一種抗腫瘤海蟑螂提取物及其制備工藝與檢測方法與用途技術

本發明專利技術屬于天然藥物領域，涉及一種海蟑螂提取物及其制備工藝及其檢測方法與用途。該海蟑螂提取物是采用超微粉碎、仿生提取、高壓脈沖電場提取以及大孔吸附樹脂進行柱層析分離純化等步驟制成的。該方法制備的海蟑螂提取物中不僅腺苷質量多，而且純度高。本發明專利技術還提供了采用高效液相色譜儀對該海蟑螂提取物中腺苷進行含量測定的方法。本發明專利技術還提供了該海蟑螂提取物注射液以及該注射液的制備方法及其制藥用途。

Anti-tumor sea cockroach extract and its preparation process and detection method and use

The invention belongs to the field of natural medicine, relating to a sea cockroach extract and a preparation process thereof, and a detection method and use thereof. The sea cockroach extract is made by superfine grinding, bionic extraction, high voltage pulsed electric field extraction and macroporous adsorption resin for column chromatography separation and purification. The prepared sea cockroach extract not only has high quality of adenosine, but also has high purity. The invention also provides a method for determining the content of adenosine in the extract of the sea cockroach by adopting a high performance liquid chromatograph. The invention also provides the sea cockroach extract injection, the preparation method of the injection and the pharmaceutical use thereof.

【技術實現步驟摘要】
一種抗腫瘤海蟑螂提取物及其制備工藝與檢測方法與用途
：本專利技術屬于天然藥物領域，具體涉及一種海蟑螂提取物及其制備方法與檢測方法。技術背景：海洋生物海蟑螂Ligiaexotica(Roux)又名海蛆、海岸水虱，屬節肢動物門，甲殼綱，海蟑螂科，廣泛分布于我國沿海各地，是一種長年生活在海岸邊的水陸兩棲動物。民間作為藥物用于小兒疳積、癬、跌打損傷、疽癰初起等癥。卞俊等研究，海蟑螂提取物具有一定的抗腫瘤活性。本專利技術的專利技術人對海蟑螂已經進行了多年的研究，在對海蟑螂多年的持續研究中意外發現了一種獨特的海蟑螂提取物，該提取物能夠非常有效地提高海蟑螂提取物的抗腫瘤效果。
技術實現思路
：本專利技術的目的是提供一種海蟑螂提取物。本專利技術的另一目的是提供該海蟑螂提取物的制備方法。本專利技術的另一目的是提供該海蟑螂提取物含量測定方法。本專利技術還提供了該海蟑螂提取物的注射劑藥物劑型及其制備方法。本專利技術還提供了該海蟑螂提取物注射液在制備治療抗腫瘤藥物中的應用。本專利技術還提供了該海蟑螂提取物在制備治療腫瘤藥物中的應用。本專利技術的目的是通過以下方式實現的：一種海蟑螂提取物，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內25℃～35℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為700～900kPa，進料速度為170～190r·min-1，分級頻率為35～45Hz，粉碎時間為15～25min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入25～35倍量的仿生提取溶媒，35～40℃水浴加熱，攪拌提取0.5～2h，離心10～30min，離心速度2700～2900r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.1％～0.3％氯化鈉、0.2％～0.4％胃蛋白酶、0.2％～0.4％胰蛋白酶及0.01mol·L-1～0.03mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度25～35kV/cm，脈沖數35～45，溫度30～40℃，料液比為1g：30～40mL，加入濃度為80～90％的乙醇作為提取液，提取40～50min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：10～12，上樣體積10BV～12BV，水洗8BV～10BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：4～6的洗脫劑10BV～14BV洗脫，流速為2BV/h～4BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物。該海蟑螂提取物優選采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內30℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為800kPa，進料速度為180r·min-1，分級頻率為30Hz，粉碎時間為20min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入30倍量的仿生提取溶媒，37℃水浴加熱，攪拌提取1h，離心20min，離心速度2800r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.2％氯化鈉、0.3％胃蛋白酶、0.3％胰蛋白酶及0.02mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度30kV/cm，脈沖數40，溫度35℃，料液比為1g：35mL，加入濃度為85％的乙醇作為提取液，提取45min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：11，上樣體積11BV，水洗9BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：5的洗脫劑12BV洗脫，流速為3BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物。一種海蟑螂提取物的檢測方法，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內30℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為800kPa，進料速度為180r·min-1，分級頻率為30Hz，粉碎時間為20min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入30倍量的仿生提取溶媒，37℃水浴加熱，攪拌提取1h，離心20min，離心速度2800r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.2％氯化鈉、0.3％胃蛋白酶、0.3％胰蛋白酶及0.02mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度30kV/cm，脈沖數40，溫度35℃，料液比為1g：35mL，加入濃度為85％的乙醇作為提取液，提取45min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：11，上樣體積11BV，水洗9BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：5的洗脫劑12BV洗脫，流速為3BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物；采用高效液相色譜法測定海蟑螂提取物中的腺苷含量：(1)色譜條件：色譜柱：采用C18柱，流動相：體積比為70：20：10的2％磷酸二氫鈉-乙腈-甲醇溶液，流速0.5mL/min；柱溫35℃；檢測波長465nm；(2)樣品溶液制備：準確稱取25.00mg的海蟑螂提取物溶于50.00mL的2％鹽酸甲醇溶液中，超聲15min，將溶液用0.22μm濾膜過濾，收集濾液，即得樣品溶液；(3)標準品溶液制備：將腺苷標準品1.00mg溶于1.00mL2％鹽酸甲醇溶液中，配成1mg/mL的標準品溶液；(4)測定：精密吸取樣品溶液、標準品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀，進行測定。所述的海蟑螂提取物，采用藥學中常規的制藥方法制備成注射劑。所述的海蟑螂提取物注射劑的制備方法為：(1)將海蟑螂置烘箱內25℃～35℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為700～900kPa，進料速度為170～190r·min-1，分級頻率為35～45Hz，粉碎時間為15～25min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入25～35倍量的仿生提取溶媒，35～40℃水浴加熱，攪拌提取0.5～2h，離心10～30min，離心速度2700～2900r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.1％～0.3％氯化鈉、0.2％～0.4％胃蛋白酶、0.2％～0.4％胰蛋白酶及0.01mol·L-1～0.03mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度25～35kV/cm，脈沖數35～45，溫度30～40℃，料液比為1g：30～40mL，加入濃度為80～90％的乙醇作為提取液，提取本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種海蟑螂提取物，其特征在于，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內25℃～35℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為700～900kPa，進料速度為170～190r·min

【技術特征摘要】
1.一種海蟑螂提取物，其特征在于，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內25℃～35℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為700～900kPa，進料速度為170～190r·min-1，分級頻率為35～45Hz，粉碎時間為15～25min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入25～35倍量的仿生提取溶媒，35～40℃水浴加熱，攪拌提取0.5～2h，離心10～30min，離心速度2700～2900r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.1％～0.3％氯化鈉、0.2％～0.4％胃蛋白酶、0.2％～0.4％胰蛋白酶及0.01mol·L-1～0.03mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度25～35kV/cm，脈沖數35～45，溫度30～40℃，料液比為1g：30～40mL，加入濃度為80～90％的乙醇作為提取液，提取40～50min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：10～12，上樣體積10BV～12BV，水洗8BV～10BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：4～6的洗脫劑10BV～14BV洗脫，流速為2BV/h～4BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物。2.如權利要求1所述的海蟑螂提取物，其特征在于，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內30℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為800kPa，進料速度為180r·min-1，分級頻率為30Hz，粉碎時間為20min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入30倍量的仿生提取溶媒，37℃水浴加熱，攪拌提取1h，離心20min，離心速度2800r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.2％氯化鈉、0.3％胃蛋白酶、0.3％胰蛋白酶及0.02mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度30kV/cm，脈沖數40，溫度35℃，料液比為1g：35mL，加入濃度為85％的乙醇作為提取液，提取45min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：11，上樣體積11BV，水洗9BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：5的洗脫劑12BV洗脫，流速為3BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物。3.一種海蟑螂提取物的檢測方法，該海蟑螂提取物是采用如下方法制備的：(1)將海蟑螂置烘箱內30℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為800kPa，進料速度為180r·min-1，分級頻率為30Hz，粉碎時間為20min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入30倍量的仿生提取溶媒，37℃水浴加熱，攪拌提取1h，離心20min，離心速度2800r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.2％氯化鈉、0.3％胃蛋白酶、0.3％胰蛋白酶及0.02mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度30kV/cm，脈沖數40，溫度35℃，料液比為1g：35mL，加入濃度為85％的乙醇作為提取液，提取45min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：11，上樣體積11BV，水洗9BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：5的洗脫劑12BV洗脫，流速為3BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物；其特征在于，采用高效液相色譜法測定海蟑螂提取物中的腺苷含量：(1)色譜條件：色譜柱：采用C18柱，流動相：體積比為70：20：10的2％磷酸二氫鈉-乙腈-甲醇溶液，流速0.5mL/min；柱溫35℃；檢測波長465nm；(2)樣品溶液制備：準確稱取25.00mg的海蟑螂提取物溶于50.00mL的2％鹽酸甲醇溶液中，超聲15min，將溶液用0.22μm濾膜過濾，收集濾液，即得樣品溶液；(3)標準品溶液制備：將腺苷標準品1.00mg溶于1.00mL2％鹽酸甲醇溶液中，配成1mg/mL的標準品溶液；(4)測定：精密吸取樣品溶液、標準品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀，進行測定。4.如權利要求1～2任意一項所述的海蟑螂提取物，其特征在于，該海蟑螂提取物采用藥學中常規的制藥方法制備成注射劑。5.如權利要求4所述的海蟑螂提取物注射劑，其特征在于，該海蟑螂提取物注射劑的制備方法為：(1)將海蟑螂置烘箱內25℃～35℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓力為700～900kPa，進料速度為170～190r·min-1，分級頻率為35～45Hz，粉碎時間為15～25min，得海蟑螂超微粉A；(2)取步驟(1)所得海蟑螂超微粉A，加入25～35倍量的仿生提取溶媒，35～40℃水浴加熱，攪拌提取0.5～2h，離心10～30min，離心速度2700～2900r/min，分別收集上清液B和沉淀C；上清液B濃縮，得浸膏D，備用，沉淀C備用；上述仿生提取溶媒是由0.1％～0.3％氯化鈉、0.2％～0.4％胃蛋白酶、0.2％～0.4％胰蛋白酶及0.01mol·L-1～0.03mol·L-1鹽酸配制成溶液；(3)取步驟(2)所得沉淀C，進行高壓脈沖電場提取，工藝條件為電場強度25～35kV/cm，脈沖數35～45，溫度30～40℃，料液比為1g：30～40mL，加入濃度為80～90％的乙醇作為提取液，提取40～50min，提取液濾過，濾液回收乙醇，得浸膏E，備用；(4)取步驟(2)所得浸膏D和步驟(3)所得浸膏E合并，混勻，進行柱層析分離；選用D101B型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：10～12，上樣體積10BV～12BV，水洗8BV～10BV除雜，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：4～6的洗脫劑10BV～14BV洗脫，流速為2BV/h～4BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得海蟑螂提取物；(5)取注射用水，加熱至60～80℃，加入步驟(4)所得海蟑螂提取物，溶解，冷藏36～60小時，濾過，取濾液，調pH為6～7，加入活性炭，充分攪拌，吸附后，濾過，取濾液，冷至室溫，超濾，分裝、灌封、滅菌、燈檢，即得海蟑螂提取物注射液。6.如權利要求5所述的海蟑螂提取物注射劑，其特征在于，該海蟑螂提取物注射劑的制備方法為：(1)將海蟑螂置烘箱內30℃烘干，采用氣流粉碎機對干燥的海蟑螂進行超微粉碎，氣流粉碎機的氣流壓...

【專利技術屬性】
技術研發人員：奚志芳，
申請(專利權)人：杭州醫學院，
類型：發明
國別省市：浙江,33