硫酸長春新堿脂質體及制備方法和應用技術

本發明專利技術涉及一種硫酸長春新堿脂質體及其制備方法，該硫酸長春新堿脂質體由硫酸長春新堿以及使用鞘磷脂制備的納米脂質體組成，其中所述硫酸長春新堿包裹在所述納米脂質體中。本發明專利技術使用鞘磷脂來制備納米脂質體，并包裹硫酸長春新堿后制得硫酸長春新堿脂質體，其中鞘磷脂含有較多的酰胺鍵能夠更好地抵抗化學和生物的降解，保護脂質體結構的穩定，提高腫瘤細胞的藥物富集量，從而提高抗腫瘤效果。

Vincristine sulfate liposome and preparation method and application thereof

The present invention relates to vincristine sulfate liposome and its preparation method, the vincristine sulfate liposome by vincristine sulfate and sphingomyelin prepared nano liposome composition, wherein the vincristine sulfate wrapped in the nano liposomes. The invention uses sphingomyelin to prepare nano liposome, and encapsulated vincristine sulfate prepared after vincristine sulfate liposomes, wherein the amide bond contains more sphingomyelin can better resist degradation of chemical and biological protection, the structure of the liposome stability, enhancing drug accumulation in tumor cells, thereby enhancing the antitumor effect.

【技術實現步驟摘要】
硫酸長春新堿脂質體及制備方法和應用
本專利技術涉及用于癌癥的給藥系統，更具體地說，涉及一種硫酸長春新堿脂質體及制備方法和應用。
技術介紹
硫酸長春新堿(vincristinesulfate，VCR)是夾竹桃科植物長春花生物堿類的細胞周期特異性抗腫瘤藥物，抗腫瘤作用靶點是微管，主要抑制微管蛋白的聚合而影響紡錘體微管的形成，使有絲分裂停止于中期。和其它長春花生物堿類一樣，VCR對于許多淋巴組織的惡性腫瘤，包括侵襲性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴細胞白血病，有著很好的治療效果。臨床主要應用于急性白血病、惡性淋巴瘤、神經母細胞瘤、慢性淋巴細胞白血病等疾病的治療。雖然VCR抗腫瘤效果好，但VCR制劑體內代謝迅速、半衰期短、神經毒性大、胃腸道反應和骨髓抑制作用嚴重，VCR在臨床上的應用受到限制。因此，迫切需要研發新型靶向藥物制劑，降低VCR的毒副作用、提高白血病的治療效果。脂質體(Liposome)，由磷脂或其他類脂化合物形成的具有雙分子層結構的封閉囊泡，是一種性質穩定、在血液循環中具有長效半衰期的非病毒載體。將抗腫瘤藥物包封在脂質體中，不僅可以保護藥物在進入病灶部位前免受機體酶的分解，延長藥物循環時間，增加藥物在病灶部位的濃度和作用時間，提高療效，降低毒性；而且和其它傳遞系統相比，脂質體能夠提供優越的生物相溶性、生物可降解性、低毒性、尺寸可控性及表面功能可修飾性。雖然硫酸長春新堿的脂質體制劑傳遞藥物的高效性，降低了硫酸長春新堿的毒副作用，增強了癌癥的治療效果。但是以傳統的卵磷脂、膽固醇制備的常規脂質體在體內多被網狀內皮系統(reticuloendothelialsystem，RES)吞噬，在血液循環中駐留時間較短，并且其物理化學穩定性差，儲存和應用過程中容易發生融合聚集，包封藥物容易泄漏，難以抵抗體內的化學和生物的降解，因而也不適于制備尺寸較小的納米顆粒。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題在于，針對常規磷脂制備的硫酸長春新堿脂質體穩定性不高的缺陷，提供一種使用鞘磷脂制備的硫酸長春新堿脂質體及制備方法和應用。本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是：構造一種硫酸長春新堿脂質體，由硫酸長春新堿以及使用鞘磷脂制備的納米脂質體組成，其中所述硫酸長春新堿包裹在所述納米脂質體中。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體中，所述使用鞘磷脂制備的納米脂質體包括鞘磷脂、磷脂穩定劑和膽固醇類成分；其中，所述磷脂穩定劑選自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一種或多種。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體中，所述硫酸長春新堿脂質體的粒徑為100-120nm。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體中，所述硫酸長春新堿脂質體還包括通過化學鍵連接在所述納米脂質體上用于特異識別腫瘤細胞的核酸適配體；所述核酸適配體為sgc8、A10、S2.2、AS1411或TLS11a。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體中，優選地，所述核酸適配體為sgc8，使用鞘磷脂制備的納米脂質體包括以下成分：鞘磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、膽固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯物。本專利技術還提供了一種硫酸長春新堿脂質體的制備方法，該制備方法包括：S1、將鞘磷脂、膽固醇類成分和磷脂穩定劑按摩爾比為50-60：35-45：4-6溶解在有機溶劑中制備空白脂質體；S2、使用步驟S1的空白脂質體制備包裹硫酸長春新堿的脂質體；S3、將核酸適配體連接至包裹硫酸長春新堿的脂質體上，制備硫酸長春新堿脂質體。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體的制備方法中，所述步驟S1具體為：將鞘磷脂成分、膽固醇類成分和磷脂穩定劑按摩爾比為50-60：35-45：4-6溶解在氯仿中的混合，在50-70℃下以轉速為100-200rpm/min旋轉并抽真空形成干燥的脂質薄膜，去除有機溶劑；所述脂質薄膜分散在枸櫞酸緩沖液中，在液氮和50-60℃水浴反復凍融多次，并經過粒徑篩選后得到空白脂質體。在根據本專利技術所述的硫酸長春新堿脂質體的制備方法中，所述步驟S1中將鞘磷脂、膽固醇類成分、磷脂穩定劑和功能性磷脂按摩爾比為50-60：35-45：4-5：0.2-0.4溶解在有機溶劑中制備空白脂質體；且所述方法還包括：S3、在步驟S2制備的硫酸長春新堿脂質體的溶液中按照核酸適配體sgc8和功能性磷脂的摩爾比為1：5-1：10加入核酸適配體sgc8，氮氣保護環境下室溫反應，并透析洗滌多余的功能性磷脂、硫酸長春新堿和核酸適配體sgc8，得到連接核酸適配體sgc8的硫酸長春新堿脂質體。本專利技術還提供了一種治療和/或預防腫瘤藥物，該治療和/或預防腫瘤藥物的活性成分為如前所述的硫酸長春新堿脂質體。本專利技術還提供了如前所述的硫酸長春新堿脂質體在治療和/或預防腫瘤中的應用。實施本專利技術的硫酸長春新堿脂質體及制備方法和應用，具有以下有益效果：本專利技術使用鞘磷脂來制備納米脂質體，并包裹硫酸長春新堿得到硫酸長春新堿脂質體，其中鞘磷脂含有較多的酰胺鍵能夠更好地抵抗化學和生物的降解，保護脂質體結構的穩定，提高腫瘤細胞的藥物富集量，從而提高抗腫瘤效果。附圖說明下面將結合附圖及實施例對本專利技術作進一步說明，附圖中：圖1為根據本專利技術優選實施例的硫酸長春新堿脂質體的制備方法圖；圖2為根據本專利技術優選實施例的硫酸長春新堿脂質體的結構示意圖；圖3A-C分別為根據本專利技術優選實施例的硫酸長春新堿脂質體各個階段顆粒的透射電鏡圖；圖4為根據本專利技術優選實施例的硫酸長春新堿脂質體各個階段顆粒的粒徑分布圖；圖5為CEM細胞與sgc8/VCR-Lipo和VCR-Lipo的結合實驗圖；圖6為荷瘤小鼠在不同的存活率時距接種腫瘤的時間圖；圖7為不同處理的荷瘤BalB/c裸鼠的腫瘤大小圖；圖8為硫酸長春新堿脂質體的體內靶向作用圖。具體實施方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。本專利技術提供了一種硫酸長春新堿脂質體，由硫酸長春新堿以及使用鞘磷脂制備的納米脂質體組成，其中硫酸長春新堿包裹在納米脂質體中。本專利技術中主要用鞘磷脂制備納米脂質體，其成分包括鞘磷脂、磷脂穩定劑和膽固醇類成分。其中鞘磷脂作為一種磷脂，與膽固醇類成分一起共同構成脂質體的基礎物質。該膽固醇類成分選自膽固醇及其衍生物、膽甾烷、膽酸和膽汁酸中的一種或多種。膽固醇類成分具有調節膜流動性的作用，因此被稱為脂質體的“流動性緩沖劑”。磷脂主要由一個磷酸基團和一個季銨鹽基團組成的親水性基團，以及由兩個較長的烴基組成的親脂性基團。使用的磷脂類可以是天然磷脂，也可以是合成磷脂。天然磷脂主要以卵磷脂，又名磷脂酰膽堿(PC)為主，主要來源于蛋黃磷脂和大豆磷脂，顯中性。合成磷脂主要有二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)等，這些均屬氫化磷脂類。本專利技術中選用鞘磷脂(sphingomyelin)來替代常規的磷脂，這是因為鞘磷脂含有較多的酰胺鍵連接的脂肪鏈，能更好地抵抗化學和生物的降解，保護脂質體結構的穩定。前述磷脂穩定劑也稱為mPEG化磷脂或mPEG磷脂，其加入可使由鞘磷脂和膽固醇類成分構成的普通脂質體成為空間穩運脂質體、隱形脂質體或長循環本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，由硫酸長春新堿以及使用鞘磷脂制備的納米脂質體組成，其中所述硫酸長春新堿包裹在所述納米脂質體中。

【技術特征摘要】
1.一種硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，由硫酸長春新堿以及使用鞘磷脂制備的納米脂質體組成，其中所述硫酸長春新堿包裹在所述納米脂質體中。2.根據權利要求1所述的硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，所述使用鞘磷脂制備的納米脂質體包括鞘磷脂、磷脂穩定劑和膽固醇類成分；其中，所述磷脂穩定劑選自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一種或多種；所述膽固醇類成分選自膽固醇及其衍生物、膽甾烷、膽酸和膽汁酸中的一種或多種。3.根據權利要求1所述的硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，所述硫酸長春新堿脂質體的粒徑為100-120nm。4.根據權利要求1所述的硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，所述硫酸長春新堿脂質體還包括通過化學鍵連接在所述納米脂質體上用于特異識別腫瘤細胞的核酸適配體；所述核酸適配體為sgc8、A10、S2.2、AS1411或TLS11a。5.根據權利要求4所述的硫酸長春新堿脂質體，其特征在于，所述核酸適配體為sgc8，使用鞘磷脂制備的納米脂質體包括以下成分：鞘磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、膽固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯物。6.一種硫酸長春新堿脂質體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：S1、將鞘磷脂、膽固醇類成分和磷脂穩定劑按摩爾比為50-60：35-45：4-6溶解在有機溶劑中制...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙永祥，盧小玲，
申請(專利權)人：廣西醫科大學，
類型：發明
國別省市：廣西,45