新型澳洲堅果過敏原制造技術

本發明專利技術涉及一種多肽，其包含選自包含下列蛋白質的組的澳洲堅果蛋白：在pH?6.3至8.7于2D?SDS?PAGE中電泳的53至67kDa的蛋白質和在pH?6.5至7.9于2D?SDS?PAGE中電泳的20至25kDa的蛋白質或其抗原性變體，優選在pH?6.3至8.7電泳的53至67kDa的蛋白質或其抗原性變體。

New macadamia nut allergen

The invention relates to a polypeptide comprising the following proteins selected from the group comprising a group of macadamia nut protein in pH 6.3 to 8.7 in 2D SDS electrophoresis in PAGE 53 and 67kDa protein in pH and 6.5 to 7.9 in the 2D SDS PAGE electrophoresis in 20 to 25kDa or its antigenicity variant, preferably in 53 to 6.3 to 8.7 67kDa pH electrophoresis of protein or its antigenic variants.

【技術實現步驟摘要】
新型澳洲堅果過敏原本專利技術涉及一種多肽，其包括選自包含下列蛋白質的組的澳洲堅果蛋白：在pH6.3至8.7于2DSDSPAGE中電泳的53至67kDa的蛋白質和在pH6.5至7.9于2DSDSPAGE中電泳的20至25kDa的蛋白質或其抗原變體，優選在pH6.3至8.7電泳的53至67kDa的蛋白質或其抗原變體。對樹堅果的過敏反應可以是嚴重的和危及生命的。這適用于常見的品種，例如榛子，花生，核桃，也適用于澳洲堅果，其為澳大利亞常青樹(四葉澳洲堅果(Macadamiatetraphylla)和澳洲堅果(M.integrifolia))的果實。澳洲堅果(就植物學而言，其是種子)不像許多其它樹堅果一樣是常見的食物，但其越來越頻繁地被生吃或烘焙食用，并且常常被添加至各種食物例如小吃棒、谷物和混合堅果。碎澳洲堅果膳食正在成為烘焙食品中日益流行的成分，冷壓澳洲堅果油亦如此。絕非少數情況的是，澳洲堅果常常可用作堅果混合物的一部分，并因此在先前不進口其的國家中銷售。在敏化個體中因暴露于澳洲堅果而引起的過敏反應可包括嚴重的癥狀(Pallares,D.E.(2000):Allergytomacadamianut.AnnAllergyAsthmaImmunol2000；85(5):385-6)。因此，患有過敏的受試者知曉過敏原的來源是至關重要的，因為他們需要避免接觸含有任何過敏原或已接觸過任何過敏原的食品、化妝品和其它產品。過敏可以使用常規皮膚點刺試驗來診斷，所述試驗涉及將懷疑患有過敏的受試者的皮膚暴露于潛在致敏性果實的提取物，并用合適的對照進行補充。然而，假陰性結果經常發生，因為某些過敏原可能以不足夠低的濃度存在于這些提取物中(Sicherer,S.H.,Teuber,S.S.(2004):Currentapproachtothediagnosisandmanagementofadversereactionstofoods.JournalofAllergyandClinicalImmunology2004；114.5,1146–50)。另外，特定的過敏原可以在提取物中進行蛋白水解(Rancé,F.,Juchet,A.,Brémont,F.,Dutau,G.(1997):Correlationbetweenskinpricktestsusingcommercialextractsandfreshfoods,specificIgEandfoodchallenges.Allergy1997；52.10,1031–5)。此外，基于全提取物的測定由于交叉反應性而不夠特異。因此，期望基于針對特異性過敏原的抗體例如IgE或IgG的檢測來設計測定。這樣的測定涉及將包含抗體的患者樣品暴露于固定化的過敏原，隨后進行檢測，任選地定量結合至固定化的過敏原的IgE抗體(Volcheck,G.W.(2009):ClinicalAllergy,DiagnosisandManagement)。主要過敏原已在一系列堅果中被鑒定。例如，花生過敏的絕大多數病例與對儲存蛋白Arah2、Arah7和Arah6的敏感性相關。因此，已經設計了基于針對這些過敏原的IgE抗體的檢測的合理可靠的測定(Codreanu,F.,Collignon,O.,Roitel,O.,Thouvenot,B.,Sauvage,C.,Vilain,A.C.,Cousin,M.O.,Decoster,A.,Renaudin,J.M.,Astier,C.,Monnez,J.M.,Vallois,P.,Morisset,M.,Moneret-Vautrin,D.A.,Brulliard,M.,Ogier,V.,Castelain,M.C.,Kanny,G.,Bihain,B.E.,Jacquenet,S.(2011):Anovelimmunoassayusingrecombinantallergenssimplifiespeanutallergydiagnosis.IntArchAllergyImmunol2011；154(3):216-26；EP15075033.9)。相比之下，關于澳洲堅果過敏原的身份的信息非常少。迄今為止，描述用于診斷澳洲堅果過敏的免疫測定的現有技術文獻的作者必須依賴于全堅果提取物或部分純化的提取物。例如，Ghorbani等人進行了基于檢測食品中殘留的澳洲堅果蛋白質的免疫測定(Ghorbani,M.,Morgan,M.R.A.(2010):Proteincharacterisationandimmunochemicalmeasurementsofresidualmacadamianutproteinsinfoodstuffs.FoodAgrImmunol2010；21:347-360)。Herbst等人使用來自引起患者顯示過敏癥狀的單一批次的澳洲堅果的全堅果提取物(Herbst,R.A.,Wahl,R.,Frosch,P.J.(2010):SpecificIgEreactivityandidentificationofpotentialallergensinmacadamiaallergy.JEurAcadDermatolVenereol2010；24(11):1361-3)。Sathe等人報道了從包括澳洲堅果的各種樹堅果制備的全提取物的溶解并將其用于Western印跡中(Sathe,S.K.,Venkatachalam,M.,Sharma,G.M.,Kshirsagar,H.H.,Teuber,S.S.,Roux,K.H.(2009):Solubilizationandelectrophoreticcharacterizationofselectediblenutseedproteins.JAgricFoodChem2009；57(17):7846-56)。在缺乏特異性過敏原的情況下，提供足夠可靠的診斷是不可行的。全堅果提取物或部分純化的提取物與類似于皮膚點刺試驗的缺點的限制(例如不穩定性和不足的特異性，更具體地說是假陰性結果)有關。因此，本專利技術涉及的問題是提供一種用于診斷過敏，優選堅果過敏，更優選澳洲堅果過敏的方法，以及用于這樣的方法的試劑，相較于現有技術測定，所述方法具有改善的診斷可靠性(特別是靈敏度)。本專利技術涉及的另一個問題是提供用于鑒別診斷過敏，優選堅果過敏例如樹堅果過敏的測定，更優選用于區分對澳洲堅果的過敏與對非澳洲堅果的堅果的過敏的測定，和/或用于監測患有這種過敏的個體的治療。本專利技術涉及的另一個問題是提供可用于這樣的測定的試劑，用于制備這樣的試劑的方法和用于這樣的診斷的方法。本專利技術涉及的另一個問題是提供用于治療患有對澳洲堅果的過敏的患者的治療方法和藥物組合物。本專利技術涉及的問題通過所附的獨立和從屬權利要求的主題來解決。在第一方面，本專利技術涉及的問題通過一種多肽來解決，所述多肽包括選自包含下列蛋白質的組的澳洲堅果蛋白：在pH6.3至8.7于2DSDSPAGE中電泳的53至67kDa的蛋白質和在pH6.5至7.9于2DSDSPAGE中電泳的20至25kDa的蛋白質或其變體，優選在pH6.3至8.7電泳的53至67kDa的蛋白質或其變體。所述多肽是來自四葉澳本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種多肽，其包含選自包含下列蛋白質的組的澳洲堅果蛋白：在pH?6.3至8.7于2D?SDS?PAGE中電泳的53至67kDa的蛋白質和在pH?6.5至7.9于2D?SDS?PAGE中電泳的20至25kDa的蛋白質或其變體，優選在pH?6.3至8.7電泳的53至67kDa的蛋白質或其變體。

【技術特征摘要】
2016.01.25 EP 16000165.7;2016.10.20 CN 201610913861.一種多肽，其包含選自包含下列蛋白質的組的澳洲堅果蛋白：在pH6.3至8.7于2DSDSPAGE中電泳的53至67kDa的蛋白質和在pH6.5至7.9于2DSDSPAGE中電泳的20至25kDa的蛋白質或其變體，優選在pH6.3至8.7電泳的53至67kDa的蛋白質或其變體。2.根據權利要求1所述的多肽，其中所述多肽是分離的和/或重組的多肽。3.根據權利要求1至2中任一項所述的多肽，其中所述多肽是融合多肽，優選包含用于檢測或純化的標簽。4.一種核酸，其編碼根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，所述核酸優選在載體中，更優選在細胞中的載體中。5.根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，其中所述多肽是固定化的。6.一種醫療器械，其包含根據權利要求1至3中任一項或權利要求5所述的多肽，其中所述醫療器械優選是診斷上有用的載體，更優選選自包含珠子、測試條、微量滴定板、印跡的組，優選選自包含蛋白質印跡、線印跡和斑點印跡、玻璃表面、載玻片、生物芯片、膜、微陣列、電泳凝膠和微量滴定板的組。7.一種方法，其包括下列步驟：在樣品，優選來自哺乳動物，更優選來自人的樣品中檢測與根據權利要求1所述的多肽結合的抗體，所述方法優選用于診斷堅果過敏，更優選用于診斷澳洲堅果過敏。8.一種治療疾病的方法，其包括下列步驟：向受試者施用或使來自受試者的樣品接觸根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，其中所述疾病優選是堅果過敏，更優選是樹堅果過敏，最優選是澳洲堅...

【專利技術屬性】
技術研發人員：W·聚爾，S·羅韋爾，Y·登諾，
申請(專利權)人：歐蒙醫學診斷技術有限公司，
類型：發明
國別省市：德國,DE