一種植物病害生物防治菌株的篩選方法技術

本發明專利技術公開了一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，所述篩選方法包括如下步驟：S1.于27?29℃將植物種子置于清水中浸泡3?5小時；同時培養生物防治候選菌株獲得新鮮的細菌菌液或真菌孢子；S2.將浸泡后的植物種子使用1?2％羥甲基纖維素鈉(W/V)膠體處理后稍干燥，再蘸取所述生物防治候選菌株的細菌菌液或真菌孢子液，將帶有菌液或者孢子液的植物種子于27?29℃培養至長出子葉和根，然后光照培養得到備用植物幼苗；S3.將植物幼苗移植到滅菌培養基中培養，培養40?50小時后接種植物病害病原菌繼續培養15?25天；根據植物病害的發生發展情況來篩選防效較高的生物防治菌株。本公開的篩選方法能夠簡便、快速地篩選出具有應用前景的生物防治菌株。

Screening method for plant disease biological control strain

The invention discloses a screening method of Plant Disease Biocontrol Strains, the screening method comprises the following steps: 27 S1. to 29 DEG C soaking seeds in water for 5 hours and 3; cultivation of biological control candidate strains for fresh bacteria or fungi spores; S2. plant seeds after soaking the use of 1 2% sodium carboxymethyl cellulose (W/V) colloidal processing after slightly dry, then dipped in the biological control of candidate strains bacteria or fungal spores, plant seeds with bacteria or spores in 27 cultured to grow 29 DEG C, son of Ye Hegen, and then the light culture reserve plant seedling; S3. will plant seedlings transplanted to the sterilization medium, cultured for 40 50 hours after inoculation of plant pathogens cultured for 15 days to 25; screening control effect is according to the development of plant diseases High biological control strains. The screening method described in this paper can easily and rapidly screen the biocontrol bacteria with potential applications.

【技術實現步驟摘要】
一種植物病害生物防治菌株的篩選方法
本公開涉及生物
，具體地，涉及一種植物病害生物防治菌株的篩選方法。
技術介紹
環境污染和農產品農藥殘留超標是當前社會普遍關注的重要和熱點問題，對人民生活具有重要影響。應用微生物菌株防治農作物病蟲害是減輕環境污染，生產有機、綠色食品的有效途徑。但目前能夠大規模應用的生物農藥或技術明顯不夠，還不能滿足國家替換或大量減少化學農藥施用的需求。高效生物防治菌株是大規模應用的生物農藥創制的關鍵，因此，快速有效地篩選獲得能夠開發應用的生物防治菌株的技術或方法具有重要價值。目前對于植物病害生物防治菌株的篩選，國內外一般都采用離體抑菌作用作為初篩，然后再通過盆栽防病試驗進行復篩，再通過田間試驗進行再篩確定。該篩選程序的最大優點是初篩簡單、快速、成本低。但是大量篩選的實踐證明，初篩結果與盆栽試驗結果、田間實驗結果相關性不強。主要表現在初篩抑菌效果好的菌株，盆栽試驗、田間試驗效果并不一定好，甚至沒有效果。而有的離體抑菌效果不好或沒有效果的菌株，盆栽試驗、田間試驗效果反而很好。導致這些結果的原因研究發現與菌株在環境中的定殖能力密切相關，離體拮抗效果好的菌株，有些在環境中的定殖并不好，導致防病效果不好。另外，近年研究發現，有些菌株具有誘導植物抗病的能力，這就涉及到了植物、生防菌、病原菌三者之間的關系，離體篩選只涉及到生防菌與病原菌二者之間的關系，故不能很好地反映出生防菌株的防治潛力。基于以上原因，有些研究者提出采用盆栽試驗代替離體篩選，該方法篩選獲得的菌株一般與田間試驗效果相關性較好。但是，盆栽試驗工作量大，試驗時間長，對于大量菌株的篩選并不適用。因為現在要獲得一株具有開發應用潛力的菌株，通常需篩選成千上萬株候選菌株，故該方法不能滿足大量篩選的要求。因此，研究開發出能夠簡便、快速的生物防治菌株篩選方法具有重要價值。
技術實現思路
本公開的目的是提供一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，該方法可以簡便快速地篩選出生物防治潛力菌株。為了實現上述目的，本公開提供了一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，所述篩選方法包括如下步驟：S1.于27-29℃將植物種子置于清水中浸泡3-5小時；同時培養生物防治候選菌株獲得新鮮的細菌菌液或者真菌孢子；S2.將所述浸泡后的植物種子使用1-2％羥甲基纖維素鈉(W/V)膠體處理后稍干燥，所述干燥后的植物種子蘸取所述生物防治候選菌株的細菌菌液或者真菌孢子液，將所述帶有菌液或者孢子液的植物種子于鋪有紗布的培養皿中27-29℃培養至長出子葉和根，然后光照培養得到備用植物幼苗；S3.將所述植物幼苗移植到滅菌培養基中培養，培養40-50小時后接種植物病害病原菌繼續培養15-25天；然后根據植物病害的發生發展情況來篩選防效較高的生物防治菌株。通過上述技術方案，本公開提供的生物防治菌株的篩選方法可以有效減少菌株篩選的工作量，同時篩選大批量的菌株并且簡便可靠，通過本公開方法篩選出的高防效菌株在盆栽試驗中的防治效果普遍較好，具有開發應用的潛力。本公開的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。具體實施方式以下對本公開的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本公開，并不用于限制本公開。本公開提供了一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，所述篩選方法包括如下步驟：S1.于27-29℃將植物種子置于清水中浸泡3-5小時；同時培養生物防治候選菌株獲得新鮮的細菌菌液或者真菌孢子；S2.將所述浸泡后的植物種子使用1-2％羥甲基纖維素鈉(W/V)膠體處理后稍干燥，所述干燥后的植物種子蘸取所述生物防治候選菌株的細菌菌液或者真菌孢子液，將所述帶有菌液或者孢子液的植物種子于鋪有紗布的培養皿中27-29℃培養至長出子葉和根，然后光照培養得到備用植物幼苗；S3.將所述植物幼苗移植到滅菌培養基中培養，培養40-50小時后接種植物病害病原菌繼續培養15-25天；然后根據植物病害的發生發展情況來篩選防效較高的生物防治菌株。通過上述技術方案，本公開提供的生物防治菌株的篩選方法可以有效減少菌株篩選的工作量，同時篩選大批量的菌株并且簡便可靠，通過本公開方法篩選出的高防效菌株在盆栽試驗中的防治效果較好，具有開發應用的潛力。優選地，為了使菌株具有較好的活力，有利于菌株的存活，步驟S1中，所述新鮮的細菌菌液為于26-30℃的液體培養基中100-300rpm振蕩培養1-3天的候選生物防治細菌菌液，所述新鮮的真菌孢子為通過將候選生物防治真菌接種于PDA培養基上并直接收集產生的孢子得到的。優選地，步驟S3中，所述滅菌培養基為半量MS培養基，該培養基適合于植物幼苗的生長，適用于本篩選方法。優選地，步驟S3中，所述培養溫度為25-28℃，該溫度下有利于植物幼苗的生長和病害的發生、發展。優選地，所述植物病害病原菌為真菌，本公開所述的生物防治菌株的篩選方法尤其適用于植物病害病原菌為真菌的情況。優選地，所述真菌為于27-29℃且液體培養基中100-200rpm振蕩培養2-4天的植物病原真菌。優選地，所述液體培養植物病原真菌的用量為每試管苗1-2mL，有利于生物防治菌株的篩選。優選地，所述植物為黃瓜；更優選地，所述黃瓜為中農6號。中農6號品種的黃瓜植株是易感黃瓜枯萎病的黃瓜品種，發病癥狀明顯，有利于生物防治菌株的篩選。優選地，所述植物病害病原菌為黃瓜枯萎病菌。下面通過實施例進一步闡述本公開，但是需要理解的是本公開并不因此受到限制。本公開中所使用黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxsporum)菌株來源于感染了黃瓜枯萎病菌的黃瓜植株。選取黃瓜枯萎病癥狀明顯的黃瓜植株根莖部，切取病健交界部小塊組織培養分離純化得到黃瓜枯萎病菌株，對其進行致病性試驗發現該黃瓜枯萎病菌株的致病性極強，用于本公開中生物防治菌株的篩選。實施例1本實施例為本公開篩選方法用于黃瓜枯萎病(F.oxsporum)的生物防治菌株的篩選，黃瓜枯萎病菌(F.oxsporum)為黃瓜的致病性真菌。本實施例中所述生物防治候選菌株共300株，分為3次篩選，每次100株；所用的篩選植物為黃瓜，品種為中農6號(購自中國農業科學院蔬菜花卉研究所公司)。其具體步驟如下：將中農6號的黃瓜種子溫水洗凈后，于28℃將黃瓜種子在清水中浸泡4小時；在種子浸泡期間，培養生物防治候選真菌菌株獲得新鮮的真菌孢子；所述黃瓜枯萎病生物防治候選真菌菌株300株，分別使用菌塊接種于PDA固體培養基上培養7天至產孢備用。將經過清水浸泡后的黃瓜種子使用1％羥甲基纖維素鈉(W/V)處理后稍干燥，所述干燥后的黃瓜種子分別蘸取所述生物防治候選真菌菌株的孢子液，每菌株使用5粒黃瓜種子以重復試驗減小誤差；將所述帶有孢子液的植物種子分別置于鋪有紗布的培養皿，所述紗布和培養皿均為無菌，期間滴加滅菌水保濕；所述黃瓜種子于28℃培養4天至長出子葉和根，然后自然光照培養得到備用黃瓜幼苗。將攜帶有候選生物防治菌株的各黃瓜幼苗分別移植到規格100×10mm的試管中并且在自然光下、25-28℃培養2天，試管中裝有10mL半量MS培養基；然后向試管內加入1mL的黃瓜枯萎病菌菌液，所述黃瓜枯萎病菌菌液為接種黃瓜枯萎病菌于28℃、PD液體培養基中，150rpm振蕩培養3天的新鮮黃瓜枯萎病菌；黃瓜幼苗接本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，其特征在于，所述篩選方法包括如下步驟：S1.于27?29℃將植物種子置于清水中浸泡3?5小時；同時培養生物防治候選菌株獲得新鮮的細菌菌液或者真菌孢子；S2.將所述浸泡后的植物種子使用1?2％羥甲基纖維素鈉(W/V)膠體處理后稍干燥，所述干燥后的植物種子蘸取所述生物防治候選菌株的細菌菌液或者真菌孢子液，將所述帶有菌液或者孢子液的植物種子于鋪有紗布的培養皿中27?29℃培養至長出子葉和根，然后光照培養得到備用植物幼苗；S3.將所述植物幼苗移植到滅菌培養基中培養，培養40?50小時后接種植物病害病原菌繼續培養15?25天；然后根據植物病害的發生發展情況來篩選防效較高的生物防治菌株。

【技術特征摘要】
1.一種植物病害生物防治菌株的篩選方法，其特征在于，所述篩選方法包括如下步驟：S1.于27-29℃將植物種子置于清水中浸泡3-5小時；同時培養生物防治候選菌株獲得新鮮的細菌菌液或者真菌孢子；S2.將所述浸泡后的植物種子使用1-2％羥甲基纖維素鈉(W/V)膠體處理后稍干燥，所述干燥后的植物種子蘸取所述生物防治候選菌株的細菌菌液或者真菌孢子液，將所述帶有菌液或者孢子液的植物種子于鋪有紗布的培養皿中27-29℃培養至長出子葉和根，然后光照培養得到備用植物幼苗；S3.將所述植物幼苗移植到滅菌培養基中培養，培養40-50小時后接種植物病害病原菌繼續培養15-25天；然后根據植物病害的發生發展情況來篩選防效較高的生物防治菌株。2.根據權利要求1所述的篩選方法，其中，步驟S1中，所述新鮮的細菌菌液為于26-30℃的液體培養基中100-300rpm振蕩培養20-30小時的候選生...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣細良，李梅，吳蓓蕾，馬景，陳孝利，
申請(專利權)人：中國農業科學院植物保護研究所，
類型：發明
國別省市：北京,11