一種防治蘆筍莖枯病的生防菌株LS01及其生防菌劑制造技術

本發明專利技術涉及一種防治蘆筍莖枯病的生防菌株LS01及其生防菌劑應用，屬于植物保護技術領域。本發明專利技術提供一種多粘類芽孢桿菌LS01及其應用，以及包含該菌株的生防菌劑及其應用。本發明專利技術提供的生防菌株LS01為多粘類芽孢桿菌，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號CGMCC?NO.?11690。在28-37℃下，在LB培養液中，180rpm振蕩培養該菌株20-48小時，離心、收集菌體，采用微生物凍干法進行處理從而制成生防菌劑，菌劑成品中活菌總濃度為1×10

A control of asparagus stem blight Biocontrol Strain LS01 and its biocontrol agent

The invention relates to a method for preventing asparagus stem blight Biocontrol Strain LS01 and its biocontrol agent, which belongs to the technical field of plant protection. The present invention provides a kind of Paenibacillus polymyxa LS01 and its applications, and contains the strains of biocontrol agent and its application. The present invention provides the Biocontrol Strain LS01 of Bacillus polymyxa, preserved in general center Chinese microbial microbe preservation management committee, CGMCC NO., geneticstock 11690. At 28-37 deg.c, in LB medium, 180rpm oscillation of the strain was cultured in 20-48 hours, centrifugation, cells were collected, using microbial freezing dry processing and made of biological agents, agents in the product viable total concentration is 1 * 10

【技術實現步驟摘要】
一種防治蘆筍莖枯病的生防菌株LS01及其生防菌劑
本專利技術涉及一種防治蘆筍莖枯病的生防菌株LS01及其生防菌劑應用，屬于植物保護
，具體涉及蘆筍莖枯病的防治。
技術介紹
蘆筍莖枯病是一種分布廣、危害重的毀滅性病害，在我國各蘆筍產區幾乎都有發生。近年來我國蘆筍面積不斷擴大，其危害程度也隨之加重。一旦得了莖枯病，輕則減產，重則毀園絕收，給廣大筍農造成巨大損失。同時，因為一旦感染莖枯病將很難根除，因此，蘆筍莖枯病被稱為“蘆筍癌癥”。通常采用化學農藥來防治蘆筍莖枯病，雖然取得了一定的防效，但始終未能很好控制該病害的發生。而且化學農藥對農田生態系統的嚴重破壞，病原菌對藥劑的抗性越來越明顯。同時，化學農藥不易降解，高殘留，對人畜極不安全都嚴重限制了在將來的農業生產上的使用。而生物防治對人畜安全無毒，不污染環境，無殘留，不易使病原菌產生耐藥性，且生防微生物還具有促進作物生長的作用等特點，是最有前途的防治蘆筍莖枯病的方法。目前利用微生物制劑防治蘆筍莖枯病雖取得了一些進展，但效果并不理想。綜上所述，開發新的、更為高效和安全的微生物殺菌劑控制蘆筍莖枯病的發生，是實現農業安全和可持續發展的需要，符合社會發展要求。
技術實現思路
針對目前蘆筍種植過程中莖枯病防治難度大、成本高、化學農藥抗性日益突出和農藥殘留高等問題，本專利技術提供一株多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01，所述菌株的保藏號為CGMCCNO.11690，保藏日期為2015年11月20日，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。在本專利技術的一種實施方式中，本專利技術提供所述多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01在防治蘆筍莖枯病中的應用。在本專利技術的另一種實施方式中，本專利技術提供一種生防菌劑及其在防治蘆筍莖枯病中的應用，所述生防菌劑包括所述多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01。本專利技術還提供一種蘆筍莖枯病的防治方法，所述方法包括對具有蘆筍莖枯病的蘆筍施用所述多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01或所述生防菌劑。本專利技術提供的多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株及生防菌劑對蘆筍莖枯病有較好的防治效果，對人畜安全無毒，不污染環境，無殘留，且不易使病原菌產生耐藥性，是農業與環境領域允許使用的安全性菌株。附圖說明圖1為蘆筍擬莖點霉菌照片，圖2為本專利技術的多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑在培養皿內抑制蘆筍擬莖點霉菌絲生長的照片。具體實施方式下面將結合具體實施例來進一步對本專利技術作詳細描述，以使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚。以下實施例僅用于舉例說明，并不對本專利技術構成任何限制。實施例1多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑及其制備方法。本實施例利用多粘類芽孢桿菌LS01（即多粘類芽孢桿菌CGMCCNO.11690）制作生防菌劑，該生防菌劑是由多粘類芽孢桿菌LS01經活化、種子培養、生產培養和菌劑制備后得到，具體制備方法包括以下步驟：（1）活化：將多粘類芽孢桿菌LS01接種到LB固體培養基上，培養溫度為37℃，培養3-4天；然后轉接到LB液體培養基中，溫度為30℃，180rpm振蕩培養16-28h。（2）種子培養：將步驟（1）活化后的菌液接入至容積為250mL三角瓶中，溫度為30℃，180rpm振蕩培養16-28h，培養至對數生長期；（3）生產培養：將步驟（2）培養得到的菌液，按LB生產培養基總體積的0.5%-2%的接種量接種到發酵罐中，罐溫為30℃，攪拌速度為200rpm，培養時間為40h，得到發酵液。（4）菌劑制備：將步驟（3）培養得到的發酵液進行離心，收集菌體，采用微生物凍干法，制成生防菌劑，菌劑成品中活菌總濃度為1×106CFU/g至1×1011CFU/g。實施例2多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對蘆筍擬莖點霉抑制效果。蘆筍莖枯病致病菌擬莖點霉經活化兩次后，加入10mL無菌水，用接種針將孢子和菌絲小心刮下，然后倒入放有玻璃珠的三角瓶中，搖床振蕩將菌塊打碎，靜置，將上清倒入已冷卻至45℃的300mLPDA培養基中，搖勻后立即倒平板，冷卻凝固后，放置無菌小圓濾紙片（2個/皿），30℃培養過夜。將多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑與無菌水按照1：20稀釋后，取3μL滴加在病原菌培養基的濾紙片上，以無菌水作為空白對照組，30℃培養24-36h，觀察抑菌圈。抑菌試驗結果如圖1所示，具體檢測數值如下表1所示。表1：多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對蘆筍擬莖點霉的抑制效果實施例3溫室盆栽試驗檢測多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對蘆筍莖枯病的防效移栽之前，用多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑稀釋100倍后，浸種處理蘆筍幼苗30min；移栽時采用20mL生防菌劑稀釋液灌根處理，移栽7天后接種1000個/mL蘆筍擬莖點霉游動孢子懸液20mL。另外不用多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑處理，直接接種蘆筍擬莖點霉菌游動孢子懸液的處理作為對照組。每個處理組20株，重復三次。在溫度25～28℃，相對濕度50％，培養4周后調查病級數，計算病害嚴重度和防效。灌根接種法的分級標準：0級，無任何癥狀；1級，幼苗根莖部稍有變黑，葉片不萎蔫或可恢復性萎蔫；2級，幼苗根莖部變黑達1～2cm，葉片不可恢復性萎蔫，下部葉片偶有脫落；3級，幼苗根莖部變黑超過1～2cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯；4級，幼苗根莖部變黑、皺縮，生長點外部葉脫落或整株萎蔫；5級，植株枯死。移栽4周后的調查結果顯示，多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對蘆筍擬莖點霉的防效達到76.07％。以上結合具體實施方式對本專利技術進行了說明，這些具體實施方式僅僅是示例性的，不能以此限定本專利技術的保護范圍，本領域技術人員在不脫離本專利技術實質的前提下可以進行各種修改、變化或替換。因此，依照本專利技術所作的各種等同變化，仍屬于本專利技術所涵蓋的范圍。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
多粘類芽孢桿菌?(Paenibacillus?polymyxa)菌株?LS01，所述菌株的保藏號為CGMCC?NO.?11690。

【技術特征摘要】
1.多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01，所述菌株的保藏號為CGMCCNO.11690。2.如權利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)菌株LS01在防治蘆筍莖枯病中的應用。3.一種生防菌劑，包括權利要求1所述的多粘類芽孢桿菌(...

【專利技術屬性】
技術研發人員：程池，劉洋，陳建國，梁寒峭，尹俊玉，李生有，李國棟，
申請(專利權)人：中國食品發酵工業研究院，北京先農科蘆筍研發中心，
類型：發明
國別省市：北京,11