Aphanalide L在制備治療黑色素瘤藥物中的應用制造技術

本發明專利技術公開了Aphanalide?L在制備治療黑色素瘤藥物中的應用，屬于藥物領域。研究發現Aphanalide?L可顯著抑制黑色素瘤細胞A375生長，且細胞數與Aphanalide?L濃度呈依賴性下降，可以進一步研究開發成制備治療黑色素瘤的藥物。

The use of Aphanalide and L in the preparation of drugs for melanoma

The invention discloses a Aphanalide L in preparation for the application of melanoma drugs, belonging to the field of medicine. The study found that Aphanalide L could significantly inhibit the growth of A375 melanoma cells, and the cell number and Aphanalide L concentration dependent decrease, can be further developed into the preparation of a medicament for treating melanoma.

【技術實現步驟摘要】
AphanalideL在制備治療黑色素瘤藥物中的應用
本專利技術涉及化合物AphanalideL的新用途，具體涉及AphanalideL在制備治療黑色素瘤藥物中的應用。
技術介紹
YaoZhang等人首次分離純化出化合物AphanalideL，并將成果發表在著名天然產物雜志JournalofNaturalProduct上(BioactiveTerpenoidsfromtheFruitsofAphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013，76，1191-1195)。目前尚未有該化合物關于治療黑色素瘤的活性報道。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種AphanalideL的醫藥用途。上述目的是通過如下技術方案實現的：AphanalideL在制備治療黑色素瘤藥物中的應用，所述AphanalideL化學結構式如下，進一步地，所述黑色素瘤為黑色素瘤A375。附圖說明圖1：BrdU免疫熒光檢測細胞增殖結果。具體實施方式下面結合實施例進一步說明本專利技術的實質性內容。實施例1：AphanalideL的分離制備及結構確證AphanalideL的制備方法同文獻報道的制備方法(BioactiveTerpenoidsfromtheFruitsofAphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013，76，1191-1195)。結構確證：白色無定形粉末，分子式為C30H40O10，不飽和度為11。核磁共振氫譜數據δH(ppm，DMSO-d6，500MHz)：H-1(4.95，d，J＝7.5)，H-2(2.86，dd，J＝16.0，7.5)，H-2(3.47，d，J＝16.0)，H-5(2.15，d，J＝13.0)，H-6(1.70，m)，H-6(1.89，Signaloverlapped)，H-7(4.33，t，J＝2.0)，H-9(2.65，d，J＝4.0)，H-11(3.47，d，J＝4.0)，H-12(3.64，dd，J＝6.0，4.0)，H-15(3.22，Signaloverlapped)，H-16(1.69，Signaloverlapped)，H-16(1.95，Signaloverlapped)，H-17(2.53，dd，J＝11.0，6.0)，H-18(0.80，s)，H-19(1.47，s)，H-21(7.31，s)H-22(6.44，d，J＝1.0)，H-23(7.38，t，J＝1.5)，H-28(1.16，s)，H-29(1.37，s)，H-30(1.09，s)，11-OH(4.89，d，J＝4.0)，12-OH(4.88，d，J＝6.0)，1-OAc(1.85，s)，7-OAc(2.07，s)；核磁共振碳譜數據δC(ppm，DMSO-d6，125Hz)：71.6(CH，1-C)，34.2(CH2，2-C)，169.1(C，3-C)，84.8(C，4-C)，44.3(CH，5-C)，26.0(CH2，6-C)，73.6(CH，7-C)，44.4(C，8-C)，40.1(CH，9-C)，34.9(C，10-C)，75.6(CH，11-C)，81.3(CH，12-C)，45.1(C，13-C)，72.1(C，14-C)，55.8(CH，15-C)，32.4(CH2，16-C)，39.3(CH，17-C)，13.2(CH3，18-C)，16.1(CH3，19-C)，124.0(C，20-C)，140.5(CH，21-C)，113.1(CH，22-C)，141.2(CH，23-C)，33.9(CH3，28-C)，22.6(CH3，29-C)，20.7(CH3，30-C)，169.0(C，1-OAc)，20.3(CH3，1-OAc)，169.1(C，7-OAc)，20.8(CH3，7-OAc)。結構確證數據與文獻報道一致，因此可以確定本專利技術制備的化合物即為文獻報道的AphanalideL。實施例2：AphanalideL的藥理作用試驗一、材料和儀器人A375黑色素瘤細胞株由第三軍醫大學贈。AphanalideL自制，制備方法見實施例1，HPLC歸一化純度大于98％。DMEM培養基、0.25％胰酶購自美國Gibco公司。MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽；四甲基偶氮唑藍)、DMSO(二甲基亞砜)、BrdU購自美國Sigma公司。鼠抗BrdU多克隆抗體購自美國ABcam公司。山羊抗鼠二抗購自美國Cellsignaling公司。AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒購自美國Promega公司。恒溫CO2培養箱，普通冰箱，-80度冰箱均為美國Forma公司產品。超凈工作臺(中國蘇州凈化工程公司)。倒置顯微鏡，倒置熒光顯微鏡(olympus公司)。電熱恒溫培養箱(中國上海躍進醫療器械廠)。自動酶標儀(日本Wako公司)。紫外分光光度儀(美國Beckman公司)。J6-HC高速離心機(美國Beckman公司)。低溫微量離心機(德國Eppendorf公司)。振蕩搖床(美國Forma公司)。二、試驗方法1、細胞培養1.1細胞復蘇將凍存在液氮罐中的A375黑色素瘤細胞取出，迅速放入37℃的溫水中，輕輕搖動使其盡快融化(大約lmin)。然后吸出細胞懸液，加入到已加有2mL培養基的離心管中，輕輕吹打混勻，800r/min，離心5min，棄去上層培養基。用含有10％FBS和1％的青霉G/鏈霉素的DMEM培養基8mL制成細胞懸液后，接種至10cm培養盤中。然后置于5％CO2、37℃恒溫培養箱中進行培養。1.2細胞傳代顯微鏡下觀察細胞融合度達80％-90％時即可進行傳代。先用2mLPBS洗滌細胞2次，然后加入0.25％的胰酶lmL。輕輕水平搖動培養盤，使消化液能覆蓋細胞的表面，然后置于37℃溫箱中消化約lmin。置于顯微鏡下見細胞變圓回縮，然后迅速加入1mL含有FBS的培養基終止消化。輕輕吹打至細胞分散均勻，然后根據細胞密度按照1:2或1:3傳代，重新接種于新的培養盤中，置于5％CO2、37℃恒溫培養箱中培養。1.3細胞凍存取1盤處于對數生長期的細胞，胰酶消化并收集到離心管中，1000r/min離心5min，棄上清。然后加入lmL凍存液，輕輕吹散細胞制成細胞懸液，將細胞懸液加入到1.5mL的凍存管中。在凍存管上標明細胞的名稱，保存時間，保存者的姓名。先將凍存管放入4℃冰箱，放置約30min。接著置于-20℃冰箱，放置約2h。然后放于-80℃超低溫冰箱中放置過夜。第二天將凍存的細胞置于液氮罐中長期保存。2、細胞計數法繪制細胞生長曲線(1)取對數生長期A375黑色素瘤細胞，計數，調整細胞密度為2×104/mL。(2)將細胞懸液接種于12孔板中，1.5mL/孔。(3)12h后，待細胞貼壁，換1mL無血清DMEM培養基，并分別用5μmol/LAphanalideL和DMSO(對于DMSO稀釋的AphanalideL，控制DMSO濃度在1/1000以下，確保對細胞無害)處理，每組細胞設3個平行孔，置于5％C02、37℃恒溫培養箱中進行培養。(4)分別于0h、24h、48h、72h、96h終止培養，收集各組細胞，加入0.25％胰蛋白酶消化，離心，重懸本文檔來自技高網...

【技術保護點】
Aphanalide?L在制備治療黑色素瘤藥物中的應用，所述Aphanalide?L化學結構式如下，

【技術特征摘要】
1.AphanalideL在制備治療黑色素瘤藥物中的應用，所述AphanalideL化學結構式如下，2.根據權...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：溫州高新技術產業開發區聚智匯科技信息咨詢服務中心，
類型：發明
國別省市：浙江,33