷卻至50-60℃。更進一步地，所述培養皿包括玻璃平皿或一次性塑料平皿，優選為一次性塑料平皿。更進一步地，所述烘干的溫度為60℃，時間為45-90min。更進一步地，所述殺菌是采用紫外線或Co60殺菌。更進一步地，所述保存的溫度為2-8℃。進一步地，所述密封培養的溫度為35-45℃，時間為18-24h。與現有技術相比，本專利技術具有如下優點和有益效果：(1)本專利技術檢測方法用的檢測凝膠易溶于冷水、吸水性能良好，保水能力強，無毒、透明，凝膠強度高，對微生物生長無明顯抑制作用；(2)本專利技術方法現場檢測農村飲用水微生物指標，檢測工具攜帶方便，操作簡單，成本低廉，能縮短檢測時間，且與國標方法檢驗結果無顯著性差異。具體實施方式下面結合實施例，對本
技術實現思路
中的技術方案進行清楚、完整地描述，但本專利技術不限于以下實施例。實施例1(1)分別粉碎黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素，過100目篩；將粉碎過篩后的黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素按質量比為9:15:1:6:8混合均勻，得到冷水凝固劑混合粉末；稱取上述混合粉末2.0g添加到100ml液體伊紅美藍液體培養基中，煮沸10min，冷卻至55℃后，吸取10ml，滴加于直徑6cm的一次性塑料平皿中；60℃干燥60min，Co60殺菌后，無菌密封，4℃冰箱保存備用。所得檢測凝膠平整性及透明度好，吸水量83.5g/g，pH值7.0，凝膠強度238g/cm2，對微生物生長無明顯抑制作用。(2)將裝有檢測凝膠的無菌密封檢測平皿帶至甘肅省農村某窖水飲用水采樣現場；在現場用無菌吸管吸取10ml未經處理的水樣均勻噴灑至上述檢測凝膠上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，密封平皿35℃環境下培養24h后，觀察并計數帶金屬光澤的紫黑色菌落。同時，用無菌采樣瓶在現場取水樣，帶回實驗室后按照國家標準《生活飲用水標準檢驗方法—微生物指標》(GBT5750.12-2006)方法，進行飲用水大腸菌群指標檢測。本專利技術方法與國標檢測方法的檢測結果如表1所示。表12種方法測定農村飲用水水樣中大腸菌群數(單位：CFU/ml)由表1可知，2種檢測方法的檢驗結果無顯著性差異。實施例2(1)分別粉碎黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素，過80目篩；將粉碎過篩后的黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素按質量比為6:12:1:7:9混合均勻，得到冷水凝固劑混合粉末；稱取上述混合粉末2.5g添加到100ml紫紅膽鹽葡萄糖液體培養基中，煮沸5min，冷卻至60℃后，吸取10ml，滴加于直徑6cm的一次性塑料平皿中；60℃干燥45min，Co60殺菌后，無菌密封，8℃保存備用。所得檢測凝膠平整性及透明度好，吸水量78.5g/g，pH值7.0，凝膠強度226g/cm2。(2)將裝有檢測凝膠的無菌密封檢測平皿帶至甘肅省農村某窖水飲用水采樣現場；在現場用無菌吸管吸取15ml未經處理的水樣均勻噴灑至上述檢測凝膠上，用parafilm膜封口一次性塑料平皿，密封平皿在45℃環境下培養18h后，觀察并計數繞有紅色沉淀環的深紅色菌落。同時，用無菌采樣瓶在現場取水樣，帶回實驗室后按照國家標準《生活飲用水標準檢驗方法—微生物指標》(GBT5750.12-2006)方法，進行飲用水耐熱大腸菌群指標檢測。本專利技術方法與國標檢測方法的檢測結果如表2所示。表22種方法測定農村飲用水水樣中耐熱大腸菌群(單位：CFU/ml)由表2可知，2種檢測方法的檢驗結果無顯著性差異。實施例3(1)分別粉碎黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素，過60目篩；將粉碎過篩后的黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、羥乙基纖維素按質量比為8:14:1:5:10混合均勻，得到混合粉末；稱取上述混合粉末1.5g添加到100mlEC-MUG液體培養基中，煮沸5min，冷卻至50℃，倒入一次性塑料平皿中，60℃烘75min，紫外線殺菌后，密封，2℃冰箱保存備用。所得檢測凝膠平整性及透明度好，吸水量75.4g/g，pH值6.9，凝膠強度207.4g/cm2，對微生物的生長無明顯抑制。(2)將裝有檢測凝膠的無菌密封檢測平皿帶至甘肅省農村某窖水飲用水采樣現場；本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：吸取未經處理的農村飲用水樣品，現場直接加入到采用冷水凝固劑混合粉末和液體培養基制備的檢測凝膠中，密封培養后，觀察并計數檢測凝膠中的菌落數。

【技術特征摘要】
1.一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：吸取未經處理的農村飲用水樣品，現場直接加入到采用冷水凝固劑混合粉末和液體培養基制備的檢測凝膠中，密封培養后，觀察并計數檢測凝膠中的菌落數。2.根據權利要求1所述的一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，檢測的微生物包括細菌、真菌。3.根據權利要求1所述的一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，檢測指標包括菌落總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌。4.根據權利要求1所述的一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，所述檢測凝膠通過如下步驟制備得到：將冷水凝固劑混合粉末添加到液體培養基中，煮沸溶解，再冷卻，倒入培養皿中，烘干，殺菌，無菌密封保存，備用。5.根據權利要求1或4所述的一種農村飲用水微生物現場快速檢測的方法，其特征在于，所述冷水凝固劑混合粉末由黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素組成；所述黃原膠、卡拉膠、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉和羥乙基纖維素均為食品級原料，并經過粉碎、過60-100目篩。6.根據權利要求5所述的一種農村飲用水微生物...

【專利技術屬性】
技術研發人員：龍云川，洪杰，周少奇，
申請(專利權)人：貴州科學院，華南理工大學，
類型：發明
國別省市：貴州,52