DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法。該DNA包被液由硫酸銨、氯化鈉和水組成。本發(fā)明專利技術(shù)DNA包被液可以快速將DNA通過化學(xué)鍵結(jié)合的方式附在聚苯乙烯板的表面用于雜交，可以有效地將DNA包被于微平板和微量樣品管等固相載體表面，用于后續(xù)的雜交試驗(yàn)。且該DNA包被液組成簡單，成本低，易于大量配制，適合大規(guī)模的生產(chǎn)應(yīng)用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法
本專利技術(shù)涉及生物
，特別涉及DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法。
技術(shù)介紹
將核酸或抗原抗體固定在固相載體表面的過程稱為包被。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈，75cm照射12小時)，以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定，但是這種方法比較繁瑣，而且費(fèi)用較高，費(fèi)時費(fèi)力，不適合大規(guī)模的生產(chǎn)應(yīng)用。目前，DNA包被時采用的包被緩沖液有PBS緩沖液、CBS緩沖液、tris鹽緩沖液、咪脞緩沖液。但這些普通的包被液有如下缺點(diǎn)：①DNA包被過程中孵育時間長，DNA包被到聚苯乙烯板表面后不夠穩(wěn)定，保存時間相對較短。②聚苯乙烯載體不易吸附DNA，需要對聚苯乙烯板進(jìn)行處理，過程比較繁瑣，而且效果得不到很好的保證。③耗費(fèi)的時間流程太長，聚苯乙烯板的處理導(dǎo)致成本較高。因此，需要提供一種包被效率高、穩(wěn)定性好的DNA包被液。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
有鑒于此，本專利技術(shù)提供了DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法。本專利技術(shù)解決了微孔板包被DNA效率低，費(fèi)用高的問題降低了人工成本和能源消耗，這種高效的DNA包被液可以快速將DNA通過化學(xué)鍵結(jié)合的方式附在聚苯乙烯板的表面用于雜交，可以有效地將DNA包被于微平板和微量樣品管表面。為了實(shí)現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案：本專利技術(shù)提供了一種DNA包被液，由硫酸銨、氯化鈉和水組成。本專利技術(shù)DNA包被液可以快速將DNA通過化學(xué)鍵結(jié)合的方式附在聚苯乙烯板的表面用于雜交，可以有效地將DNA包被于固相載體表面，用于后續(xù)的雜交試驗(yàn)。作為優(yōu)選，以質(zhì)量百分比計(jì)，該DNA包被液中各組分用量為：硫酸銨42.0％～43.0％，氯化鈉0.5％～0.8％，水補(bǔ)足。在本專利技術(shù)提供的一具體實(shí)施例中，以質(zhì)量百分比計(jì)，DNA包被液中各組分用量為：硫酸銨42.0％，氯化鈉0.6％，水補(bǔ)足。在本專利技術(shù)提供的另一具體實(shí)施例中，以質(zhì)量百分比計(jì)，DNA包被液中各組分用量為：硫酸銨42.5％，氯化鈉0.8％，水補(bǔ)足。在本專利技術(shù)提供的另一具體實(shí)施例中，以質(zhì)量百分比計(jì)，DNA包被液中各組分用量為：硫酸銨43.0％，氯化鈉0.5％，水補(bǔ)足。作為優(yōu)選，該DNA包被液的pH值為6.0～6.2。在本專利技術(shù)提供的實(shí)施例中，DNA包被液的pH值為6.1。本專利技術(shù)還提供了該DNA包被液的制備方法，包括：將硫酸鈉、氯化鈉溶解于水中，調(diào)節(jié)pH值至6.0～6.2，過濾除菌。作為優(yōu)選，調(diào)節(jié)pH值采用的試劑為硫酸或氨水。本專利技術(shù)還提供了一種DNA的包被方法，包括：采用本專利技術(shù)提供的DNA包被液作為緩沖液，將DNA樣品與固相載體進(jìn)行孵育。作為優(yōu)選，孵育的溫度為15～30℃，孵育的時間為15～25h。在本專利技術(shù)提供的實(shí)施例中，孵育的溫度為室溫，孵育的時間為20h。作為優(yōu)選，固相載體為聚苯乙烯固相載體。在本專利技術(shù)提供的實(shí)施例中，固相載體為聚苯乙烯微平板或微量樣品管。本專利技術(shù)還提供了一種原位雜交方法，包括如下步驟：采用本專利技術(shù)的DNA包被液作為緩沖液，將DNA樣品與固相載體進(jìn)行孵育；去除緩沖液，將包被有DNA的固相載體進(jìn)行干燥；將特定標(biāo)記的探針與包被有DNA的固相載體進(jìn)行孵育；檢測目的DNA。作為優(yōu)選，干燥為在10％濕度條件下干燥3h。本專利技術(shù)提供了DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法。該DNA包被液由硫酸銨、氯化鈉和水組成。本專利技術(shù)至少具有如下有益效果之一：1、本專利技術(shù)DNA包被液可以快速將DNA通過化學(xué)鍵結(jié)合的方式附在聚苯乙烯板的表面用于雜交，可以有效地將DNA包被于微平板和微量樣品管等固相載體表面，用于后續(xù)的雜交試驗(yàn)。2、本專利技術(shù)DNA包被液組成簡單，成本低，易于大量配制，適合大規(guī)模的生產(chǎn)應(yīng)用。具體實(shí)施方式本專利技術(shù)公開了DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本專利技術(shù)。本專利技術(shù)的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本專利技術(shù)技術(shù)。術(shù)語解釋：包被：將核酸或者抗原抗體固定在微孔板上的過程稱為包被，換言之，包被即是核酸或者抗原抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。DNA：脫氧核糖核酸，又稱去氧核糖核酸，是一種生物大分子，可組成遺傳指令，引導(dǎo)生物發(fā)育與生命機(jī)能運(yùn)作。主要功能是信息儲存，可比喻為“藍(lán)圖”或“食譜”。其中包含的指令，是建構(gòu)細(xì)胞內(nèi)其他的化合物如蛋白質(zhì)與核糖核酸所需。帶有蛋白質(zhì)編碼的DNA片段稱為基因。本專利技術(shù)提供的DNA包被液及其制備方法和DNA包被方法中所用試劑均可由市場購得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本專利技術(shù)：實(shí)施例1DNA包被液的制備本實(shí)施例中DNA包被液的配方如下：制備方法為：硫酸銨、氯化鈉、水按照上述質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合溶解，調(diào)pH為6.1，過濾除菌。實(shí)施例2DNA包被液的制備本實(shí)施例中DNA包被液的配方如下：制備方法為：硫酸銨、氯化鈉、水按照上述質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合溶解，調(diào)pH為6.0，過濾除菌。實(shí)施例3DNA包被液的制備本實(shí)施例中DNA包被液的配方如下：制備方法為：硫酸銨、氯化鈉、水按照上述質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合溶解，調(diào)pH為6.2，過濾除菌。試驗(yàn)例1雜交試驗(yàn)微孔板：NUNCMaxisorp微孔板。試驗(yàn)方法：合成一段引物：5’-CACTTCACTTTCTTTCCAAGAG-3’，把上述引物分別與實(shí)施例1制備的DNA包被液、PBS、CBS、tris鹽緩沖液、咪脞緩沖液混合均勻，每孔100μL加入到NUNC微孔板中，室溫放置20h，棄掉孔內(nèi)液體，微孔板在10％濕度下干燥3h保存，然后進(jìn)行雜交試驗(yàn)，首先加入預(yù)放大分子本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種DNA包被液，其特征在于，由硫酸銨、氯化鈉和水組成。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種DNA包被液，其特征在于，由硫酸銨、氯化鈉和水組成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA包被液，其特征在于，以質(zhì)量百分比計(jì)，各組分用量為：硫酸銨42.0％～43.0％，氯化鈉0.5％～0.8％，水補(bǔ)足。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的DNA包被液，其特征在于，所述DNA包被液的pH值為6.0～6.2。4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述DNA包被液的制備方法，其特征在于，包括：將硫酸鈉、氯化鈉溶解于水中，調(diào)節(jié)pH值至6.0～6.2，過濾除菌。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述調(diào)節(jié)pH值采用的試劑為硫酸或氨水。6.一種DNA的包被方法，其特征在于，包括：采用權(quán)利要求1至3...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張鷺鷺，李先坤，張愛國，
申請(專利權(quán))人：鄭州艾斯亞生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：河南,41